【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，特别涉及一种纳米材料及其制备方法和应用。
技术介绍
1、脑胶质瘤是一种中枢神经系统最常见的原发性颅内肿瘤，目前脑胶质瘤的治疗策略仍以手术为主，放化疗为辅，但是其治疗效果不容乐观。脑胶质瘤常发生在运动、语言、听觉和视觉中枢，病变组织与正常脑组织之间界限不清，手术切除难以彻底切除病灶并可能导致重要的神经功能缺失，造成严重的后遗症。放化疗作为脑胶质瘤术后的补充治疗，但是化疗容易对正常组织造成伤害和产生耐药性，并且由于血脑屏障限制化疗药物的瘤内渗透，导致脑胶质瘤患者放化疗的临床疗效不理想。
2、肿瘤免疫疗法是利用人体先天免疫系统特异性攻击肿瘤细胞，具有效果好、毒副作用少等优点，它已成为一种新的标准临床治疗方法。然而在实际应用中脑胶质瘤免疫治疗疗效不佳，经研究分析主要原因是受到复杂肿瘤免疫抑制微环境和肿瘤异质性的限制。其中脑胶质瘤严重免疫抑制微环境的原因之一是大量肿瘤相关巨噬细胞(tam)和免疫检查点(ic)的存在。tam分为m2和m1表型。m2巨噬细胞可以通过分泌促肿瘤细胞因子来促进肿瘤血管生成和转移，并抑制免疫细胞(例如树突状细胞(dc)和t细胞)的活化。m1巨噬细胞分泌促炎细胞因子并吞噬微生物，有助于杀菌和抗肿瘤免疫。ic作为免疫系统的调节剂，对于维持自身免疫耐受以及调节外周组织免疫反应的持续时间和程度至关重要。然而这些通路可以被肿瘤“劫持”并持续激活，抑制抗肿瘤免疫，促进肿瘤发生。因此，ics蛋白一直是癌症免疫治疗的主要靶点，目前fda批准的检查点抑制剂可阻断ctla4、pd-1和pd-l1。值得注
3、另外，脑胶质瘤肿瘤异质性非常严重，很容易造成肿瘤细胞的免疫逃逸，因为脑胶质瘤肿瘤细胞容易发生突变，且每个肿瘤细胞携带的肿瘤相关抗原并不相同。单一或几种抗原激活的抗肿瘤免疫反应并不能完全杀死所有肿瘤细胞。当前产生肿瘤抗原相关方法有：直接提取肿瘤相关抗原蛋白、基因工程表达抗原蛋白、化学裂解肿瘤细胞产生抗原、物理方法直接破肿瘤细胞产生肿瘤相关抗原等等。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种纳米材料及其制备方法和应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
3、本专利技术的第一个方面，提出了一种纳米材料，包括外泌体和脂质体；所述外泌体表达免疫检查点，所述外泌体来源于脑胶质瘤细胞；所述脂质体载有i型光敏剂。
4、外泌体(exosome,exo)是一种细胞分泌的小囊泡,其直径在30nm～150nm，脂质双层膜含有cd63、cd81和cd9等蛋白质以及内体膜蛋白flotillin和alix。外泌体由多种细胞类型在血液、脑脊液和尿液等生物液体中分泌。外泌体含有功能性生物分子(蛋白质、脂质、rna和dna)，可以运输至受体细胞，充当细胞间通讯的角色，并在包括肿瘤相关过程在内的各种生理和病理过程中发挥重要作用。外泌体也是优良的药物载体系统，它具有组织渗透深、循环周期长、生物利用度高、跨越生物屏障如血脑屏障(bbb)等优点。本专利技术中，通过脑胶质瘤细胞分泌外泌体，使得外泌体携带有脑胶质瘤细胞所有的肿瘤相关抗原，能激活产生多种肿瘤特异性t细胞，杀死不同亚型的脑胶质肿瘤细胞，避免单一抗原产生抗肿瘤免疫无法杀死肿瘤异质性大的肿瘤细胞，减少甚至避免肿瘤细胞免疫逃逸。表达巨噬细胞免疫检查点的外泌体可以阻断肿瘤细胞免疫检查点与巨噬细胞免疫检查点受体结合，解除巨噬细胞耗竭状态，重塑脑胶质瘤免疫抑制微环境；而脑胶质瘤细胞外泌体作为i型光敏剂的载体，可通过血脑屏障将其递送至脑部肿瘤处，纳米材料中的i型光敏剂通过光动力疗法(pdt)产生的ros将m2巨噬细胞转化为m1巨噬细胞，从而改善肿瘤免疫抑制微环境，并阻断免疫检查点逆转巨噬细胞耗竭，从而增强抗肿瘤能力。通过pdt、免疫检查点和脑胶质瘤细胞外泌体抗原三管齐下重塑肿瘤局部免疫微环境，大大提高癌症免疫治疗的效率，能激活强大的抗脑胶质瘤免疫反应并克服免疫逃逸。
5、在本专利技术的一些实施方式中，所述外泌体与脂质体融合形成纳米颗粒；优选地，所述外泌体修饰在脂质体表面；优选地，所述纳米颗粒的平均水合粒径为195nm～205nm。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述外泌体与脂质体的质量比为1：0.1～10。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述外泌体中免疫检查点阳性的外泌体占比为90％～100％。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述脂质体包括聚合物包载i型光敏剂；所述聚合物与所述光敏剂以非共价方式结合。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述脂质体中，所述聚合物与所述光敏剂的质量比为2～4：1。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述聚合物包括脂聚乙二醇、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸或聚己酸内酯、plga多聚物的至少一种。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述免疫检查点包括siglec-10，sirpα、lilrb2、tcr的至少一种。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述i型光敏剂包括fs、fo、fc、ce6的至少一种。
13、本专利技术的第二个方面，提出了一种所述的纳米材料的制备方法，包括以下步骤：
14、(1)将携带免疫检查点基因的慢病毒载体转入脑胶质瘤细胞中，获得表达免疫检查点的脑胶质瘤细胞，扩大培养后收集细胞上清液，分离获得表达免疫检查点的脑胶质瘤细胞外泌体；
15、(2)将外泌体与脂质体混合，冷冻-熔融后制得所述的纳米材料。
16、在本专利技术的一些实施方式中，步骤(1)中，所述慢病毒载体在阳离子聚合物静电辅助下转入脑胶质瘤细胞中；优选地，所述阳离子聚合物包括聚凝胺、lipofectamine2000的至少一种。
17、在本专利技术的一些实施方式中，步骤(1)中，采用多次离心方式获得外泌体，具体为：将细胞上清液依次在离心力为10000g～15000g下离心25min～45min收集上清液，过滤上清液后，在离心力为100000g～150000g下离心、80～100min，去除上清液，再在离心力为100000g～150000g下离心80～100min后收集沉淀，即为所述的外泌体；优选地，所述多次离心均在2℃～6℃下进行。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述脂质体的制备方法包括以下步骤：将聚合物和i型光敏剂溶解于有机溶剂中，吹打混匀，再通过溶剂挥发法除去有机溶剂，制得所述脂质体。
19、在本专利技术的一些实施方式中，所述有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿的至少一种。
20、在本专利技术的一些实施方式中，步骤(2)中，所述冷本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种纳米材料，其特征在于：包括外泌体和脂质体；所述外泌体表达免疫检查点，所述外泌体来源于脑胶质瘤细胞；所述脂质体载有I型光敏剂。
2.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述外泌体与脂质体的质量比为1：0.1～10。
3.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述外泌体中免疫检查点阳性的外泌体占比为90％～100％。
4.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述脂质体中，所述聚合物与所述光敏剂的质量比为2～4：1。
5.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述免疫检查点包括Siglec-10，SIRPα、LILRB2、Tcr的至少一种。
6.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述I型光敏剂包括Fs、Fo、Fc、Ce6的至少一种。
7.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述外泌体与脂质体融合形成纳米颗粒；所述纳米颗粒的平均水合粒径为195nm～205nm。
8.一种如权利要求1～7任一项所述的纳米材料的制备方法，包括
9.一种药物组合物，包括如权利要求1～7任一项所述的纳米材料和药学上可接受的辅料。
10.一种如权利要求1～7任一项所述的纳米材料在和/或如权利要求9所述药物组合物在制备脑胶质瘤治疗的光动力和/或光热治疗和/或化疗和/或放疗用药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种纳米材料，其特征在于：包括外泌体和脂质体；所述外泌体表达免疫检查点，所述外泌体来源于脑胶质瘤细胞；所述脂质体载有i型光敏剂。
2.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述外泌体与脂质体的质量比为1：0.1～10。
3.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述外泌体中免疫检查点阳性的外泌体占比为90％～100％。
4.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述脂质体中，所述聚合物与所述光敏剂的质量比为2～4：1。
5.根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：根据权利要求1所述的纳米材料，其特征在于：所述免疫检查点包括siglec-10，sirpα、lilrb...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓冠军，刘楚瑶，林珣，邓文斌，黄诗韵，彭锦，石琳，李悦楹，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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