ＨＬＡ高分辨基因测序试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤：（１）按照常规技术提取待测基因组ＤＮＡ，使用ＰＣＲ扩增引物扩增所要分析的目的基因片段：ＨＬＡ－Ａ的２，３，４外显子，ＨＬＡ－Ｂ的２，３，４外显子和ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点２外显子；（２）使用测序引物对步骤（１）所得ＰＣＲ产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；由于本发明专利技术ＨＬＡ基因测序试剂盒以及测试条件的优化组合，有效地扩增ＨＬＡ－Ａ，Ｂ位点的２，３，４外显子和ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点２外显子，并对相应外显子进行测序，因此在进一步进行分型时，能够避免当某几个等位基因核苷酸位于扩增区域之外时无法进行有效分型的问题，提高了对ＨＬＡ基因分型的分辨率和精确性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤：　　（１）按照常规技术提取待测基因组ＤＮＡ，使用ＰＣＲ扩增引物扩增所要分析的目的基因片段；　　（２）使用测序引物对步骤（１）所得ＰＣＲ产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；　　其特征在于，其中，步骤（１）中所述目的基因片段包括ＨＬＡ－Ａ的２，３，４外显子，ＨＬＡ－Ｂ的２，３，４外显子和ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点２外显子；　　相应的ＰＣＲ扩增引物对包括引物和ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点的第２外显子测序引物；　　所述ＨＬＡ－Ａ位点的第２外显子测序引物包括：　　Ａ２Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１６：　　ＣＧＧＧＧＡＧＡＡＧＣＡＡＳＧＧ；　　Ａ２Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１７：　　ＣＧＧＡＣＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＴＧ；　　所述ＨＬＡ－Ａ位点的第３外显子测序引物包括：　　Ａ３Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１８：　　ＧＧＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＡＧＴＴＴＡＧＧＣ；　　Ａ３Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１９：　　ＴＴＧＴＣＴＣＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＧＧ；　　所述ＨＬＡ－Ａ位点的第４外显子测序引物包括：　　Ａ４Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２０：　　ＧＧＴＧＴＣＣＴＧＴＣＣＡＴＴＣＴＣＡＡＧ；　　Ａ４Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２１：　　ＣＡＧＡＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴ；　　所述ＨＬＡ－Ｂ位点的第２外显子测序引物包括：　　Ｂ２Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２２：　　ＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＣＴＣＣＡＴ；　　Ｂ２Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２３：　　ＧＧＧＧＡＧＴＣＧＴＧＡＣＣＴＧＣ；　　所述ＨＬＡ－Ｂ位点的第３外显子测序引物包括：　　Ｂ３Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２４：　　ＧＧＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＣＡＣ；　　Ｂ３Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２５：　　ＧＧＣＧＡＣＡＴＴＣＴＡＧＣＧＣ；　　所述ＨＬＡ－Ｂ位点的第４外显子测序引物包括：　　Ｂ４Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２６：　　ＡＧＡＴＧＣＡＡＡＧＣＧＣＣＴＧＡＡ；　　Ｂ４Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２７：　　ＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＡ；　　所述ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点的第２外显子测序引物包括：　　Ｍ１３Ｆ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２８：　　ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴ；　　Ｍ１３Ｒ，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２９：　　ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣ；　　Ｃｏｄｏｎ　８６，ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．３０：　　ＣＴＧ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱桥成，
申请(专利权)人：苏州大学，苏州大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]