【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物碱制备，具体涉及一种bousigonine d的制备方法。
技术介绍
1、天然产物bousigonine d属于eburnane-aspidosperma型单萜吲哚生物碱二聚体，其结构中环系复杂，手性众多，利用全合成或仿生合成的方式在实验室或工厂化制备不具备现实意义，因此，bousigonine d的提取制备在植物资源替代利用和药物先导发现过程中具有广泛应用前景。
2、目前bousigonine d的提取制备方法为中从奶子藤中(bousigonia mekongensis)分离，例如，现有技术(zhi-wei wang,et al.monoterpene indole alkaloids from theroots of bousigonia mekongensis and their anti-diabetic nephropathy activity,fitoterapia,2021,153,104964)公开了一种从奶子藤中分离bousigonine d的方法。然而，上述现有技术中bousigonine d的收率较低(仅为0.000183％)，导致其活性研究仅能停留在细胞水平。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术目的在于提供一种bousigonine d的制备方法，采用本专利技术提供的制备方法制备得到的bousigonine d收率高。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种bou
4、将闷奶果与醇-水混合提取后浓缩，得到醇浸取膏；所述醇-水中醇的体积分数为90～100％；
5、将所述醇浸取膏分散于水中，依次采用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取相；
6、将所述乙酸乙酯萃取相进行硅胶柱色谱分离，得到组分fr.2；所述硅胶柱色谱分离采用的洗脱剂包括二氯甲烷-甲醇；所述二氯甲烷-甲醇中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1～1:1；
7、将所述组分fr.2进行凝胶柱色谱分离，得到生物碱组分；所述凝胶柱色谱分离采用的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇混合物；所述二氯甲烷-甲醇混合物中二氯甲烷的体积分数为50％；
8、将所述生物碱组分进行反相柱色谱分离，得到bousigonine d；所述反相柱色谱分离采用的洗脱剂为甲醇-水，所述甲醇-水中甲醇的体积分数依次为20～30％、40～50％、60～70％和85～100％；
9、所述bousigonine d的结构如式i所示：
10、
11、优选的，所述闷奶果干重与单次混合提取用醇-水的固液比为1g:4～10ml；
12、所述醇-水中的醇包括甲醇和/或乙醇。
13、优选的，所述混合提取的温度为45～50℃；所述混合提取的次数为3～4次，单次混合提取的时间为3～4h。
14、所述混合提取得到的提取液的质量与所述醇浸取膏的质量之比为40～80:1。
15、优选的，所述分散用水的质量为醇浸取膏质量的2～5％。
16、优选的，所述石油醚萃取的次数为3～5次，醇浸取膏的质量与单次石油醚萃取用石油醚的体积之比为1g:3～10ml。
17、优选的，所述乙酸乙酯萃取的次数为3～5次，醇浸取膏的质量与单次乙酸乙酯萃取用乙酸乙酯的体积之比为1g:3～10ml。
18、优选的，所述硅胶柱色谱分离过程中，二氯甲烷-甲醇中二氯甲烷和甲醇的体积比依次为50:1、30:1、20:1、10:1、5:1和1:1。
19、优选的，所述硅胶柱色谱分离采用的洗脱剂还包括石油醚-丙酮、二氯甲烷-丙酮和石油醚-乙酸乙酯中的一种或几种。
20、优选的，所述反相柱色谱分离后，还包括：收集甲醇体积分数为85～100％的洗脱液进行结晶，得到bousigonine d。
21、本专利技术提供了一种bousigonine d的制备方法。本专利技术首次从闷奶果中分离制备得到bousigonine d，通过对闷奶果进行醇-水提取及石油醚和乙酸乙酯萃取，使目标化合物bousigonine d最大程度溶出，再依次进行硅胶柱色谱分离、凝胶柱色谱分离和反相柱色谱分离，制备得到的bousigonine d的收率高达0.25％且纯度高达98％，有利于进一步挖掘药物分子先导化合物bousigonine d更多的生物学功能，为开发临床用药小分子提供了选择模板。而且，本专利技术提供的制备方法简单，成本低，适宜工业化生产。
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1.一种bousigonine D的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述闷奶果干重与单次混合提取用醇-水的固液比为1g:4～10mL；
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述混合提取的温度为45～50℃；所述混合提取的次数为3～4次，单次混合提取的时间为3～4h。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述混合提取得到的提取液的质量与所述醇浸取膏的质量之比为40～80:1。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分散用水的质量为醇浸取膏质量的2～5％。
6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述石油醚萃取的次数为3～5次，醇浸取膏的质量与单次石油醚萃取用石油醚的体积之比为1g:3～10mL。
7.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸乙酯萃取的次数为3～5次，醇浸取膏的质量与单次乙酸乙酯萃取用乙酸乙酯的体积之比为1g:3～10mL。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱色谱分离采用的洗脱剂还包括石油醚-丙酮、二氯甲烷-丙酮和石油醚-乙酸乙酯中的一种或几种。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反相柱色谱分离后，还包括：收集甲醇体积分数为85～100％的洗脱液进行结晶，得到bousigonine D。
...【技术特征摘要】
1.一种bousigonine d的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述闷奶果干重与单次混合提取用醇-水的固液比为1g:4～10ml；
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述混合提取的温度为45～50℃；所述混合提取的次数为3～4次，单次混合提取的时间为3～4h。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述混合提取得到的提取液的质量与所述醇浸取膏的质量之比为40～80:1。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分散用水的质量为醇浸取膏质量的2～5％。
6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述石油醚萃取的次数为3～5次，醇浸取膏的质量与单次石油醚萃取用石...
【专利技术属性】
技术研发人员：张于，李胜，郭伶俐，陈谌，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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