一种在莲子子叶中瞬时表达基因的方法技术

本发明专利技术提供了一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法，该方法主要包含以下步骤：（1）授粉后9‑15天莲子的选择和子叶的获取；（2）目的基因表达载体的构建；（3）重组表达载体转化到农杆菌；（4）农杆菌注射到莲子子叶。本发明专利技术所述的方法通过注射特定发育阶段的莲子子叶，实现对目的基因的瞬时超表达，操作简便快捷，可操作性强，结果可靠，可快速高效地进行莲子代谢物合成和发育相关基因功能的本体验证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子生物技术和基因工程领域，具体涉及一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法。

技术介绍

1、莲是一种山龙眼目(proteales)莲科(nelumbonaceae)莲属(nelumbo)多年水生草本植物，集食用、药用和观赏价值于一身。莲子中含有丰富的淀粉、蛋白质、维生素、多种微量元素以及生物碱、黄酮等生物活性物质，自古以来就是一种滋补佳品。特别是莲子子叶中所含的淀粉，属于一种天然的高直链淀粉，具有显著的降血糖、保护肠道健康等功能，是开发降血糖功能食品和肠道益生元的重要资源。目前莲的生理生化和分子生物学研究已较为深入，但由于莲愈伤组织易褐化，因此尚无法建立稳定的遗传转化体系，这严重制约莲分子生物学和基因功能的研究。

2、基因瞬时过表达技术是基因功能研究的常见手段，在越来越多的物种中得到应用。瞬时表达技术是指将目的基因通过植物表达载体导入植物活体细胞，实现目的基因在一定时间内的大量表达，以快速反映基因功能。与稳定表达相比，瞬时表达所需时间短、操作简单、成本低、转化效果好等优点，已被国内外众多学者广泛应用。常见植物瞬时表达方法有peg介导本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，所述的农杆菌侵染液含有10 mM MgCl2，10 mM吗啉乙磺酸和200 μM乙酰丁香酮。

3.根据权利要求1所述的在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，所述步骤（1）中莲子用75%乙醇溶液消毒1min，然后用无菌水漂洗3次，在无菌状态下晾干用于后续实验。

4.根据权利要求1所述的在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，所述步骤（2）中农杆菌表达载体为pMDC43质粒。

5.根据权利要求1所述的在莲子子...

【技术特征摘要】

1.一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，所述的农杆菌侵染液含有10 mm mgcl2，10 mm吗啉乙磺酸和200 μm乙酰丁香酮。

3.根据权利要求1所述的在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，所述步骤（1）中莲子用75%乙醇溶液消毒1min，然后用无菌水漂洗3次，在无菌状态下晾干用于后续实验。

【专利技术属性】
技术研发人员：杨美，孙恒，宋贺云，邓显豹，刘娟，杨东，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：