一种用于精准编辑牛Oct4的sgRNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程和细胞工程技术领域，公开了一种用于精准编辑牛Oct4的sgRNA及其应用，包括一种用于精准编辑牛Oct4的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，还包括一种用于扩增sgRNA的引物，所述引物包括840位点引物、Oct4体外切割模板扩增引物和B840‑px330体外转录模板扩增引物。本发明专利技术用于精准编辑牛Oct4基因的sgRNA，针对牛OCT4基因第四外显子区域设计sgRNA，针对切割位点设计可实现高效同源重组的上、下游特异性同源臂；利用Crispr‑Cas9技术，靶向内源性Oct4特定位点进行精确切割，利用同源重组插入GFP，成功构建Oct4表达示踪报告系统，达到有效监测多能干细胞内源性Oct4表达的目的，可在后续开展定向诱导研究时，实时掌握细胞多能性的动态变化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程和细胞工程，尤其涉及一种用于精准编辑牛oct4的sgrna及其应用。

技术介绍

1、目多能干细胞是一类具有无限增殖、自我更新和分化成所有主要细胞系潜能的干细胞，根据来源可分为胚胎干细胞和诱导多能干细胞。利用牛多能干细胞可以开展牛早期胚胎发生、组织分化、药物筛选、疾病模型建立、移植治疗、牛品种改良及转基因工程等科学研究，因此，牛多能干细胞在农业、生物及医学等领域具有巨大的应用潜力。

2、研究较早的动物胚胎干细胞是小鼠胚胎干细胞，由剑桥大学m.j.evans、m.h.kaufman和加利福尼亚大学gail.r.martin于1981年分别在nature和pnas上刊发其研究成果。随后，猕猴、人、大鼠的胚胎干细胞相继分离建系成功。然而，家畜胚胎干细胞的研究相对较为滞后，2018年，bogliotti ys从牛囊胚中分离建系牛的胚胎干细胞，成功建立了类似于episc的牛胚胎干细胞培养体系。此外，lixia zhao利用yamanaka四因子也成功建立了牛诱导多能干细胞。利用牛多能干细胞可以开展定向诱导分化，结合基因编辑可以构建精准本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于精准编辑牛Oct4的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一种用于扩增sgRNA的引物，其特征在于，所述引物包括840位点引物、Oct4体外切割模板扩增引物和B840-px330体外转录扩增引物；

3.一种包含权利要求1所述sgRNA的重组载体。

4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为在pX330载体上插入所述sgRNA得到。

5.一种包含权利要求1所述sgRNA的Donor质粒。

6.如权利要求5所述的Donor质粒，其特征在于，所述Donor质粒的...

【技术特征摘要】

1.一种用于精准编辑牛oct4的sgrna，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列如seq idno：1所示。

2.一种用于扩增sgrna的引物，其特征在于，所述引物包括840位点引物、oct4体外切割模板扩增引物和b840-px330体外转录扩增引物；

3.一种包含权利要求1所述sgrna的重组载体。

4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为在px330载体上插入所述sgrna得到。

5.一种包含权利要求1所述sgrna的donor质粒。

6.如权利要求5所述的donor质粒，其特征在于，所述donor质粒的结构为sgrna+lha+p2a+egfp+t2a+puro+rha+sgrna，其中sgrna的核苷酸序列如seq i...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵芳，张瑀格，王慧利，曹少先，丁强，陈坤琳，夏淑雯，仲跻峰，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：