【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生化体外诊断试剂，尤其涉及一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
1、肌红蛋白是肌肉中储存和运载氧的蛋白质，由一条多肽链和一个辅基血红素构成，相对分子质量约为16700kd，含153个氨基酸残基，生理功能上有助于肌细胞将氧转运至线粒体。当心肌或骨骼肌细胞膜通透性增高时，肌红蛋白易从细胞浆逸脱进入血循环，并经肾脏排泄。因此肌红蛋白是反映骨骼肌、心肌受损有其程度的灵敏指标。
2、急性心肌梗塞时发生心肌缺血坏死，细胞通透性增加，肌红蛋白释放进入血循环，12h内患者肌红蛋白均升高，幅度大于各种心肌酶，且发病1-3小时血中即可检出，因此肌红蛋白也是急性心肌梗塞最早的诊断学指标，血清升高的幅度和持续时间与梗死面积及心肌坏死程度呈正相关。另外，肌红蛋白半衰期短(15min)，胸痛发作后6-12h不升高，有助于排除心肌梗塞的诊断，是筛查心肌梗塞的有效指标。因此，高灵敏度的肌红蛋白的制备在诊断心肌损伤疾病方面的及时性、进程、预后及治疗效果方面具有广泛的临床意义。
3、目前通常采用乳胶增强透射比浊法、elisa法和胶体金法等方法测定。elisa法适合大批量制备，但重复性差，操作复杂；但灵敏度不高，难以实现定量等缺点限制了这种方法的使用；现有的乳胶免疫比浊试剂盒灵敏度低，线性差，价格昂贵。
4、因此，建立一种制备时间尽量短，并且除了能在实验室进行检测外，还能够进行床旁检测，同时能定量测定myo的制备方法，从而为临床提供准确的诊断依据，是十分必要的。
1、本专利技术的目的在于提供一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒及制备方法，旨在解决现有肌红蛋白测定试剂盒灵敏度较低的问题。
2、为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，包括以下步骤：
3、准备制备试剂盒的原料；
4、基于所述原料分别制备第一检测试剂、第二检测试剂和标准品；
5、将所述第一检测试剂、所述第二检测试剂和所述标准品封盒包装，得到试剂盒。
6、其中，所述制备第一检测试剂的具体方式：
7、基于所述原料按比例称取十二水磷酸氢二钠20-30份、二水磷酸二氢钠5-11份、氢氧化钠2-8份、氯化钠2-4份、吐温3-8份、柠檬酸4-10份、聚乙二醇1-4份和叠氮化钠1-2份，得到第一检测试剂原料；
8、将所述第一检测试剂原料依次进行纯化水定容和混合操作，得到所述第一检测试剂。
9、其中，所述制备第二检测试剂关键原料抗体致敏乳胶的具体方式：
10、用20mm～40mm的mes缓冲液将10％含固量的胶乳稀释至2.5％含固量，搅拌10～20min，并按1:2比例加入活化剂1-乙基-碳酰二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺，搅拌30min，得到活化溶液；
11、向所述活化溶液内加入myo抗体，搅拌2h后进行抗体的包被，得到包被溶液；
12、向所述包被溶液加入含牛血清白蛋白的封闭剂，封闭2h，得到封闭溶液；
13、以12000rpm，4℃的条件对所述封闭溶液离心30min，得到离心溶液，并利用所述第二检测试剂稀释液重悬后对所述离心溶液超声100s，再所述第二检测试剂进行稀释，最后加入保护剂，得到所述抗体致敏乳胶。
14、其中，所述制备第二检测试剂的具体方式：
15、基于所述原料按比例称取十二水磷酸氢二钠20-30份、二水磷酸二氢钠4-8份、柠檬酸1-5份、氢氧化钠5-10份、叠氮化钠1-2份、吐温5-10份、牛血清白蛋白10-20份和甘油2-6份，得到第二检测试剂稀释液原料；
16、将所述第二检测试剂稀释液原料依次进行纯化水定容和混合操作，得到所述第二检测试剂稀释液，将上述抗体致敏胶乳和第二检测试剂稀释液按一定比例混合，最终得到第二检测试剂。
17、其中，所述制备校准品的具体方式：
18、基于所述原料按比例十二水磷酸氢二钠10-20份、二水磷酸二氢钠5-10份、氢氧化钠2-5份、氯化钠2-5份、叠氮化钠1-2份、牛血清白蛋白5-10份、甘油5-10份、聚乙烯吡咯烷酮k-302-5份、edta·2na 2-5份和肌红蛋白抗原，得到校准品稀释液原料；
19、将所述校准品原料依次进行纯化水定容和混合操作，得到所述校准品。
20、第二方面，本专利技术该提供了一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒，包括第一检测试剂、第二检测试剂、标准品和外壳，所述第一检测试剂、所述第二检测试剂和标准品分别设置于所述外壳内。
21、本专利技术的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，准备制备试剂盒的原料；基于所述原料分别制备第一检测试剂、第二检测试剂和标准品；将所述第一检测试剂、所述第二检测试剂和所述标准品封盒包装，得到试剂盒，该试剂盒测试肌红蛋白浓度为100ng/ml的样本，吸光度变化≥0.0200，分析灵敏度较传统试剂盒测定的灵敏度更高，该试剂盒制备方法简便、性能稳定、灵敏度高、抗干扰强、线性好，可广泛用于各种生化仪配套使用，通用性强，解决现有肌红蛋白测定试剂盒灵敏度较低的问题。
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1.一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
4.如权利要求3所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
5.如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
6.一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒，应用于如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的一种双粒径胶乳微球偶联的肌红蛋白检测试剂盒制备方法，其特征在于，
4.如权利要求3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦迎春，肖佳民，苟文来，赵丽珍，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：
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