【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及电化学分析检测，特别涉及一种基于聚苯胺-还原氧化石墨烯纳增敏效应的啶虫脒适配体电化学传感器其应用方法。
技术介绍
1、啶虫脒(acetamiprid，atp)是一种新型广谱的烟碱类杀虫剂，具有高效、广谱等特点，且具有内吸性、触杀和胃毒作用，是同翅目、鞘翅目、双翅目和鳞翅目等害虫理想防治药剂，已在我国蔬菜、花卉、水果、粮油、茶树等36个作物上登记使用。近年来，由于高毒、高残留杀虫剂农药的禁用，啶虫脒等低毒农药被广泛用于蔬菜中菜粉蝶和蚜虫的防治，啶虫脒等新烟碱类农药已逐渐成为目前世界上使用最广泛的杀虫剂之一。啶虫脒农药残留的问题也逐渐显现，因违规使用或滥用新烟碱类农药而引起的食品安全事件时有发生，对我国的环境和农产品安全造成较大的威胁。因此，对蔬菜中的啶虫脒农药残留进行快速、准确的检测对保障农产品质量安全具有重要的意义。
2、目前检测啶虫脒的方法和技术有多种，传统的方法如气相色谱法、高效液相色谱法、色谱质谱联用技术等，虽然这些具有高选择性和精确度，但仍存在样品前处理复杂、成本高、仪器设备昂贵、需专门人员操作、检测时间长、不适合现场检测等缺点，因此不适用于农产品的快速检测需求。近年来，适配体的电化学传感器因其灵敏度高、选择性好、简单快捷等优点在农药残留检测中引起了广泛关注并取得良好的分析效果。适配体传感器的构建的关键步骤是适配体在电极表面的固定，因为其对传感器的稳定性、灵敏度和选择性等主要性能产生直接影响。固定化技术既要保持适配体的活性，又要弥补适配体的电化学惰性对传感器性能的影响。为此具有大比表面、生物相容
技术实现思路
1、本专利技术针对上述技术问题，专利技术一种基于聚苯胺-还原氧化石墨烯纳增敏效应的啶虫脒适配体电化学传感器及其应用方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：
3、一种基于聚苯胺-还原氧化石墨烯纳增敏效应的啶虫脒适配体电化学传感器，制备方法包括以下步骤：
4、(1)聚苯胺-还原氧化石墨烯纳米颗粒(rgo-pani)的制备：将氧化石墨烯分散于水中，再加入苯胺溶液，混合均匀后将混合物在180℃加热10-15h，得到黑色分散体，冷却至室温后再加入过硫酸铵溶液，在冰浴中搅拌10-15h，将沉淀的复合材料过滤收集，分别用水和乙醇洗涤，干燥后得到聚苯胺-还原氧化石墨烯纳米颗粒，记为rgo-pani；
5、(2)金纳米粒子(aunps)材料的制备：在水中加入haucl4·3h2o，加热至沸腾，加入柠檬酸三钠溶液，当溶液颜色由淡黄色变为鲜红色后，继续反应15分钟后停止加热，冷却至室温，得到金纳米粒子，记为aunps，将制备得到的aunps避光保存在4℃的冰箱中备用；
6、(3)1mm 6-巯基-1-己醇(mch)的制备：取1.0g/ml的6-巯基-1-己醇，先用乙醇溶解，再用tris-hcl缓冲液定容到浓度为1mmol/l；
7、(4)tris-hc缓冲液的配制：取1.21g三(羟甲基)氨基甲烷溶于800ml水，再用hcl调ph至7.4，定容至1000ml，得到浓度为10mmol/l的tris-hc缓冲液；
8、(5)5.0mmol/l[fe(cn)6]3-/4-/0.1mol/l kcl溶液的配置：称取0.07455gkcl，铁氰化钾0.01646g，亚铁氰化钾0.01842g用去离子水溶解，再定容到10ml，得到5.0mmol/l[fe(cn)6]3-/4-/0.1mol/l kcl溶液；
9、(6)atp核酸适配体溶液的制备：
10、atp核酸适配体序列号为：5′-(sh)-(ch2)6-tgt aat ttg tct gca gcg gtt cttgat cgc tga cac cat att atg aag a-3′；将atp核酸适配体粉剂用tris-hcl缓冲液配制成浓度为7.5μmol/l的atp核酸适配体溶液；
11、(7)啶虫脒适配体电化学传感器的制备：将玻碳电极(gce)抛光、清洗、干燥，将步骤(1)制备的rgo-pani与水混合超声制成rgo-pani分散液，取5μlrgo-pani分散液滴到玻碳电极上，得到修饰电极，记为rgo-pani/gce，随后将步骤(2)制备的aunps与水混合超声制成aunps分散液，取6μl aunps分散液滴加到rgo-pani/gce表面，得到aunps/rgo-pani/gce，随后在aunps/rgo-pani/gce表面加入6μl的7.5μmol/l的atp酸适配体溶液，在30-40℃下孵育100-140min，然后用tris-hcl缓冲液冲洗修饰电极表面，得到用核酸适配体修饰的电极，标记为apt/au/rgo-pani/gce，然后用6μl的1mm 6-巯基-1-己醇覆盖电极，在室温下保存1h，然后用tris-hcl缓冲液洗涤，得到啶虫脒适配体电化学传感器，标记为mch/apt/aunps/rgo-pani/gce。
12、优选地，在步骤(1)中，将氧化石墨烯分散于水中，得到1mg/ml的悬浮液，再加入5ml苯胺溶液，超声30min混合均匀后将混合物在180℃加热12h，得到黑色分散体，冷却至室温后再加入过硫酸铵溶液，在冰浴中搅拌12h，将沉淀的复合材料过滤收集，分别用水和乙醇洗涤，80℃干燥12h得到聚苯胺-还原氧化石墨烯纳米颗粒；更优选地，过硫酸铵与苯胺的物质的量比为1：1。
13、优选地，在步骤(2)中，在10ml水中加入100μl 0.1m的haucl4·3h2o，加热至沸腾，加入0.1ml的100mg/ml的柠檬酸三钠溶液，当溶液颜色由淡黄色变为鲜红色后，继续反应15分钟后停止加热，冷却至室温，得到金纳米粒子，记为aunps，将制备得到的aunps避光保存在4℃的冰箱中备用。
14、优选地，在步骤(3)中，取1.0g/ml的6-巯基-1-己醇0.134ml，先用10ml乙醇溶解，再用tris-hcl缓冲液定容到1000ml，得到1mmol/l的6-巯基-1-己醇。
15、优选地，在步骤(7)中，将玻碳电极(gce)抛光、清洗、干燥的方法为：将直径为3mm的玻碳电极(gce)用0.05μm的al2o3粉末在麂皮上抛光至镜面，用去离子水洗去表面残留的粉末，再依次用的hno3水溶液、无水乙醇和去离子水超声清洗3min，然后自然干燥，所述hno3水溶液中hno3与水的体积比为1:1；在加入克百威核酸适配体溶液之后，在在37℃孵育120min。
16、本专利技术还提供了所述啶虫脒适配体电化学传感器的应用方法，包括以下步骤：
17、(a)标准溶液的配制：称取啶虫脒标样和甲醇配制5.0mg/ml的母液，分别量取一定量的母液加入tris-hcl缓冲液中，定容得到一系列不同浓度的啶虫脒标准溶液；
18、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于聚苯胺-还原氧化石墨烯纳增敏效应的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于，所述啶虫脒适配体电化学传感的制备方法包括以下步骤：
2.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于：在步骤(1)中，将氧化石墨烯分散于水中，得到1mg/mL的悬浮液，再加入5mL苯胺溶液，超声30min混合均匀后将混合物在180℃加热12h，得到黑色分散体，冷却至室温后再加入过硫酸铵溶液，在冰浴中搅拌12h，将沉淀的复合材料过滤收集，分别用水和乙醇洗涤，80℃干燥12h得到聚苯胺-还原氧化石墨烯纳米颗粒；过硫酸铵与苯胺的物质的量比为1：1。
3.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于：在步骤(2)中，在10mL水中加入100μL 0.1M的HAuCl4·3H2O，加热至沸腾，加入0.1mL的100mg/mL的柠檬酸三钠溶液，当溶液颜色由淡黄色变为鲜红色后，继续反应15分钟后停止加热，冷却至室温，得到金纳米粒子，记为AuNPs，将制备得到的AuNPs避光保存在4℃的冰箱中备用。
4.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特
5.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于：在步骤(7)中，将玻碳电极(GCE)抛光、清洗、干燥的方法为：将直径为3mm的玻碳电极(GCE)用0.05μm的Al2O3粉末在麂皮上抛光至镜面，用去离子水洗去表面残留的粉末，再依次用的HNO3水溶液、无水乙醇和去离子水超声清洗3min，然后自然干燥，所述HNO3水溶液中HNO3与水的体积比为1:1；在加入克百威核酸适配体溶液之后，在在37℃孵育120min。
6.权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种基于聚苯胺-还原氧化石墨烯纳增敏效应的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于，所述啶虫脒适配体电化学传感的制备方法包括以下步骤：
2.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于：在步骤(1)中，将氧化石墨烯分散于水中，得到1mg/ml的悬浮液，再加入5ml苯胺溶液，超声30min混合均匀后将混合物在180℃加热12h，得到黑色分散体，冷却至室温后再加入过硫酸铵溶液，在冰浴中搅拌12h，将沉淀的复合材料过滤收集，分别用水和乙醇洗涤，80℃干燥12h得到聚苯胺-还原氧化石墨烯纳米颗粒；过硫酸铵与苯胺的物质的量比为1：1。
3.按照权利要求1所述的啶虫脒适配体电化学传感器，其特征在于：在步骤(2)中，在10ml水中加入100μl 0.1m的haucl4·3h2o，加热至沸腾，加入0.1ml的100mg/ml的柠檬酸三钠溶液，当溶液颜色由淡黄色变为鲜红色后，继续反应15分钟后停止加热，冷却至室温，得到金纳米粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗丽红，牙禹，闫飞燕，王彦力，劳水兵，蒋翠文，梁静，谢丽萍，李慧玲，韦宇宁，唐莉，宁德娇，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。