【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种靶向肝癌细胞的荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、原发性肝癌是世界范围内的第5大常见肿瘤，其中90％为肝细胞癌。病毒性肝炎、肥胖和代谢综合征是肝细胞癌发病的明确危险因素。有数据表明，目前全球每年原发性肝癌患病人数高达62万人，且每年死于肝癌的患者高达58万人。肝癌早期呈隐匿发病的特点，临床表现不明显，确诊后大多数患者已处于中晚期，预后较差。因此，肝癌的早期诊断对于有效治疗和长期生存至关重要，肝癌的早期筛查十分重要。
2、甲胎蛋白(afp)血清学检查和常规超声是最普及的肝癌早期筛查手段。甲胎蛋白被认为是肝细胞癌血清学标记物的金标准。大约80％的原发性肝癌患者血清中甲胎蛋白会升高。然而，通常甲胎蛋白浓度与肿瘤大小有相关，但个体差异较大，一般认为病理分化接近正常肝细胞或分化程度极低者甲胎蛋白含量较低或测不出。并且，甲胎蛋白升高也可见于活动性肝病、生殖系统肿瘤、孕妇、胰腺癌和肺癌等。因此，因其敏感性和特异性差，通过单独检测甲胎蛋白来诊断早期肝癌不足以满足目前临床需求。肝脏超声因其非侵入、无辐射和性价比高的优点，是临床上筛查肝癌的首选影像检查手段。它可以发现或排除大部分的肝脏占位性病变，目前高档的超声仪能够显示直径1cm的肝癌。然而，对于病灶＜1cm的早期肝癌，由于仪器设备的检出受限，不能实现早期的诊断。因此，目前临床上不能对肝癌进行早期诊断主要有两个原因：(1)没有特异性的生物标志物；(2)仪器的精确度不够。
3、利用荧光分子成像技术，科研人员开发了一系列荧光探针用
4、因此，亟需提供一种肝癌细胞靶向成像的荧光探针，以解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于发展肝癌细胞特异性荧光探针，提高荧光探针检测肝癌的精确度和靶向性。
2、本专利技术的第一个方面，提供一种靶向肝癌细胞的荧光探针，结构式如下式(1)所示：
3、
4、本专利技术的第二个方面，提供所述荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
5、将式(4)所示5-戊基-1h-吡咯-2-甲醛、式(8)所示8-(1h-吡咯-2-基)辛酸、三氯氧磷和二氯甲烷/正己烷混合溶剂以1mol：1mol：1mol：2l的摩尔体积比混合，0-5℃反应2-3小时，所述二氯甲烷/正己烷混合溶剂由二氯甲烷和正己烷按照1：1的体积比混合；
6、随后加入二氨基顺丁腈和三氟化硼乙醚，20-25℃反应2-3小时，所述二氨基顺丁腈、三氟化硼乙醚与所述5-戊基-1h-吡咯-2-甲醛的摩尔比为1mol：4mol：5.6mol，产物经纯化得到所述荧光探针；
7、
8、进一步的，所述5-戊基-1h-吡咯-2-甲醛的制备包括：
9、将式(3)所示2-戊基-1h-吡咯、二甲基甲酰胺、三氯氧磷、二氯乙烯、乙酸钠与h2o以1mol：1.1mol：1.1mol：3.95l：4.5mol的摩尔体积比混合，0-5℃反应15-30分钟，产物经纯化得到所述5-戊基-1h-吡咯-2-甲醛；
10、
11、更进一步的，所述2-戊基-1h-吡咯的制备包括：
12、将式(2)所示1-(1h-吡咯-2-基)戊-1-酮和nabh4加入到异丙醇中，80-90℃加热回流10-12小时，产物经纯化得到所述2-戊基-1h-吡咯，所述1-(1h-吡咯-2-基)戊-1-酮、nabh4和异丙醇的摩尔体积比为1mol：7mol：2.19l；
13、
14、更进一步的，所述1-(1h-吡咯-2-基)戊-1-酮的制备包括：
15、将戊酰氯、吡咯和alcl3和二氯甲烷按照1.60l：1.03l：16.08mol的摩尔体积比混合，20-25℃反应12-15小时，产物经纯化得到所述1-(1h-吡咯-2-基)戊-1-酮。
16、进一步的，所述8-(1h-吡咯-2-基)辛酸的制备包括：
17、将式(7)所示8-氧代-8-(1h-吡咯-2-基)辛酸甲酯、nabh4和异丙醇按照8.79mol：61.6mol：17l的摩尔体积比混合，80-90℃加热回流10-15小时，残留物经纯化得到所述8-(1h-吡咯-2-基)辛酸；
18、
19、更进一步的，所述8-氧代-8-(1h-吡咯-2-基)辛酸甲酯的制备包括：
20、将式(6)所示8-氯-8-氧代辛酸甲酯、吡咯、alcl3和二氯甲烷按照26.89mol：29.7mol：32.3mol：38l的摩尔体积比混合，20-25℃反应12-15小时，产物经纯化得到所述8-(1h-吡咯-2-基)辛酸；
21、
22、更进一步的，所述8-氯-8-氧代辛酸甲酯的制备包括：
23、在0℃下，将辛二酸单甲酯、草酰氯、二甲基甲酰胺和二氯甲烷按照26.9mol：32.3mol：2.69mol：26l的摩尔体积比混合，反应2-3小时升温至24-25℃，产物经纯化得到所述8-氯-8-氧代辛酸甲酯。
24、本专利技术的第三个方面，提供所述荧光探针在制备用于肝癌诊断的检测试剂和/或试剂盒中的应用。
25、在本专利技术的一实施例中，所述检测试剂是能够靶向进入肝癌组织的成像试剂，将所述荧光探针溶于dmso中制成5mmol母溶液，然后将母溶液溶于生理盐水中制成50μmol溶液，将100μl荧光探针溶液经尾静脉注射到肝癌小鼠体内，1小时后，在激光共聚焦显微镜下进行成像。
26、本专利技术的第四个方面，提供所述荧光探针化合物在制备用于特异性标记肝癌细胞的检测试剂和/或试剂盒中的应用。
27、在本专利技术的一实施例中，所述检测试剂是能够靶向进入肝癌细胞成像试剂，所述成像试剂的细胞给药量为1-10μmol。
28、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
29、本专利技术通过高通量筛选得到一种特异性识别肝癌细胞的荧光探针。所述荧光探针能够被肝癌细胞过表达的溶质载体家族27成员2(slc27a2)转运到细胞内，可以有效地区分正常肝细胞和肝癌细胞。通过对肝癌组织进行荧光成像，该探针能够标记肝癌区域。本专利技术的荧光探针有助于肝癌的早期诊断，也为癌症的荧光指导手术提供了独特的诊断工具。
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1.一种靶向肝癌细胞的荧光探针，其特征在于，结构式如下式(1)所示：
2.权利要求1所述荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述5-戊基-1H-吡咯-2-甲醛的制备包括：
4.根据权利要求3所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述2-戊基-1H-吡咯的制备包括：
5.根据权利要求4所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述1-(1H-吡咯-2-基)戊-1-酮的制备包括：
6.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述8-(1H-吡咯-2-基)辛酸的制备包括：
7.根据权利要求6所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述8-氧代-8-(1H-吡咯-2-基)辛酸甲酯的制备包括：
8.根据权利要求7所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述8-氯-8-氧代辛酸甲酯的制备包括：
9.权利要求1所述荧光探针在制备用于肝癌诊断的检测试剂和/或试剂盒中的应用。
10.权利要求1所述荧光探针化合物在制备用于特异性标记肝
...【技术特征摘要】
1.一种靶向肝癌细胞的荧光探针，其特征在于，结构式如下式(1)所示：
2.权利要求1所述荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述5-戊基-1h-吡咯-2-甲醛的制备包括：
4.根据权利要求3所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述2-戊基-1h-吡咯的制备包括：
5.根据权利要求4所述荧光探针的制备方法，其特征在于，所述1-(1h-吡咯-2-基)戊-1-酮的制备包括：
6.根据权利要求2...
【专利技术属性】
技术研发人员：高敏，张荣太，拉丽莎·米亚西罗·恰拉米科丽，
申请(专利权)人：临沂大学，
类型：发明
国别省市：
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