【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因编辑，特别涉及一种cas12a变体hyperfi-as及其在基因编辑中的应用。
技术介绍
1、自2013年以来，基因编辑技术取得了突破性进展，此项技术已经在基础科学研究、医药、临床、生物技术等许多领域引起了新的变革。除了具有代表性的cas9系统之外，cas12，又名cpf1，作为又一种被发现的具有基因编辑效应的crispr系统新成员，极大的扩大了基因编辑系统靶点的可编辑范围，相比于cas9系统，cas12a所具有的加工前提rna的功能，为其介导多基因编辑提供了相比与cas9系统更为便捷高效的编辑能力。除此之外，相比于cas9的向导rna，cas12a的向导rna组成更为简单，设计更为方便。
2、2015年，张峰团队首次发现了cas9系统之外的另外一种具有基因编辑能力的新成员，cas12a，又名cpf1，将其划分到crispr系统2类v型中。相比于cas9系统，cas12a的编辑效率与cas9的效率相当，在有些靶点低于cas9。cas12a的脱靶率极低，相比于cas9脱靶率高的特性，cas12a是一种安全的基因编辑工具。cas12a在切割之后形成粘性末端，而cas9形成平末端，已有研究表明，cas12a切割之后的粘性末端相比于cas9的平末端而言，更容易发生同源重组修复，这也为基因的定点插入和修复提供了更好的工具。在向导rna的加工方面，cas12a具有明显的优势，仅仅只需要cas12a本身就能够完成对前提rna的加工，而cas9系统则需要rnaseiii的加工，这极大地促进cas12a在多基因编辑上
3、因此，cas12a作为一种新型基因编辑工具，与cas9系统一道，为科学研究和疾病的治疗提供了有力的工具。基于对目前已有的cas12a的研究，为应对将来各种情况下的基因编辑事件，发现更多的具有一定特性的cas12a变体是一件具有重要意义的事情。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种cas12a变体hyperfi-as及其在基因编辑中的应用，该cas12a变体hyperfi-as为ii类v型crispr蛋白，与现有的相较于ascas12a其他变体以及cas9(变体)相比，在全基因组上脱靶效应更低。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种cas12a变体hyperfi-as，所述cas12a变体hyperfi-as为ii类v型crispr蛋白，氨基酸序列如sed id no.1所示。
4、在本专利技术的第二方面，提供了一种重组表达载体，所述重组载体表达所述的cas12a变体hyperfi-as。
5、进一步地，所述重组表达载体包括质粒载体、病毒载体和噬菌体载体中的一种。
6、在本专利技术的第三方面，提供了一种重组菌或重组细胞系或重组病毒，包含所述的重组表达载体。
7、在本专利技术的第四方面，提供了一种重组病毒，所述重组病毒采用所述的病毒载体包装获得，所述重组病毒包括表达所述的cas12a变体hyperfi-as的腺病毒或慢病毒。
8、在本专利技术的第五方面，提供了一种包括所述cas12a变体hyperfi-as的crispr/cas12a基因编辑系统。
9、在本专利技术的第六方面，提供了所述系统还包括：靶向目标基因的crrna或crdna。
10、在本专利技术的第七方面，提供了一种所述的cas12a变体hyperfi-as、所述的重组表达载体、所述的重组菌或重组细胞系、所述的重组病毒、所述的基因编辑系统在基因编辑中的应用。
11、在本专利技术的第八方面，提供了一种对受体中的目的基因进行基因编辑的方法，借助crispr/cas12a系统对受体中的目的基因进行基因编辑，所述方法包括：
12、通过将所述的重组表达载体导入受体提供cas12a变体hyperfi-as；
13、通过靶向目标基因的crrna或crdna质粒导入受体提供crrna；
14、所述cas12a变体hyperfi-as和所述crrna在受体中形成复合物识别目的基因并完成编辑。
15、进一步地，所述受体包括293t细胞、atdc5细胞和c6细胞中的一种。
16、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
17、本专利技术提供的一种cas12a变体hyperfi-as及其在基因编辑中的应用，本专利技术首次通过蛋白改造，获得全基因组内脱靶效应更低的cas12a变体hyperfi-as，该变体在体内相较于对应野生型具有较低的脱靶效率，为后续各种不同情况的基因编辑提供了重要的备选工具，对基础科研和临床治疗具有十分重要的作用。
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1.一种Cas12a变体HyperFi-As，其特征在于，所述Cas12a变体HyperFi-As为II类V型CRISPR蛋白，氨基酸序列如SED ID NO.1所示。
2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体表达权利要求1所述的Cas12a变体HyperFi-As。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括质粒载体、病毒载体和噬菌体载体中的一种。
4.一种重组菌或重组细胞系或重组病毒，其特征在于，包含权利要求2所述的重组表达载体。
5.一种重组病毒，其特征在于，所述重组病毒采用权利要求3所述的病毒载体包装获得，所述重组病毒包括表达权利要求1所述的Cas12a变体HyperFi-As的腺病毒或慢病毒。
6.一种包括权利要求1所述Cas12a变体HyperFi-As的CRISPR/Cas12a基因编辑系统。
7.根据权利要求6所述的CRISPR/Cas基因编辑系统，其特征在于，所述系统还包括：靶向目标基因的crRNA或crDNA。
8.一种权利要求1所述的Ca
9.一种对受体中的目的基因进行基因编辑的方法，其特征在于，借助CRISPR/Cas12a系统对受体中的目的基因进行基因编辑，所述方法包括：
10.根据权利要求9所述的一种对受体中的目的基因进行基因编辑的方法，其特征在于，所述受体包括293T细胞、ATDC5细胞和C6细胞中的一种。
...【技术特征摘要】
1.一种cas12a变体hyperfi-as，其特征在于，所述cas12a变体hyperfi-as为ii类v型crispr蛋白，氨基酸序列如sed id no.1所示。
2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体表达权利要求1所述的cas12a变体hyperfi-as。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括质粒载体、病毒载体和噬菌体载体中的一种。
4.一种重组菌或重组细胞系或重组病毒，其特征在于，包含权利要求2所述的重组表达载体。
5.一种重组病毒，其特征在于，所述重组病毒采用权利要求3所述的病毒载体包装获得，所述重组病毒包括表达权利要求1所述的cas12a变体hyperfi-as的腺病毒或慢病毒。
6.一种包括权利要求1所述cas12a变...
【专利技术属性】
技术研发人员：殷雷，周进，雷骏，陈鹏，刘欢，王宏健，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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