【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物应用技术和生物，具体涉及一种斑马鱼肠道氧分压的检测方法。
技术介绍
1、肠道氧分压是重要的肠道生理指标，对于调节肠道健康和维持肠道稳态具有重要的意义。检测肠腔内的氧气是技术难点，已有肠道组织氧含量的检测方法包括氧气微电极、外源性缺氧标记物哌莫硝唑染色、电子顺磁共振血氧仪、电子传感器胶囊。其中电子顺磁共振血氧仪和电子传感器胶囊对设备要求高，不适用于针对实验动物的科学研究。对于鱼类肠道氧分压的检测，已有研究使用氧气微电极和外源性缺氧标记物哌莫硝唑组织染色方法检测斑马鱼肠道组织氧分压。然而，氧气微电极较难精准控制检测部位，对于不同组别实验动物之间的数据比对存在一定的难度；利用肠道组织染色的方法难以对肠道氧分压进行定量检测和组间定量比对。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的主要问题是如何检测斑马鱼肠道氧分压。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于检测斑马鱼肠道氧分压的复合菌剂。
3、本专利技术提供的用于检测斑马鱼肠道氧分压的复合菌剂的活性成分由大肠杆菌a和大肠杆菌b组成，所述大肠杆菌a为兼性好氧的大肠杆菌，所述大肠杆菌b为所述大肠杆菌a的有氧呼吸缺陷突变体；所述大肠杆菌a含有质粒a，所述质粒a是表达抗生素a抗性基因的质粒；所述抗生素a和抗生素b为两种不同的抗生素。
4、上述复合菌剂中，所述兼性好氧的大肠杆菌与有氧呼吸缺陷突变体大肠杆菌的cfu配比为1：1。
5、上述复合菌剂中，所述兼性好氧的大肠杆菌含有质
6、上述复合菌剂中，所述有氧呼吸缺陷突变体大肠杆菌含有质粒b，所述质粒b为具有卡那霉素和氯霉素双重抗性质粒，可为突变体大肠杆菌cfu计数提供氯霉素抗性选择。
7、在一个具体的实施例中，上述复合菌剂中所述兼性好氧的大肠杆菌为大肠杆菌nissle 1917(简称野生型ecn)。
8、在一个具体的实施例中，上述复合菌剂中所述有氧呼吸缺陷突变体大肠杆菌为大肠杆菌nissle 1917的cydab基因突变体(有氧呼吸缺陷突变体)(简称突变型ecn)。
9、本专利技术还提供了一种检测斑马鱼肠道氧分压的产品，所述产品含有前文所述的复合菌剂。
10、本专利技术还提供了一种用于检测斑马鱼肠道氧分压的方法，所述方法包括利用前文所述的复合菌剂接种至斑马鱼肠道中，取所述斑马鱼的肠道内容物，测定斑马鱼肠道中所述大肠杆菌a丰度和所述大肠杆菌b丰度的比值，比值大的斑马鱼肠道氧分压大于或候选大于比值小的斑马鱼肠道氧分压。
11、所述体外培养包括用含有前文所述的复合菌剂中的所述抗生素a的培养基进行培养和用含有前文所述的复合菌剂中的所述抗生素b的培养基进行培养。
12、所述复合菌剂在肠道中丰度的比值以竞争系数(competition index,ci)表征。
13、本专利技术中，利用兼性好氧的野生型大肠杆菌e.coli nissle 1917(野生型ecn)与e.coli nissle 1917的cydab基因突变体(有氧呼吸缺陷突变体)(突变型ecn)同时转接至斑马鱼肠道中。突变型ecn无法利用肠道中的氧气进行有氧呼吸，因此，斑马鱼肠道内氧分压水平测定标准为：若野生型ecn相比有氧呼吸缺陷突变型ecn具有更强的生长优势，则肠道氧分压高；若野生型ecn相比有氧呼吸缺陷突变型ecn生长优势减弱，则肠道氧分压低。
14、上述方法中，所述的野生型大肠杆菌与有氧呼吸缺陷突变型大肠杆菌的的接种比例为：1：1。
15、斑马鱼育种的方法，包括按照前文所述的方法鉴别或辅助鉴别雌性斑马鱼肠道氧分压，选择所述比值大的雌性斑马鱼的卵进行育种。
16、所述育种目的包括培育肠道氧分压高的斑马鱼。
17、前文所述复合菌剂或所述的产品在检测斑马鱼肠道氧分压中的应用也属于本专利技术要求保护的范围。
18、本专利技术还提供了前文所述检测斑马鱼肠道氧分压的方法在检测斑马鱼肠道氧分压中的应用。
19、本专利技术还提供了用于鉴别或辅助鉴别饲料对斑马鱼肠道氧分压的影响的方法，所述方法包括：
20、1)用对照饲料和待测饲料分别饲喂斑马鱼，分别得到对照饲料组斑马鱼和待测饲料组斑马鱼；
21、2)将前文所述的复合菌剂分别接种至对照饲料组斑马鱼和待测饲料组斑马鱼中，取所述斑马鱼的肠道内容物，得到离体的斑马鱼肠道内容物，体外培养所述离体的斑马鱼肠道内容物中的微生物得到微生物培养物，测定所述待测饲料组和所述对照饲料组斑马鱼肠道的微生物培养物中所述大肠杆菌a丰度和所述大肠杆菌b丰度的比值，根据所述对照饲料组比值和所述待测饲料组比值的大小确定待测饲料对斑马鱼肠道氧分压的影响。
22、根据对照饲料组比值和待测饲料组比值的大小确定待测饲料对斑马鱼肠道氧分压的影响包括所述对照饲料组比值与所述待测饲料组比值有差异，待测饲料对斑马鱼肠道氧分压有影响，所述对照饲料组比值与所述待测饲料组比值无差异，待测饲料对斑马鱼肠道氧分压有影响。
23、前文所述复合菌剂、所述产品、或所述的方法或应用中，所述斑马鱼为斑马鱼成鱼或斑马鱼幼鱼。
24、本专利提供一种斑马鱼肠道氧分压测量方法，能够实现肠道氧分压的相对定量测定。利用兼性好氧的野生型大肠杆菌e.coli nissle 1917(野生型ecn)与e.coli nissle1917的cydab基因突变体(突变型ecn)同时转接至斑马鱼肠道中。突变型ecn无法利用肠道中的氧气进行有氧呼吸，因而在肠道氧分压高时，野生型ecn相比突变型ecn具有更强的生长优势；在肠道氧分压低时，野生型ecn相比突变型ecn的生长优势减弱。因而，可以通过野生型ecn与突变型ecn在肠道中丰度的比值(野生型ecn/突变型ecn，该比值以竞争系数(competition index,ci)表征)来对斑马鱼肠道内氧分压水平进行相对定量测定。本检测方法利用大肠杆菌定量测定斑马鱼肠道氧分压，能够为斑马鱼及其他鱼类肠道氧分压的相关研究提供方法学支撑。
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1.用于检测斑马鱼肠道氧分压的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂的活性成分由大肠杆菌A和大肠杆菌B组成，所述大肠杆菌A为兼性好氧的大肠杆菌，所述大肠杆菌B为所述大肠杆菌A的有氧呼吸缺陷突变体；所述大肠杆菌A含有质粒A，所述质粒A是表达抗生素A抗性基因的质粒；所述大肠杆菌B含有质粒B，所述质粒B是表达抗生素B抗性基因的质粒；所述抗生素A和抗生素B为两种不同的抗生素。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述大肠杆菌A为向大肠杆菌Nissle1917中导入所述质粒A得到的重组大肠杆菌；所述大肠杆菌B为向大肠杆菌Nissle 1917的cydAB基因突变体导入所述质粒B得到的重组大肠杆菌。
3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于，所述兼性好氧的大肠杆菌与有氧呼吸缺陷突变体的大肠杆菌的CFU配比为1：1。
4.一种检测斑马鱼肠道氧分压的产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1-3任一所述的复合菌剂。
5.用于检测斑马鱼肠道氧分压的方法，其特征在于，所述方法包括利用权利要求1-3任一所述的复合菌剂接种至斑马鱼肠道中，取所述
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述体外培养包括用含有权利要求1-3任一所述的复合菌剂中的所述抗生素A的培养基进行培养和用含有权利要求1-3任一所述的复合菌剂中的所述抗生素B的培养基进行培养。
7.权利要求1-3中任一所述的复合菌剂或权利要求4所述的产品在检测斑马鱼肠道氧分压中的应用。
8.权利要求5-6任一所述的方法在检测斑马鱼肠道氧分压中的应用。
9.用于鉴别或辅助鉴别饲料对斑马鱼肠道氧分压的影响的方法，其特征在于，所述方法包括：1)用对照饲料和待测饲料分别饲喂斑马鱼，分别得到对照饲料组斑马鱼和待测饲料组斑马鱼；
10.权利要求1-3中任一所述的复合菌剂、权利要求4所述的产品、或权利要求5或6所述的方法或权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述斑马鱼为斑马鱼成鱼或斑马鱼幼鱼。
...【技术特征摘要】
1.用于检测斑马鱼肠道氧分压的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂的活性成分由大肠杆菌a和大肠杆菌b组成，所述大肠杆菌a为兼性好氧的大肠杆菌，所述大肠杆菌b为所述大肠杆菌a的有氧呼吸缺陷突变体；所述大肠杆菌a含有质粒a，所述质粒a是表达抗生素a抗性基因的质粒；所述大肠杆菌b含有质粒b，所述质粒b是表达抗生素b抗性基因的质粒；所述抗生素a和抗生素b为两种不同的抗生素。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述大肠杆菌a为向大肠杆菌nissle1917中导入所述质粒a得到的重组大肠杆菌；所述大肠杆菌b为向大肠杆菌nissle 1917的cydab基因突变体导入所述质粒b得到的重组大肠杆菌。
3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于，所述兼性好氧的大肠杆菌与有氧呼吸缺陷突变体的大肠杆菌的cfu配比为1：1。
4.一种检测斑马鱼肠道氧分压的产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1-3任一所述的复合菌剂。
5.用于检测斑马鱼肠道氧分压的方法，其特征在于，所述方法包括利用权利要求1-3任一所述的复合菌剂接种至斑马鱼肠道中，取所述斑马鱼的...
【专利技术属性】
技术研发人员：周志刚，梁慧，冉超，丁倩雯，张震，杨雅麟，药园园，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：
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