本发明专利技术公开了植物油中游离甾醇分离及测定方法，涉及游离甾醇分离及测定技术领域，包括以下步骤：步骤一、准备分析仪器，确定气相色谱及质谱使用条件，确定8种甾醇定性、定量离子；步骤二、分离与测定植物油中游离甾醇，进行前处理准备；步骤三、确定不同优化条件，并根据不同优化条件进行测定分析，所述分析仪器为气相色谱质谱联用仪，所述不同优化条件包括不同规格SPE柱的优化、前处理中洗脱液的优化以及前处理中硅烷化试剂用量的优化。本发明专利技术通过对7种不同植物油(菜籽油、胡麻油、紫苏油、橄榄油、核桃油、牡丹籽油、文冠果油)中游离甾醇进行测定，确定了最佳的前处理条件。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及游离甾醇分离及测定，具体涉及植物油中游离甾醇分离及测定方法。
技术介绍
1、植物油脂是人类三大主要营养素之一，除了提供机体生长代谢所需要的能量外，还向人体提供重要的营养物质，如必需脂肪酸、植物甾醇、甾醇酯、生育酚以及多酚类化合物，植物甾醇是一种重要的生物活性物质，广泛存在于各种植物油中，并且种类繁多。
2、现有技术中，由于不同植物油中的游离甾醇含量不同，较难针对性的获取游离甾醇的含量，而且涉及的测定条件较多，也难以针对不同测定条件进行优化，使得不同植物油中的游离甾醇含量测定存在困难。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于提供植物油中游离甾醇分离及测定方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
3、植物油中游离甾醇分离及测定方法，包括以下步骤：
4、步骤一、准备分析仪器，确定气相色谱及质谱使用条件，确定8种甾醇定性、定量离子；
5、步骤二、分离与测定植物油中游离甾醇，进行前处理准备；
6、步骤三、确定不同优化条件，并根据不同优化条件进行测定分析。
7、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述分析仪器为气相色谱质谱联用仪。
8、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述前处理准备的过程为，
9、称取50mg精确至0.1mg的植物油，加入100μl浓度为200μg/ml的内标溶液，加入5ml正己烷溶解备用；
>10、用10ml正己烷活化spe柱，5ml乙醚-正己烷(8:92，v/v)淋洗spe柱，将5ml样液注入到spe柱中；11、用10ml洗脱液洗脱并收集于干燥试管中，40℃氮气吹干有机相，加入50μl硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)，放于烘箱中105℃加热15min，冷却至室温，正己烷定容至1ml待测定。
12、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述不同优化条件包括不同规格spe柱的优化、前处理中洗脱液的优化以及前处理中硅烷化试剂用量的优化。
13、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述不同规格spe柱的优化所用固相萃取柱(spe柱)为无键合硅胶填料固相萃取柱，测定分析500mg/6ml、1000mg/6ml、2000mg/6ml对于目标物的萃取、分离效果；
14、具体过程为，称取50mg精确至0.1mg的植物油，加入100μl浓度为200μg/ml的内标溶液，加入5ml正己烷溶解备用，用10ml正己烷活化spe柱(500mg/6mlsi胶柱)，5ml乙醚-正己烷(8:92，v/v)淋洗spe柱，将5ml样液注入到spe柱中，用10ml乙酸乙酯-正己烷(25:75，v/v)洗脱并收集于干燥试管中，40℃氮气吹干有机相，加入50μl硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)，放于烘箱中105℃加热15min，冷却至室温，正己烷定容至1ml待测定。
15、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述前处理中洗脱液的优化比较乙酸乙酯-正己烷(25:75，v/v)和乙醚-正己烷(20:80，v/v)两种不同的洗脱液对目标物的分离效果；
16、具体过程为，称取50mg精确至0.1mg的植物油，加入100μl浓度为200μg/ml的内标溶液，加入5ml正己烷溶解备用，用10ml正己烷活化spe柱(500mg/6ml si胶柱)，5ml乙醚-正己烷(8:92，v/v)淋洗spe柱，将5ml样液注入到spe柱中，用10ml正己烷-乙醚(80:20，v/v)洗脱并收集于干燥试管中，40℃氮气吹干有机相，加入50μl硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)，放于烘箱中105℃加热15min，冷却至室温，正己烷定容至1ml待测定。
17、本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述前处理中硅烷化试剂用量的优化所用硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)对目标物是否完全衍生以及测定结果有着重要影响；
18、具体过程为，称取50mg精确至0.1mg的植物油，加入100μl浓度为200μg/ml的内标溶液，加入5ml正己烷溶解备用，用10ml正己烷活化spe柱(500mg/6ml si胶柱)，5ml乙醚-正己烷(8:92，v/v)淋洗spe柱，将5ml样液注入到spe柱中，用10ml正己烷-乙醚(80:20，v/v)洗脱并收集于干燥试管中，40℃氮气吹干有机相，加入100μl硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)，放于烘箱中105℃加热15min，冷却至室温，正己烷定容至1ml待测定。
19、由于采用了上述技术方案，本专利技术相对现有技术来说，取得的技术进步是：
20、本专利技术提供植物油中游离甾醇分离及测定方法，对7种不同植物油(菜籽油、胡麻油、紫苏油、橄榄油、核桃油、牡丹籽油、文冠果油)中游离甾醇进行测定，确定了最佳的前处理条件：称取50mg(精确至0.1mg)植物油，加入100μl浓度为200μg/ml的内标溶液，加入5ml正己烷溶解备用，用10ml正己烷活化500mg/6ml spe柱，5ml乙醚-正己烷(8:92，v/v)淋洗spe柱，将5ml样液注入到spe柱中，用10ml乙醚-正己烷(20:80，v/v)洗脱液洗脱并收集于干燥试管中，40℃氮气吹干有机相，加入100μl硅烷化试剂(n-甲基-n-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)，放于烘箱中105℃加热15min，冷却至室温，正己烷定容至1ml待测定。优化后的条件同时适用于7种不同植物油中胆固醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、豆甾醇、麦角甾醇、环阿屯醇、β-谷甾醇项目。
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【技术保护点】
1.植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述分析仪器为气相色谱质谱联用仪。
3.根据权利要求2所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述前处理准备的过程为，
4.根据权利要求3所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述不同优化条件包括不同规格SPE柱的优化、前处理中洗脱液的优化以及前处理中硅烷化试剂用量的优化。
5.根据权利要求4所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述不同规格SPE柱的优化所用固相萃取柱(SPE柱)为无键合硅胶填料固相萃取柱，测定分析500mg/6mL、1000mg/6mL、2000mg/6mL对于目标物的萃取、分离效果；
6.根据权利要求4所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述前处理中洗脱液的优化比较乙酸乙酯-正己烷(25:75，v/v)和乙醚-正己烷(20:80，v/v)两种不同的洗脱液对目标物的分离效果；
7.根据权利要求4所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述前处理中硅烷化试剂用量的优化所用硅烷化试剂(N-甲基-N-三甲基硅烷七氟丁酰胺：1-甲基咪唑＝95:5,v/v)对目标物是否完全衍生以及测定结果有着重要影响；
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【技术特征摘要】
1.植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述分析仪器为气相色谱质谱联用仪。
3.根据权利要求2所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述前处理准备的过程为，
4.根据权利要求3所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述不同优化条件包括不同规格spe柱的优化、前处理中洗脱液的优化以及前处理中硅烷化试剂用量的优化。
5.根据权利要求4所述的植物油中游离甾醇分离及测定方法，其特征在于：所述不同规格spe柱的优化所用固相萃取柱(spe...
【专利技术属性】
技术研发人员：王雪娇，马芮萍，杜喜利，
申请(专利权)人：甘肃省产品质量监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：
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