【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域，特别是涉及一种诱导目的黏菌孢子形成原生质团的培养方法。
技术介绍
1、黏菌(myxomycetes)是隶属于原生动物界protozoa的一类全球范围内广泛分布的真核生物。黏菌的生活史兼具了“菌物”与“动物”的特征，既有与原生动物相近的营养体，也有类似真菌的繁殖体，因此，黏菌成为了研究真核生物系统演化的模式生物。无论是古典中记载煤绒菌fuligo septita在主治人马反花疮中的作用，还是源自多头绒泡菌physarumpolycephalum的天然产物在抑制多种肿瘤方面具有显著活性，都体现了广泛的科学意义与应用价值。
2、近年来，随着食用菌产业的不断发展，黏菌是危害平菇、双孢蘑菇、滑子菇、木耳、灵芝等菇类的一种常见病害，可使食用菌减产20％左右，严重的可减产50％以上甚至绝收。因此，大量培养黏菌物种，对开展细胞生物学、遗传学、以及经济作物病害具有重要意义。
3、传统湿室培养(又称基物培养)是指在培养皿中为黏菌的生长提供合适的天然基质，以获取子实体的方法。传统湿室培养操作简单，无需对器皿和实验材料进行消毒灭菌、菌种纯化和喂饲细菌工作，易于开展；可弥补野外采集的不足和对黏菌个体发育的信息进行补充，而且具有经济简单，培养周期长，方便观察黏菌生长周期，也可从侧面反映某一地区的黏菌种类及分布情况。
4、目前常规方法培养黏菌孢子时，主要通过将孢子接种到无菌水中，避光培养观察形成游动胞或黏变形体后接入到水琼脂培养基中，此方法提供的营养缺乏，萌发率低，萌发时间长，同时采用传统的湿室培
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种诱导黏菌孢子形成原生质团的培养方法，以解决上述现有技术存在的问题，该培养方法更易形成原生质团和子实体，提高萌发率及存活率，为丰富黏菌菌种及后续研究提供了参考。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种诱导目的黏菌孢子形成原生质团的培养方法，包括以下步骤：
4、以腐木和枯枝落叶为基物，将基物消毒烘干；
5、目的黏菌的孢子悬浮液加入消毒烘干后的基物中，避光培养获得原生质团；
6、将原生质团及其周围的基物放入水琼脂培养基中培养。
7、进一步地，所述消毒烘干的步骤为：将基物用酒精浸泡，浸泡后依次用无菌水和次氯酸钠溶液冲洗，之后进行高压灭菌，灭菌后烘干2-3d。
8、进一步地，所述酒精的体积百分比为100％；所述浸泡的时间为48-60h。
9、进一步地，所述无菌水和次氯酸钠溶液的冲洗次数为1-2次；所述次氯酸钠溶液的浓度为500mg/l。
10、进一步地，所述高压灭菌的条件为121℃下灭菌90min。
11、进一步地，所述孢子悬浮液的浓度为6×105-1.5×106个/ml。
12、进一步地，所述避光培养的条件为：在培养温度为26℃和培养湿度为25％的条件下，避光培养15-40d。
13、进一步地，所述培养为在19-23℃条件下避光培养10-15d。
14、进一步地，所述目的黏菌包括蛇形半网菌hemitrichia serpula、灰团网菌arcyria cinerea、空柄菌macbrideola martini和梨形筛菌cribrariapiriformis。
15、本专利技术公开了以下技术效果：
16、本专利技术在原湿室培养方法的基础上进行创新，对野外采集黏菌基物进行酒精浸泡、次氯酸钠消毒液冲洗、灭菌等处理，在处理后的基物中接入目的黏菌孢子悬浮液暗培养，提高孢子萌发率且获得目的原生质团。之后将原生质团及其周围的基物剪切，放入置有水琼脂的基物培养盒中避光培养，更易形成原生质团和子实体。本专利技术改良后的湿室培养方法可以弥补传统湿室培养的不确定性，获得目的原生质团及子实体，提高萌发率及存活率，为丰富黏菌菌种及后续研究提供了参考。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种诱导目的黏菌孢子形成原生质团的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述消毒烘干的步骤为：将基物用酒精浸泡，浸泡后依次用无菌水和次氯酸钠溶液冲洗，之后进行高压灭菌，灭菌后烘干2-3d。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述酒精的体积百分比为100％；所述浸泡的时间为48-60h。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述无菌水和次氯酸钠溶液的冲洗次数为1-2次；所述次氯酸钠溶液的浓度为500mg/L。
5.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述高压灭菌的条件为121℃下灭菌90min。
6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述孢子悬浮液的浓度为6×105-1.5×106个/mL。
7.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述避光培养的条件为：在培养温度为26℃和培养湿度为25％的条件下，避光培养15-40d。
8.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养为在19-23℃条件下避光培养10
9.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述目的黏菌包括蛇形半网菌Hemitrichia serpula、灰团网菌Arcyria cinerea、空柄菌Macbrideola martini和梨形筛菌Cribraria piriformis。
...【技术特征摘要】
1.一种诱导目的黏菌孢子形成原生质团的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述消毒烘干的步骤为：将基物用酒精浸泡，浸泡后依次用无菌水和次氯酸钠溶液冲洗，之后进行高压灭菌，灭菌后烘干2-3d。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述酒精的体积百分比为100％；所述浸泡的时间为48-60h。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述无菌水和次氯酸钠溶液的冲洗次数为1-2次；所述次氯酸钠溶液的浓度为500mg/l。
5.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述高压灭菌的条件为121℃下灭菌90min。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，王柏力，窦文俊，彭雪嫣，王瑜，张卉，丁奕丹，张辉，苏玲，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：
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