核酸构建体、表达载体、表达系统、及其应用技术方案

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及核酸构建体、表达载体、表达系统、及其应用。本发明专利技术提供的核酸构建体，不包括hCMV MIE启动子中的上游调控序列和核因子1结合位点簇序列，作为表达载体的启动子元件，构建重组蛋白表达载体和表达系统，提高重组蛋白稳定表达水平；本发明专利技术进一步优化内含子A序列，替换本发明专利技术提供核酸构建体形成的截短启动子的内含子A序列，同样能够提高重组蛋白稳定表达水平；并且优选的如SEQ ID NO：3所述的内含子A序列，与包含本发明专利技术提供的核酸构建体作为截短启动子的表达载体构建的CHO表达系统比较，能够更进一步提高重组蛋白稳定表达水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及核酸构建体、表达载体、表达系统、及其应用。

技术介绍

1、自第一个基因工程药品在1982年问市以来，生物药物在全球医药产业中的市场比重一直持续快速增长。通常每年都会有20多种新产品获得fda批准，而且其中大部分是重组蛋白药物(包括重组抗体)。全球生物制药的市场销售额在2018年就已高达2372亿美元，预计到2024年将升至3890亿美元。目前生产重组蛋白首选的表达系统通常是哺乳动物细胞表达系统。这是因为对于某些需要特定的翻译后修饰(如糖基化)的复杂大分子蛋白，只有在哺乳动物细胞表达系统中才能正确形成。其中，近89％的单克隆抗体药物是在cho细胞中生产的。

2、近年来，通过对细胞系改造、无血清悬浮培养基的成分优化、上下游生产工艺优化和载体改造等方面的研究，cho细胞系统生产重组蛋白的能力不断增强，已能够达到10g/l的产量。其中，高效表达载体的构建对重组蛋白的表达水平和产品质量具有重要影响。既能够有效地缩短细胞系开发的时间，同时又能显著提高蛋白产量。研究表明，通过对表达载体上的启动子等调控元件进行改造，可以有效提高本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.核酸构建体，其特征在于，包括hCMV立即早期启动子的增强子序列、RNA聚合酶II启动子序列、第一个外显子序列和内含子A序列；不包括hCMV立即早期启动子的上游调控序列和核因子1结合位点簇序列。

2.如权利要求1所述的核酸构建体，其特征在于，所述增强子序列包括Spl(CCGCCC)、CRE/ATF(TGACGTCA)和NF-κB(GGGACTTTCC)转录因子调控序列。

3.如权利要求2所述的核酸构建体，其特征在于，上游调控序列和核因子1结合位点簇序列如SEQ ID NO：1所示。

4.如权利要求1～3任一项所述的核酸构建体，其特征在于，所述内含子A...

【技术特征摘要】

1.核酸构建体，其特征在于，包括hcmv立即早期启动子的增强子序列、rna聚合酶ii启动子序列、第一个外显子序列和内含子a序列；不包括hcmv立即早期启动子的上游调控序列和核因子1结合位点簇序列。

2.如权利要求1所述的核酸构建体，其特征在于，所述增强子序列包括spl(ccgccc)、cre/atf(tgacgtca)和nf-κb(gggactttcc)转录因子调控序列。

3.如权利要求2所述的核酸构建体，其特征在于，上游调控序列和核因子1结合位点簇序列如seq id no：1所示。

4.如权利要求1～3任一项所述的核酸构建体，其特征在于，所述内含子a序列如seq idno：3、seq id no：4或seq id no：5所示；

5.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求1～4任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：王天云，郭潇，赵俊玲，徐婷婷，林艳，张玺，孙秋丽，赵春澎，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：