【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因测序，具体而言，涉及用于mgi平台的测序接头、试剂盒对及dna测序文库的构建方法。
技术介绍
1、随着现代测序技术的发展，二代测序技术因具备高通量的优势，在疾病诊断、肿瘤筛查、病原鉴定以及药物靶标设计等领域发挥着越来越重要的作用。常规的测序流程主要包括核酸提取、文库构建、上机测序及生信分析几个步骤，其中文库构建是关键步骤，文库构建的质量直接关系到测序的成败和结果的准确性，同时文库构建的速度影响测序的效率。因此，建立一个快速、高质量的文库构建方法对整个测序过程及结果判读极为重要。
2、目前，市场主流的文库建库方法大都采用酶切法或超声打断法，并结合片段末端修复、接头连接以及文库扩增等步骤进行文库构建。这些方法虽较成熟，但文库构建过程繁琐、质量可控率较低、耗时耗力，用户体验感不高，限制了二代测序的快速发展和临床应用。
3、有鉴于此，二代测序
急需一种文库构建过程极简化、所构建文库质量好的技术，以满足二代测序技术产品快速转化的要求。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术一实施例的目的包括提供一种用于mgi平台的测序接头，用包含该测序接头的转座酶复合体对样本dna进行反应并构建文库，步骤简单且文库质量高。
2、在本专利技术的第一方面，提供用于mgi平台的测序接头，所述测序接头包括第一链和第二链，所述第一链包括与所述第二链互补结合的区域，以及相对于所述第二链的延伸区域；
3、所述延伸区域包含seq id no.1所示的核酸
4、所述第二链包含转座酶的特异性识别片段。
5、在本专利技术的一些实施例中，所述转座酶为tn5转座酶、tn5变体转座酶、mu转座酶、mu e392q转座酶、vibhar转座酶、rag转座酶或者tn552转座酶。
6、在本专利技术的一些实施例中，所述特异性识别片段包含seq id no.3所示的序列且5’端具有磷酸化修饰，3’端具有氨基修饰。
7、在本专利技术的第二方面，提供一种试剂盒，所述试剂盒包括扩增引物对，所述扩增引物对中的引物包含seq id no.1所示的核酸片段或者seq id no.2所示的核酸片段，还具有如下(1)或者(2)所述的技术特征：
8、(1)包括在第一方面中所述的用于mgi平台的测序接头；
9、(2)包括转座酶复合体，所述转座酶复合体包含第一方面中所述的用于mgi平台的测序接头。
10、在本专利技术的一些实施例中，所述转座酶复合体中的测序接头的数量大于等于2，其中，一个测序接头中的所述延伸区域包含seq id no.1所示的核酸片段，一个测序接头中的所述延伸区域包含seq id no.2所示的核酸片段。
11、在本专利技术的一些实施例中，所述转座酶为tn5转座酶、tn5变体转座酶、mu转座酶、mu e392q转座酶、vibhar转座酶、rag转座酶或者tn552转座酶。
12、在本专利技术的一些实施例中，所述扩增引物对中的一条引物的序列如seq id no.10所示，另一条引物的序列如seq id no.11所示。
13、在本专利技术的一些实施例中，所述试剂盒还包含dna提取试剂、片段化缓冲液和扩增反应液中的一种或者多种。
14、在本专利技术的一些实施例中，所述试剂盒具有如下技术特征中的一个或者多个：
15、(1)所述片段化缓冲液包含25mm-75mm taps-koh、20mm-30mm mgcl2、40％-60％(v/v)dmf、ph7-8；
16、(2)所述扩增反应液包含10mm-50mm tris-hcl、10mm-50mm kcl、10mm-50mm(nh4)2so4、1％-10％(v/v)dmso、0.02wt％-0.05wt％sds、0.05wt％-0.1wt％np40、0.01mg/ml-0.1mg/ml bsa、0.1％-0.5％(v/v)tritom-x100、1mm-0.5mm dntp和1u-5u dna聚合酶，ph为8.6-8.9。
17、在本专利技术的第三方面，提供一种dna测序文库的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
18、于片段化缓冲液中，样本dna和转座酶复合体进行片段化反应，对所得反应产物进行扩增，构建dna测序文库；
19、所述构建方法具有如下(1)和(2)所示的技术特征中的一个或者多个：
20、(1)所述转座酶复合体为第二方面中定义的试剂盒中的转座酶复合体；和，
21、(2)扩增采用第二方面中定义的试剂盒中的扩增引物对。
22、在本专利技术的一些实施例中，所述构建方法还具有如下(3)和(4)所示的技术特征中的一个或者多个：
23、(3)所述片段化缓冲液为第二方面中定义的试剂盒中的片段化缓冲液；和，
24、(4)扩增采用第二方面中定义的试剂盒中的扩增反应液。
25、相对于传统的技术，本专利技术具备如下有益效果：
26、本专利技术基于转座酶技术提供一种测序接头，用包含该测序接头的转座酶复合体对样本dna进行反应并构建文库，相对于传统酶切法建库和超声打断建库来讲，步骤简单、结果重复性高，且文库质量高(dna均一性、稳定性高、覆盖度高)。本专利技术适用于mgi平台快速建库，极大节约建库时间和建库成本。
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1.用于MGI平台的测序接头，其特征在于，所述测序接头包括第一链和第二链，所述第一链包括与所述第二链互补结合的区域，以及相对于所述第二链的延伸区域；
2.根据权利要求1所述的用于MGI平台的测序接头，其特征在于，所述转座酶为Tn5转座酶、Tn5变体转座酶、Mu转座酶、Mu E392Q转座酶、Vibhar转座酶、RAG转座酶或者Tn552转座酶。
3.根据权利要求1或者2所述的用于MGI平台的测序接头，其特征在于，所述特异性识别片段包含SEQ ID No.3所示的序列且5’端具有磷酸化修饰，3’端具有氨基修饰。
4.试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增引物对，所述扩增引物对中的引物包含SEQ ID No.1所示的核酸片段或者SEQ ID No.2所示的核酸片段，还具有如下(1)或者(2)所述的技术特征：
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述转座酶复合体中的测序接头的数量大于等于2，其中，一个测序接头中的所述延伸区域包含SEQ ID No.1所示的核酸片段，一个测序接头中的所述延伸区域包含SEQ ID No.2所示的核酸片
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述转座酶为Tn5转座酶、Tn5变体转座酶、Mu转座酶、Mu E392Q转座酶、Vibhar转座酶、RAG转座酶或者Tn552转座酶。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物对中的一条引物的序列如SEQ ID No.10所示，另一条引物的序列如SEQ ID No.11所示。
8.根据权利要求4至7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含DNA提取试剂、片段化缓冲液和扩增反应液中的一种或者多种。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒具有如下技术特征中的一个或者多个：
10.一种DNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.用于mgi平台的测序接头，其特征在于，所述测序接头包括第一链和第二链，所述第一链包括与所述第二链互补结合的区域，以及相对于所述第二链的延伸区域；
2.根据权利要求1所述的用于mgi平台的测序接头，其特征在于，所述转座酶为tn5转座酶、tn5变体转座酶、mu转座酶、mu e392q转座酶、vibhar转座酶、rag转座酶或者tn552转座酶。
3.根据权利要求1或者2所述的用于mgi平台的测序接头，其特征在于，所述特异性识别片段包含seq id no.3所示的序列且5’端具有磷酸化修饰，3’端具有氨基修饰。
4.试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增引物对，所述扩增引物对中的引物包含seq id no.1所示的核酸片段或者seq id no.2所示的核酸片段，还具有如下(1)或者(2)所述的技术特征：
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述转座酶复合体中的测序接头的数量大于等...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨超，凡海峰，
申请(专利权)人：上海明悦医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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