【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种负载抗原的壳聚糖纳米粒及其制备方法和其用途。
技术介绍
1、黏膜是人体抵御病原生物感染的重要免疫器官，多数病原体通过定植或侵入黏膜的方式进入宿主体内，健康成人中近80％的免疫系统与黏膜相关。鼻黏膜具有面积大(成人约400m2)、粘膜下血管丰富等特点。鼻黏膜周围的蛋白质水解酶和ph相对温和，对抗原活性的影响较低并降低过敏性休克发生风险。鼻粘膜给药利于药物快速吸收并进入体循环、表面渗透性相对较高、避免胃肠道首过反应、生物利用度高、无创接种、用药方便、患者顺应性良好等优点，适用于儿童、紧急机动军事任务、医疗条件较差地区等，鼻黏膜给药备受关注。
2、壳聚糖(chitosan，cs)具有生物降解性好、免疫原性低、毒性低等特点。壳聚糖纳米粒(chitosan nanoparticle，cs-np)具有表面积大、稳定性好、生物相容性好、易修饰等特点，成为生物大分子鼻黏膜递送的有效载体。鼻黏液呈弱酸性(ph5.5-6.5)，其带负电荷的黏蛋白易与荷正电的cs-np产生静电吸附，且cs-np表面的氨基、羟基可与黏蛋白形成氢键而增强粘附作用，降低cs-np的清除速度并增加抗原在鼻粘膜的滞留时间。研究表明，cs-np可有效提高鼻黏膜疫苗的免疫效力，但尚需研发具有免疫原性好、靶向性、缓释长效、安全有效、生物利用度高的负载抗原的壳聚糖纳米粒，以满足市场需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种负载抗原的壳聚糖纳米粒，所述壳聚糖纳米粒含有交联物、
2、本专利技术优选的技术方案,所述壳聚糖的平均分子量为200kda-500kda，优选为300kda-400kda。
3、本专利技术优选的技术方案,所述壳聚糖的脱乙酰度为88-92％，优选为90-91％。
4、本专利技术优选的技术方案，所述壳聚糖与交联剂的质量比为2-4：1，优选为2.5-3.5：1。
5、本专利技术优选的技术方案，所述修饰物与壳聚糖的质量比为1-15:1，优选为1-11:1。
6、本专利技术优选的技术方案，所述修饰物由泊洛沙姆：甘露糖按照质量比2-15:1的组合而成，优选为5-10:1。
7、本专利技术优选的技术方案，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆p407。
8、本专利技术优选的技术方案，所述壳聚糖纳米粒中抗原与壳聚糖的质量比为1:2-8，优选为1:4-6。
9、本专利技术优选的技术方案，所述抗原选自牛血清蛋白(bsa)、鸡卵血清蛋白(ova)中的任一种。
10、本专利技术优选的技术方案，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的粒径为100-250nm，优选为140-200nm。
11、本专利技术优选的技术方案，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的pdi≤0.4，优选pdi≤0.2。
12、本专利技术优选的技术方案，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的zeta电位为30-45mv，优选为35-40mv。
13、本专利技术优选的技术方案，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的包封率≥85％，优选≥90％，更优选≥95％。
14、本专利技术优选的技术方案，所述壳聚糖纳米粒用于制备鼻粘膜递送疫苗。
15、本专利技术优选的技术方案，负载抗原的壳聚糖纳米粒的制备包括以下步骤：
16、(1)在搅拌条件下，将所需量的壳聚糖加入到浓度为0.5-1.5％的乙酸溶液中，搅拌至溶解，过滤，在收集滤液中加入所需量的修饰物，搅拌至溶解后，再加入抗原，搅拌至混合均匀，制得负载抗原的壳聚糖修饰物溶液，其中，壳聚糖：乙酸溶液的质量体积比为0.5-2:1，修饰物：壳聚糖的质量比为1-20:1；
17、(2)在搅拌条件下，将浓度为1-10mg/ml的交联剂溶液滴加至负载抗原的壳聚糖修饰物溶液中，搅拌至混合均匀，制得负载抗原的壳聚糖修饰交联物混悬液，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成；
18、(3)将制得的负载抗原的壳聚糖修饰交联物混悬液离心，将收集离心液冻干，即得。
19、本专利技术优选的技术方案，负载抗原的壳聚糖纳米粒的制备包括以下步骤：
20、(1)在搅拌条件下，将所需量的壳聚糖加入到浓度为0.5-1.5％的乙酸溶液中，搅拌至溶解，过滤，在收集滤液中加入所需量的修饰物，搅拌至溶解，制得壳聚糖修饰物溶液，其中，壳聚糖：乙酸溶液的质量体积比为0.5-2:1，修饰物：壳聚糖的质量比为1-20:1；
21、(2)在搅拌条件下，将浓度为1-10mg/ml的交联剂溶液滴加至壳聚糖修饰物溶液中，搅拌至混合均匀，再加入所需量的抗原，搅拌至混合均匀，制得负载抗原的壳聚糖修饰交联物混悬液，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成；
22、(3)将制得的负载抗原的壳聚糖修饰交联物混悬液离心，将收集离心液冻干，即得。
23、本专利技术优选的技术方案，乙酸溶液的浓度为0.75-1％。
24、本专利技术优选的技术方案，壳聚糖与乙酸溶液的质量体积比为1-1.5：1。
25、本专利技术优选的技术方案，步骤(1)的搅拌条件为在200-1200rpm下搅拌4-8h，优选为在400-1000rpm条件下搅拌4-6h。
26、本专利技术优选的技术方案，步骤(2)的搅拌条件为在500-1200rpm条件下搅拌5-30min，优选为在800-1000rpm条件下搅拌10-15min。
27、本专利技术优选的技术方案，步骤(3)的离心条件为，在300-1000rpm条件下离心0.5-2h，优选为在400-500rpm条件下离心1-1.5h。
28、本专利技术优选的技术方案，步骤(3)的冻干条件为，降温到-30～-50℃，预冻2-4h，在真空度为10-40pa条件下程序升温。
29、本专利技术优选的技术方案，所述的程序升温条件为，升温至-25～-10℃，保持2-4h；升温至-10～10℃，保持2-4h；升温至15-30℃，至冻干结束，保持真空状态5-10h。
30、本专利技术优选的技术方案，步骤(3)的冻干条件为，降温到-40℃，预冻3h，在真空度为20-30pa条件程序升温，升温至-20℃，保持3h；升温至0℃，保持3h；升温至20℃，保持3h；保持真空状态6h。
31、本专利技术的目的在于提供一种负载抗原的壳聚糖纳米粒的制备方法，所述壳聚糖纳米粒含有交联物、修饰物和抗原，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成，所述壳聚糖的平均分子量为10本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种负载抗原的壳聚糖纳米粒，所述壳聚糖纳米粒含有交联物、修饰物和抗原，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成，所述壳聚糖的平均分子量为100kDa-600kDa，壳聚糖的脱乙酰度为85-95％，所述交联剂选自三聚磷酸钠(TPP)、硫酸盐、柠檬酸盐、甘油磷酸钠中的任一种或其组合，所述修饰物选自泊洛沙姆、甘露糖中的任一种或其组合，所述修饰物与壳聚糖的质量比为1-20:1，所述抗原与壳聚糖的质量比为1:1-10。
2.如权利要求1所述的纳米粒，所述壳聚糖与交联剂的质量比为2-4：1，优选为2.5-3.5：1。
3.如权利要求1-2任一项所述的纳米粒，所述修饰物由泊洛沙姆：甘露糖按照质量比2-15:1的组合而成，优选为5-10:1。
4.如权利要求1-3任一项所述的纳米粒，所述壳聚糖纳米粒中抗原与壳聚糖的质量比为1:2-8，优选为1:4-6。
5.如权利要求1-4任一项所述的纳米粒，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的粒径为100-250nm，优选为140-200nm。
6.如权利要求1-5任一项所述的纳米粒
7.如权利要求1-6任一项所述的纳米粒，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的zeta电位为30-45mv，优选为35-40mv。
8.如权利要求1-7任一项所述的纳米粒，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的包封率≥85％，优选≥90％，更优选≥95％。
9.如权利要求1-8任一项所述的负载抗原的壳聚糖纳米粒的制备方法，所述壳聚糖纳米粒含有交联物、修饰物和抗原，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成，所述壳聚糖的平均分子量为100kDa-600kDa，壳聚糖的脱乙酰度为85-95％，所述交联剂选自三聚磷酸钠(TPP)、硫酸盐、柠檬酸盐、甘油磷酸钠中的任一种或其组合，所述修饰物选自泊洛沙姆、甘露糖中的任一种或其组合，所述修饰物与壳聚糖的质量比为1-20:1，所述抗原与壳聚糖的质量比为1:1-10，所述制备方法包括下述步骤：
10.如权利要求1-8任一项所述的负载抗原的壳聚糖纳米粒或如如权利要求9所述的方法制备得到的负载抗原的壳聚糖纳米粒用作鼻黏膜疫苗载体用于制备鼻黏膜疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种负载抗原的壳聚糖纳米粒，所述壳聚糖纳米粒含有交联物、修饰物和抗原，其中，所述交联物由壳聚糖和交联剂按照质量比为1-5：1交联而成，所述壳聚糖的平均分子量为100kda-600kda，壳聚糖的脱乙酰度为85-95％，所述交联剂选自三聚磷酸钠(tpp)、硫酸盐、柠檬酸盐、甘油磷酸钠中的任一种或其组合，所述修饰物选自泊洛沙姆、甘露糖中的任一种或其组合，所述修饰物与壳聚糖的质量比为1-20:1，所述抗原与壳聚糖的质量比为1:1-10。
2.如权利要求1所述的纳米粒，所述壳聚糖与交联剂的质量比为2-4：1，优选为2.5-3.5：1。
3.如权利要求1-2任一项所述的纳米粒，所述修饰物由泊洛沙姆：甘露糖按照质量比2-15:1的组合而成，优选为5-10:1。
4.如权利要求1-3任一项所述的纳米粒，所述壳聚糖纳米粒中抗原与壳聚糖的质量比为1:2-8，优选为1:4-6。
5.如权利要求1-4任一项所述的纳米粒，所述负载抗原的壳聚糖纳米粒的粒径为100-250nm，优选为140-200nm。
6.如权利要求1-5任一项所述的纳米粒，所述负载...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑爱萍，张慧，高晓怡，杜祎萌，董雨函，李蒙，王增明，刘楠，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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