使褪色的病理ＨＥ切片恢复颜色的方法技术

本发明专利技术提供了一种使褪色的病理ＨＥ切片恢复颜色的方法，将褪色的病理ＨＥ切片浸泡于二甲苯中，３～４天后，去除盖玻片和标签纸，再在二甲苯中继续浸泡一天，置于无水酒精中浸泡２小时，再置于新的无水酒精中浸泡３０分钟，然后再用９５％酒精浸泡１０分钟，用自来水冲洗后于枸橼酸溶液中浸泡１０－２０分钟，取出用自来水冲洗约２０分钟，然后进行常规ＨＥ染色。经本发明专利技术方法处理过的褪色的病理ＨＥ切片，颜色鲜艳，红蓝对比鲜明。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物组织染色技术，涉及病理HE染色技术，尤其涉及使褪色的病理HE切片恢复颜色的方法。
技术介绍
病理学教学包括理论教学和实习教学两大部分，二者在教学中的作用相辅相成，平分秋色。在病理学实习教学中，病理常规HE切片是重要的教学工具。对病理学教学切片要求所选病例典型，组织切片应完整、无皱褶、无摺叠、无破损，并且切片染色鲜艳，红蓝对比鲜明，这样的教学切片才能发挥其在教学实践活动中应起的作用。但是，我系的教学切片大多来源于上世纪六、七十年代的尸检标本。随着时间的推移，由于切片的年代久远，在实践中，我们发现一些罕见、少见病例及一些典型的普通疾病病例的病理教学切片褪色，其中主要是苏木素颜色的减退，有的切片的苏木素染色甚至完全褪色，整张切片呈现一片红色，可想而知，这样的切片能有怎样的教学效果。而且，由于现代医疗水平的整体提高和科技的进步，一些普通疾病得到治愈，这种病例标本难以获得，而一些罕见、少见病例的标本已经很难，甚至不可能得到新的标本。探索一种促染方法，改善褪色教学切片的颜色，恢复其鲜艳的红蓝对比颜色，使其发挥正常的教学作用，是本领域面临的一项重要课题。
技术实现思路
本专利技术的任务是提供一种使褪色的病理HE切片恢复颜色的方法。实现本专利技术任务的技术方案是：本专利技术提供的使褪色的病理HE切片恢复颜色的方法，包括以下步骤：步骤一：用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片胶；步骤二：依次用无水酒精和95％酒精浸泡切片以置换切片组织中的二甲苯，然后用自来水冲洗切片；步骤三：将切片置于枸橼酸溶液中浸泡作染色前预处理，然后再用自来水冲洗切片；步骤四：对切片进行常规HE染色。步骤一所述的用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片胶的具体方法是：将褪色的病理HE切片浸泡于二甲苯中，3～4天后，去除盖玻片，如果有标签纸，同时去除标签纸，再在二甲苯中继续浸泡一天。步骤二所述的依次用无水酒精和95％酒精浸泡切片以置换切片组织中的二甲苯，然后用自来水冲洗切片的具体方法是：将切片置于无水酒精中浸泡2小时，取出切片放入新的无水酒精中继续浸泡30分钟，将切片取出后再放入95％酒精中浸泡10分钟，然后用自来水冲洗切片。步骤三所述的将切片置于枸橼酸溶液中浸泡作染色前预处理，然后再用自来水冲洗切片的具体方法是；将切片置于0.08％枸橼酸溶液中浸泡10-20分钟，然后将切片取出-->用自来水冲洗10-20分钟。步骤四所述的对切片进行常规HE染色的具体方法是：将切片在苏木素染色液中浸泡10分钟，取出切片，用自来水冲洗，然后用1％盐酸酒精分化，再用自来水冲洗；然后将切片浸泡于0.5％氨水中30秒钟返蓝，用自来水冲洗切片，再将切片于0.5％水伊红染色液中浸泡5分钟，用自来水洗切片，然后将切片浸泡于无水酒精中2分种；取出切片，将其浸泡于新的无水酒精中1分钟；取出切片，将该切片置于新的无水酒精中浸泡1min；取出切片，再将该切片浸泡于二甲苯透明剂中2～5分钟，然后取出切片，置于通风橱中晾干，用中性树胶封片。其中所述的用1％盐酸酒精分化的具体方法是：将切片在1％盐酸酒精溶液中浸泡30秒钟至1分种，褪去苏木素不应着色部分的颜色，使本来苏木素应该着色的成分更清晰；其中所述的将切片于0.5％水伊红染色液中浸泡5分钟后用自来水洗切片的具体方法是：将切片连同染色架在自来水中提拉数次，每次1至3秒钟。实验资料材料和方法1.材料1.1筛选褪色教学切片：急性肺淤血、肾炎褪色切片，见图1和图2。1.2试剂配制1.2.1Harris苏木素配制：甲液：苏木素(Hematoylin)       1g无水酒精                       10ml乙液：硫酸铝钾                 20g蒸馏水                         200ml将甲、乙两液分别充分溶解(溶解硫酸铝钾时需要加热处理)，然后混合煮沸，缓慢加入氧化汞并搅拌以加速散热，注意：氧化汞加入后，会出现冒泡现象，此时注意防止液体溢出，随即放入冷水浴中冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前每100ml染液中加入4ml冰醋酸。1.2.20.08％枸橼酸：称取枸橼酸0.8g溶于1000ml蒸馏水中，完全溶解即可使用。1.2.30.5％水伊红：称取水溶性伊红5g，溶于1000ml蒸馏水中，充分完全溶解即可使用。1.2.41％盐酸酒精：分别取80％酒精10ml、浓盐酸990ml混匀即可。1.2.50.5％氨水：分别取氨水10ml、蒸馏水990ml混匀即可。2.方法(1)染片步骤：1)脱胶：即将褪色切片上的封片胶用二甲苯溶解，去除盖玻片，然后依次用无水酒精、95％酒精置换切片组织中二甲苯的过程。将褪色切片置于染色架上，浸泡于二甲苯中，3～4天后，去除盖玻片和标签纸，再换新的二甲苯中继续浸泡一天，然后取出切片，置于无水酒精中浸泡2h后，将切片放入新的无水酒精中继续浸泡，30min后，取出切片，放入95％酒精中浸泡10min，然后将切片置于自来水中流水冲洗；2)染色前预处理：即将脱胶后的切片于0.08％枸橼酸中浸泡作染色前预处理，将-->预处理时间设置为10至30min，然后取出切片流水冲洗10～20min；3)常规HE染色。常规HE染色的具体方法是：将待染切片置于苏木素染色液中浸泡10min，取出切片，自来水冲洗；用1％盐酸酒精分化，自来水冲洗；然后将切片浸泡于0.5％氨水中约30sec返蓝，自来水冲洗；将切片浸泡于0.5％水伊红染色液中5min后用自来水洗；然后将切片浸泡于无水酒精中2min；取出切片，将其浸泡于新的无水酒精中1min；取出切片，将其浸泡于新的无水酒精中浸泡1min；取出切片，将其浸泡于二甲苯透明剂中2～5min；然后取出切片，置于通风橱中晾干，中性树胶封片。其中所述的用1％盐酸酒精分化的具体方法是：将切片该溶液中浸泡约30sec～1min，褪去苏木素不应着色部分的颜色，使本来苏木素应该着色的成分更清晰；其中所述的将切片浸泡于0.5％水伊红染色液中5min后用自来水洗的具体方法是：将切片连同染色架在自来水中提拉3至6次，每次2秒。(2)染色分组：将褪色切片按染色前预处理的时间长短分为四组，分别进行染色：A组：切片脱胶后不经染色前预处理，直接进行常规HE染色；B组：切片脱胶后，用0.08％枸橼酸溶液浸泡10min进行染色前预处理，然后取出切片，自来水冲洗10～20min，再按照A组实验方法进行常规HE染色；C组：切片脱胶后，用0.08％枸橼酸溶液浸泡20min进行染色前预处理，然后取出切片，自来水冲洗10～20min，再按照A组实验方法进行常规HE染色；D组：切片用0.08％枸橼酸溶液浸泡30min进行染色前预处理，然后取出自来水冲洗10～20min，再按照A组实验方法进行常规HE染色。实验结果A组不经任何处理直接染色，结果有些细胞根本不着色，即使延长染色时间，着色仍然很差，或者呈现核浆均着色，又不是很明显的蓝色，见图3；B组和C组经枸橼酸处理后，苏木素着色力明显增强，此时特别注意，分化要到位，否则在胞浆可残留有苏木素的颜色，影响伊红的着色，见图4、图5。这两组颜色鲜艳，红蓝对比鲜明。D组：由于在枸橼酸中时间最长，其苏木素着色力也最强，从苏木素染液中取出后，水洗片刻即已呈本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使褪色的病理ＨＥ切片恢复颜色的方法，包括以下步骤：步骤一：用二甲苯溶解褪色的病理ＨＥ切片上的封片胶；步骤二：依次用无水酒精和９５％酒精浸泡切片以置换切片组织中的二甲苯，然后用自来水冲洗切片；步骤三：将切片置于枸橼酸溶液中浸泡作染色前预处理，然后再用自来水冲洗切片；步骤四：对切片进行常规ＨＥ染色。

【技术特征摘要】
1.一种使褪色的病理HE切片恢复颜色的方法，包括以下步骤：步骤一：用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片胶；步骤二：依次用无水酒精和95％酒精浸泡切片以置换切片组织中的二甲苯，然后用自来水冲洗切片；步骤三：将切片置于枸橼酸溶液中浸泡作染色前预处理，然后再用自来水冲洗切片；步骤四：对切片进行常规HE染色。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一所述的用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片胶的具体方法是：将褪色的病理HE切片浸泡于二甲苯中，3～4天后，去除盖玻片，再在二甲苯中继续浸泡一天。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二所述的依次用无水酒精和95％酒精浸泡切片以置换切片组织中的二甲苯，然后用自来水冲洗切片的具体方法是：将切片置于无水酒精中浸泡2小时，取出切片放入新的无水酒精中继续浸泡30分钟，将切片取出后再放入95％酒精中浸泡10分钟，然后用自来水冲洗切片。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤三所述的将切片置于枸橼酸溶液中浸泡作染色前预处理，然后再用自来水冲洗切片的具体方法是；将切片置于0.08％枸橼酸溶液中浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿智玲，倪娟，敖启林，苏铁芬，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]