【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及非编码rna及其调控的靶基因和应用，具体为与鸽毛滴虫抗性相关的mirna及其靶基因的应用。
技术介绍
1、鸽毛滴虫病是肉鸽养殖中一种常见的寄生虫病，主要感染口腔、咽、食管和嗉囊等消化道组织；鸽毛滴虫传播广泛并易引起继发感染，进而造成重大的经济损失；目前，生产上常使用药用植物提取物和化学合成药物进行毛滴虫病预防和治疗，容易引起耐药性及药物残留，进而作为畜禽产品危害人类健康；
2、micrornas(mirnas)是一类长度为22个核苷酸左右的单链rna,不具有编码潜能且广泛存在于自然界中；mirna种子序列与mrna的3'utr或cds区碱基配对结合，促进mrna降解或抑制基因翻译，从而发挥转录后调控作用；mirna广泛参与各种生物学过程，主要包括动植物发育、癌症发生、细胞分化、凋亡和代谢等；已有研究发现mirna在宿主对寄生虫感染作出免疫应答反应方面发挥重要的调节作用；
3、哺乳动物细胞中的宿主mirna已被证明可以调节细胞对各种病原体感染的反应，包括病毒、寄生虫和细菌；mir-223在人胃黏膜幽门螺杆菌感染受黏膜的中性粒细胞中特异性表达；mir-21由于其在许多癌症中的异常过表达而被确定为致癌mirna；以上研究说明，mirna在宿主免疫过程中发挥关键作用，但关于mirna参与调控鸽毛滴虫感染及成纤维细胞增殖、凋亡和侵袭的分子机制还有待研究。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决上述问题，设计了与鸽毛滴虫抗性相关的mirna及其靶基因
2、实现上述目的本专利技术的技术方案为，与鸽毛滴虫抗性相关的mirna，其核苷酸序列为seq id no.1：ccagcaggagcugggagccucu。
3、与鸽毛滴虫抗性相关的mirna作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物的应用。
4、对本技术方案的进一步补充，调控的靶基因为去泛素化酶基因（ otud1，其核苷酸序列为seq id no.4所示）。
5、本专利技术对1日龄乳鸽进行毛滴虫攻毒试验，通过高通量测序技术对口腔组织进行mirna-mrna分析，筛选到与鸽感染毛滴虫后的抗性显著相关的mirna，并初步确定了去泛素化酶基因（ otud1）为其靶基因（其核苷酸序列为seq id no.4），将mirna命名为novel-mir-741，其核苷酸序列为seq id no.1所示。
6、本专利技术进一步通过实验验证证明，novel-mir-741和 otud1在毛滴虫抗性组和对照组样本间显著性差异表达，即novel-mir-741可以靶向调控 otud1表达。
7、因此，所述的与鸽感染毛滴虫后免疫反应相关的novel-mir-741及其调控靶基因 otud1能作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物或靶点应用，包括以下步骤：
8、（1）判定鸽毛滴虫感染情况：采集鸽口腔咽拭子，并在显微镜下计数，根据毛滴虫数量判定鸽感染毛滴虫情况；
9、（2）预测抗性相关的mirna及其靶基因的表达情况：检测待测鸽口腔组织中所述的mirna和去泛素化酶基因的表达水平。
10、一种预测抗鸽毛滴虫感染情况的荧光定量pcr试剂盒，包括：rna反转录试剂、荧光定量rt-pcr扩增试剂、荧光定量pcr引物对去泛素化酶基因；其中，所述荧光定量pcr引物对去泛素化酶基因的核苷酸序列分别为seq id no.2和seq id no.3所示;
11、seq id no.2：ttccgcttccacatcatccc；
12、seq id no.3：agtggtcagcgatgtagtgc。
13、对本技术方案的进一步补充，所述预测抗鸽毛滴虫感染情况的方法包括以下步骤：
14、（1）提取待测鸽口腔组织的样本的总rna;
15、（2）利用加尾法反转录试剂盒进行去泛素化酶基因的反转录；
16、（3）采用seq id no.2和seq id no.3所示的扩增引物进行所述去泛素化酶基因的荧光定量pcr检测；
17、（4）将检测的mirna和去泛素化酶基因的表达水平结果与对照组口腔组织的表达水平进行比较，预测抗鸽毛滴虫感染情况。
18、novel-mir-741的调控靶点 otud1的表达水平也与鸽抗毛滴虫感染相关，也可用于作为分子标记预测鸽抗毛滴虫感染情况，在应用时，可单独使用novel-mir-741，也可将novel-mir-741和 otud1两者联合使用以进一步提高检测的准确性。
19、鸽嗉囊组织是毛滴虫感染的主要部位，而 otud1基因高表达可以促进嗉囊成纤维细胞的增殖和迁移，而抑制其凋亡，在感染毛滴虫后仍具有促进嗉囊组织正常生长发育的功能，体现了其对鸽毛滴虫病的抗性作用。
20、其有益效果在于，本专利技术成功筛选出口腔组织中高表达的 otud1基因及其对应的novel-mir-741，其可作为鸽抗毛滴虫感染的分子标志物或靶点，应用于鸽抗毛滴虫感染情况预测，并有利于进一步作为选育抗鸽毛滴虫感染的分子标记，极具应用前景和理论价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.与鸽毛滴虫抗性相关的miRNA，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID No.1：ccagcaggagcugggagccucu。
2.根据权利要求1所述的与鸽毛滴虫抗性相关的miRNA作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物的应用。
3.根据权利要求2所述的与鸽毛滴虫抗性相关的miRNA，其特征在于，调控的靶基因为去泛素化酶基因。
4.根据权利要求3所述的与鸽毛滴虫抗性相关的miRNA及其靶基因作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物或靶点应用。
5.根据权利要求4所述的抗鸽毛滴虫感染的分子标志物或靶点的应用，其特征在于，包括以下步骤：
6.一种预测抗鸽毛滴虫感染情况的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于,包括：RNA反转录试剂、荧光定量RT-PCR扩增试剂、荧光定量PCR引物对去泛素化酶基因；其中，所述荧光定量PCR引物对去泛素化酶基因的核苷酸序列分别为SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示;
7.根据权利要求6所述的与鸽毛滴虫抗性相关的miRNA及其靶基因的应用，其特征在于，所述预测抗鸽毛滴虫感染情况的方法包括以
...【技术特征摘要】
1.与鸽毛滴虫抗性相关的mirna，其特征在于，其核苷酸序列为seq id no.1：ccagcaggagcugggagccucu。
2.根据权利要求1所述的与鸽毛滴虫抗性相关的mirna作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物的应用。
3.根据权利要求2所述的与鸽毛滴虫抗性相关的mirna，其特征在于，调控的靶基因为去泛素化酶基因。
4.根据权利要求3所述的与鸽毛滴虫抗性相关的mirna及其靶基因作为抗鸽毛滴虫感染的分子标志物或靶点应用。
5.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员：麻慧，陈继兰，张然，袁经纬，李云雷，孙研研，马琳，陈超，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。