【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术整体涉及可以用于帮助确定或区分受试者的吸烟状况的免疫测定的新型抗体或其抗原结合片段。
技术介绍
1、在所属领域中已提议烟草被加热而不燃烧的气溶胶生成制品。在加热式气溶胶生成制品中，通过加热基材(诸如烟草)来生成气溶胶。研究表明，将烟草加热至低于高温分解的温度和燃烧温度有可能减少或消除香烟烟雾中存在的一些有毒物质。通常在低于300℃的温度下加热不燃烧烟草足以释放尼古丁，但不足以引起显著的高温分解。在这些温度下，气溶胶组合物变为比香烟烟雾中所存在的更简单的物质。由于烟草的燃烧形成了香烟烟雾中的很多有害和潜在有害成分(hphc)。因此，降低温度和加热不燃烧烟草可以减少或消除hphc。
2、已知加热式气溶胶生成制品包括电加热式气溶胶生成制品，以及其中通过从可燃燃料元件或热源到物理上独立的气溶胶形成材料的热传递而生成气溶胶的气溶胶生成制品。这些所谓的“加热不燃烧”产品为吸烟者提供了常规香烟的替代品，并且可以在仍然提供尼古丁同时减少从烟草中释放的有害化学物质。一种此类烟草加热系统是iqos(ths)，它含有复杂的电子器件，用于加热专门设计的加热烟草单元。ths将烟草加热成足以释放含尼古丁的烟草蒸气，但不会燃烧烟草。香烟中的烟草在超过600℃的温度处燃烧，产生含有大量有害化学物质的烟雾。但是ths将烟草加热至低得多的温度，低达350℃，且不会燃烧、起火、产生灰分或烟雾。由于烟草被加热而不是燃烧，因此与香烟烟雾相比，有害化学物质的水平显著降低。
3、wo2018/211126中描述了确定或区分受试者的吸烟状况的
4、wo2018/211126中描述了可以用作烟草烟雾暴露生物标志物的各种代谢物，包括可替宁和cema。
5、本领域需要可以以高特异性和灵敏度检测cema的试剂，尤其是用于免疫测定形式的试剂。此类试剂应易于制造，具有良好的溶解度和扩散性，并且能够特异性地和灵敏地检测复杂生物学样品(诸如尿液)中的cema。本专利技术旨在解决这种需要。
技术实现思路
1、本专利技术至少部分基于以下出乎意料的发现，即一种新型缀合物是引发强烈的免疫反应以获得抗cema抗体或其抗原结合片段的极好的缀合物，所述缀合物包含式[ii]化合物：
2、
3、其中n选自0至4(即，0、1、2、3或4)，并且每个r独立地选自h或c1至c6烷基，所述化合物通过接头与免疫原性运载体偶联。cema通过接头与免疫原性运载体的缀合改善了免疫系统的识别和抗体的产生。通常，这种所谓的“抗半抗原抗体产生”可以产生靶标亲和力有限的试剂。然而，有利地，本公开的抗体或抗原结合片段——尤其是scfv形式——即使在包括尿液的复杂生物学样品中也具有对cema的高灵敏度和特异性。在噬菌体展示筛选期间获得的96个反应性克隆中，鉴定出28个阳性克隆。从这28个阳性克隆中，收获了产生8个scfv的8个序列，这些scfv在免疫测定中进行测试。在这8个scfv中，基于它们对cema的极好灵敏度和特异性选择出3个，这三个在本文中称为“scfv g4”、“scfv b11”和“scfv e6”或者“g4”、“b11”和“e6”。
4、本专利技术的方面和实施方案
5、在一个方面，公开了一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段：(i)能够结合至n-乙酰基-s-[2-羧乙基]-l-半胱氨酸(cema)并且；(ii)能够结合至包含式[ii]化合物的缀合物：
6、
7、其中n选自0至4(即，0、1、2、3或4)，并且每个r独立地选自h或c1至c6烷基；优选地，式[i]化合物：
8、
9、其中所述式[ii]化合物或所述式[i]化合物通过接头与免疫原性运载体偶联，适当地，其中所述接头通过胺基团与所述式[i]化合物偶联。
10、适当地，免疫原性运载体是蛋白质，优选地牛血清白蛋白或牛甲状腺球蛋白。
11、合适地，接头是乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(egs)或二琥珀酰亚胺基辛二酸酯(dss)。
12、适当地，抗体是单克隆抗体，优选地，其中其抗原结合片段是fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv、rigg或双抗体，更优选地scfv。
13、适当地，抗体或其抗原结合片段不结合至可替宁或甲基丙烯酸2-羟乙酯(hema)或单羟基丁烯基-巯基尿酸(mhbma)或3-羟丙基巯基尿酸(3-hpma)或二羟丁基巯基尿酸(dhbma)。
14、适当地，尿液抑制百分比为20％或更少、10％或更少、5％或更少或者无抑制。
15、适当地，抗体或其抗原结合片段在免疫测定中对尿中cema的检测限为160ng/mlcema。
16、在另一个方面，公开了一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：分别由seq id no:3、seq id no:4和seq id no:5的氨基酸序列组成的vh cdr1、vhcdr2和vh cdr3，以及分别由seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9的氨基酸序列组成的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3；或者分别由seq id no:12、seq id no:13和seq id no:14的氨基酸序列组成的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，以及分别由seq id no:16、seq id no:17和seq id no:18的氨基酸序列组成的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3；或者分别由seq idno:21、seq id no:22和seq id no:23的氨基酸序列组成的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，以及分别由seq id no:25、seq id no:26和seq id no:27的氨基酸序列组成的vl cdr1、vlcdr2和vl cdr3。
17、适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:2或11或20的氨基酸序列组成的vh氨基酸序列。
18、适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:6或15或24的氨基酸序列组成的vl氨基酸序列。
19、适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:2的氨基酸序列组成的vh氨基酸序列和由seq id no:6的氨基酸序列组成的vl氨基酸序列；或者
20、适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:11的氨基酸序列组成的vh氨基酸序列和由seq id no:15的氨基酸序列组成的vl氨基酸序本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段：
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫原性运载体是蛋白质，优选地，牛血清白蛋白或牛甲状腺球蛋白；并且/或者
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体，优选地其中所述其抗原结合片段是Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv、Fv、rIgG或双抗体，更优选地scFv。
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体不结合至可替宁或甲基丙烯酸2-羟乙酯(HEMA)或单羟基丁烯基-巯基尿酸(MHBMA)或3-羟丙基巯基尿酸(3-HPMA)或二羟丁基巯基尿酸(DHBMA)；并且/或者
5.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID NO:2或11或20的氨基酸序列组成的VH氨基酸序列；并且/或者
7.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID N
8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述其抗原结合片段选自由以下各项组成的组：Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv、Fv、rIgG和双抗体，优选地scFv；更优选地，
9.一种用于确定样品中CEMA的存在或不存在的装置，所述装置包括固定于所述装置的固相上的根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的装置，其中所述装置是便携式侧流免疫测定装置，优选地，浸棒，更优选地，
11.根据权利要求10所述的装置，其中所述缀合物垫包括含根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是经标记的；并且任选地还包含能够结合可替宁的经标记的抗体或其抗原结合片段；或者
12.根据权利要求9至11中任一项所述的装置，其中所述检测区包含固定于其上的CEMA和任选的可替宁。
13.根据权利要求12所述的装置，其中所述CEMA呈根据权利要求1或权利要求2所述的缀合物的形式。
14.一种用于检测样品中的CEMA的方法，所述方法包括使用根据权利要求9至13中任一项所述的装置，或者一种用于检测样品中的CEMA和可替宁的方法，所述方法包括使用根据权利要求9至13中任一项所述的装置。
15.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者根据权利要求9至13中任一项所述的装置用于检测样品中的CEMA的用途。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段：
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫原性运载体是蛋白质，优选地，牛血清白蛋白或牛甲状腺球蛋白；并且/或者
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体，优选地其中所述其抗原结合片段是fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、scfv、fv、rigg或双抗体，更优选地scfv。
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体不结合至可替宁或甲基丙烯酸2-羟乙酯(hema)或单羟基丁烯基-巯基尿酸(mhbma)或3-羟丙基巯基尿酸(3-hpma)或二羟丁基巯基尿酸(dhbma)；并且/或者
5.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:2或11或20的氨基酸序列组成的vh氨基酸序列；并且/或者
7.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含由seq id no:2的氨基酸序列组成的vh氨基酸序列和由seq id no:6的氨基酸序列组成的vl氨基酸序列；或者
8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述其抗原结合片段选自由以下各...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·佛朗西斯，N·伊万诺夫，M·拉罗彻，T·佩拉特，M·塔利卡，
申请(专利权)人：菲利普莫里斯生产公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。