一种无糖箱式植物组织的培养方法技术

本发明专利技术涉及植物组织的培养方法。用培养箱代替瓶子作培养容器，以利于植株对ＣＯ↓［２］的充分吸收和气体交换，提供一种无糖＋培养箱＋ＣＯ↓［２］的最佳培养方法，取得突破性进展。植物组织的生长指标明显优于现有技术，植株的生长量成倍增加，苗的质量好，商品苗率高，且成本低，适用于彩星、康乃馨、马铃薯、非洲菊、绿巨人和玫瑰等多种植物，具有良好的推广应用前景。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物组织的培养技术，尤其是涉及一种无糖培养技术。植物组织的培养技术，从本世纪30年代开始研究，已被广泛地应用于植物体的快速繁殖、脱毒和种质资源的保存，从而促进了生物育种技术的飞跃发展。长期以来传统的植物组织培养方法，是以糖作为植物体的碳源，并补充相应的有机物质。常规的方法存在着培养过程中污染率高，试管苗生根率低，过渡苗成活率低，生产成本高等缺陷。现有的无糖组织培养技术(参考文献1．Kozait,Fujiwarak,Hagashim.Collected papers on Environmaental Control in MicropropagationVolumel.JoPan:Chiba Vniversity press,1991；2．肖玉兰等。非洲菊无糖组织培养技术的应用研究。园艺学报，1998,25(4))是采用瓶子作培养容器，具有污染率低，植株健壮，过渡苗成活率高的优点。但瓶子由于空间太小，气体循环不畅，即使补充了CO2，也只有通过封口膜上的透气孔才能进入瓶内供植株吸收，CO2的供给量仍然不够，植株生长速度缓慢，且操作困难，成本较高。本专利技术的目的是消除现有技术的缺陷，提供一种用培养箱代替瓶子作培养容器，采用无糖培养基，适当光照和通入CO2的培养方法，可有效地克服现有技术的上述问题，操作简便，能促进植株快速生长，进一步降低生产成本，提高经济效益。本专利技术提供的无糖箱式植物组织培养方法包括下列步骤一、制作培养箱采用有机玻璃制作培养箱，有机玻璃的厚度可为3～5毫米，箱体的尺寸长×高×宽=500～1000毫米×200～250毫米×500毫米。二、培养环境的调控给培养箱配置二氧化碳通气系统，光照系统，温控系统和湿控系统，便于调节控制培养条件。三、配制培养基1、配制培养液①本专利技术对现有技术中的MS培养液作了重要的改进，采用本专利技术特别配制的无糖MS培养液，即配方中不添加糖、有机物和维生素，保留了其它成份，无糖MS培养液的配方(单位毫克/升)为NH4NO31650KNO31900KH2PO4170MgSO4·7H2O370CaCl·2H2O 440MnSO4·H2O 22.3ZnSO4·7H2O8.6H3BO36.2KI0.83NaMoO4·2H2O 0.25CuSO4·5H2O0.025FeSO4·7H2O27.8Na2·EDTA 37.3②本专利技术以无糖培养液为基础配制增殖培养液，其配方(单位毫克/升)为MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.5)6-苄基氨基嘌呤③本专利技术以无糖培养液为基础配制生根培养液，其配方为(单位毫克/升)MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.1)萘乙酸+(0～5000)活性碳。2、培养基基质种类根据所培养植物的生物学特性，可分别选择下列物质作为基质①琼脂②珍珠岩③砂④蛭石；3、培养基的制作程序①按配方将培养液配制好；②如选择琼脂作为培养基质，可将琼脂溶解后加入培养液，经消毒后，放入培养箱内待用；③如选择珍珠岩或砂或蛭石作基质时，则需要分别消毒，再把培养液加入基质中待用。四、消毒1、培养室消毒称量6克高锰酸钾放入一个容器内，再加10毫升甲醛进行熏蒸，紫外灯照射；2、培养箱消毒先把培养箱清洗干净后，用75％的乙醇进行箱体内壁擦拭消毒，然后再使用6克高锰酸钾和10毫升甲醛进行熏蒸消毒；3、培养基消毒①培养液+琼脂经120℃,20分钟高压灭菌消毒或在有盖的容器中煮沸消毒；②培养液+珍珠岩或砂或蛭石的消毒培养液经120℃,20分钟高压消毒或在有盖的容器中煮沸20分钟；珍珠岩、砂、蛭石用一容器装好经120℃,30分钟的高压灭菌。五、无糖箱式培养1、在无菌条件下，将试管苗分段或分株转接到已装好培养基的培养箱内；2、弱光照时期为7～10天(时间长短根据植物种类或生长情况确定)，其照度为2500～2700勒克斯，每天光照时间10～12小时，培养温度为22～25℃；3、强光照时期从第8～11天开始，其照度调整为6000～8000勒克斯，每天光照14～16小时；4、第8天输入CO2，输入CO2的时间和光照同步进行，其浓度为2000～3500PPm5、湿度控制0～3天或0～5天培养箱内的湿度为100％以后逐渐降为75～85％,20天后为70％；20～25天则可出苗，可直接移栽到苗床和营养袋中，18～25天便可成为商品苗。本专利技术利用无糖培养污染率低的优势，采用大的箱式培养容器进行培养，以利于植株对CO2的充分吸收和气体交换，可有效地促进植株的快速生长，进一步降低生产成本，经对彩星，康乃馨，马铃薯，非洲菊，玫瑰和绿巨人等多种植物进行了多次试验，重现性好，具有良好的推广应用前景。实施例及对比试验供试材料彩星(Limonium latifolium)、马铃薯(Potato)试管苗培养容器①瓶子(容积250毫升)②培养箱(1000毫米×500毫米×250毫米)试验处理1号样 无糖+瓶子+CO22号样 无糖+培养箱+CO2具体操作在转苗之前，首先对培养箱和培养室进行严格的消毒处理，然后把配制好的培养基倒入培养箱内，待培养基冷却后进行接苗。彩星每箱插苗1500株，马铃薯剪成一叶一个茎段，每箱插3000苗，不论是彩星还是马铃薯都挑均匀一致的苗进行转接。采用瓶子培养，每种植物接种100瓶，彩星每瓶插10苗，马铃薯插18苗。瓶子培养均采用透气封口膜，透气孔面积为157mm2。无糖培养10天内，光照量2700勒克斯，时间每天12小时；10天后光照量增加为8000勒克斯；光照时间为彩星每天14小时，马铃薯每天16小时；补充CO2的农度3920毫克/mm3，补充CO2的时间和光照同步进行。无糖箱式培养直接把CO2输入到培养箱中。无糖瓶子培养10天内放在培养架上培养，10天后把瓶子放入培养箱内，再输入CO2。马铃薯培养20天后出苗，彩星培养28天后出苗。出苗后直接把苗栽到营养土上，进行过渡炼苗，20天后调查成活率。试验结果1、培养容器的大小对植株生长的影响极为明显。就培养箱和瓶子而言，瓶子由于空间太小，气体循环不畅，即使补充了CO2，但只有通过封口膜上的透气孔才能进入瓶内供植株吸收，CO2的供给量仍然不够，植株生长缓慢。从表1可以看出同是无糖培养并通入CO2，用培养箱培养的植株的高明显高于用瓶子培养的。彩星平均高出1.97厘米，马铃薯平均高出9.03厘米，而且植株健壮，各项生长指标均优于用瓶子培养的。其中马铃薯的差别尤为明显。原因在于培养箱空间大，便于气体交换，CO2吸收充分。但培养箱只能用于无糖培养，有糖培养只能用于瓶子，因为有糖培养随着培养容器的增大，污染率逐渐增高。只有无糖培养对培养容器体积的大小适应性广。2、CO2是影响植株生长的重要因素。碳素营养是植物的生命基础，植株要吸收CO2进行光合作用，有糖培养靠糖作为植株的碳源，无糖培养必须补充CO2和增强光照，使植株自身进行光合作用制造有机物。所以CO2的供给是至关重要的。如果只靠空气中的CO2补充远远不能满足植株的需要。从表1可以看出，即使在大型的培养容器中，在8000LX的强光照射下，如果不补充CO2，植物仍然生长不好。在同样的培养条件下，补充CO2可使彩星重量增加35％，株高增加14％，叶片数增加31％，叶面积增加66％，马铃薯生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无糖箱式植物组织的培养方法，包括①制作培养容器；②培养环境的调控；③配制培养基；④消毒；⑤无糖培养，其特征在于：①培养容器为箱体式；②配制培养基所用的ＭＳ培养液不添加糖、有机物和维生素；③将二氧化碳输入培养箱。

【技术特征摘要】
1．一种无糖箱式植物组织的培养方法，包括①制作培养容器；②培养环境的调控；③配制培养基；④消毒；⑤无糖培养，其特征在于①培养容器为箱体式；②配制培养基所用的MS培养液不添加糖、有机物和维生素；③将二氧化碳输入培养箱。2．按照权利要求1的方法，其中所述的培养容器是采用有机玻璃制作培养箱，有机玻璃的厚度可为3～5毫米，箱体的尺寸长×高×宽=500～1000毫米×200～250毫米×500毫米。3．按照权利要求1的方法，其中所述的无糖MS培养液进一步配制成增殖培养液，其配方(单位毫克/升)为MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.5)6-苄基氨基嘌呤；进一步配制生根培养液，其配方为(单位毫克/升)MS(不加糖、有机物和维生素)+(0～0.1)萘乙酸+(0～5000)活性碳。4．按照权利要求1的方法，其中所述的培养基的基质可为琼脂或珍珠岩或砂或蛭石。5．按照权利要求4的方法，其中所述的培养基的制作程序为①按配方将培养液配制好；②如选择琼脂作为培养基质，可将琼脂溶解后加入培养液，经消毒后，放入培养箱内待用；③如选择珍珠岩或砂或蛭石作基质时，则需要分别消毒，再把培养液加入基质中待用。6．按照权利要求1的方法，其中所述的消...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖玉兰，赵家聪，朱云霞，韩亚平，
申请(专利权)人：昆明市环境科学研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]