【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学动物模型的实验技术，特别是涉及一种非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建方法及评价方法。
技术介绍
1、非酒精性脂肪肝(nafld)是全球最常见的慢性肝病，其特征是肝脏脂质堆积，与肥胖、心血管疾病和代谢综合征等疾病密切相关。在全球范围内，非酒精性脂肪肝呈上升趋势，影响着四分之一的世界人口，对健康构成严重威胁。此外，nafld发病率的恶化趋势也增加了全球慢性肝病的负担。在传统的中医理论中，湿热证与nafld之间有着密切的联系，是nafld最常见的致病证候类型之一。nafld湿热证是一种慢性的、复杂的病证，其特点是持续的疲劳、发热、口苦、口渴、尿黄、大便粘稠等。目前，中医证候类型的诊断主要依靠主观观察。因此，在评价中医证候类型时，有必要使用一个量化的指标，也可以避免从业者的主观误差，进一步揭示中医证候的生物学基础。
2、动物模型可以帮助人们更好的认识疾病，对于治疗药物的研究也具有重要作用。文献研究表明，尽管过去几十年在研究nafld的机制方面取得了极大进步，但是对nafld湿热证动物模型的研究十分有限，缺乏统一的造模及评价标准，研究存在局限性，阻碍了对nafld湿热证发病机制的研究和新药的研发。因此，本研究旨在建立一个稳定的、可重复的nafld湿热证的动物模型。同时，有必要为动物模型建立一个客观有效的评价体系，为nafld湿热证治疗建立循证医学依据。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术旨在提供一种nafld湿热证小鼠模型的构建及评价方法，解决现有技
2、本专利技术的技术方案为：
3、一种非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
4、(1)采用高脂高糖饮食和高温高湿环境共同干预实验动物；
5、(2)对非酒精性脂肪性肝病湿热证模型进行评价和检测分析；所述模型动物的评价和检测包括宏观指标、病理组织、糖脂代谢指标、炎症指标、肠道菌群变化和特异性基因的表达。
6、所述模型动物的评价和检测还包括免疫指标和氧化应激指标。
7、优选的，步骤(1)的高温高湿环境是指将模型动物放入小动物培养箱，设置温度35℃、湿度95％，每日干预8小时；所述模型动物为小鼠。
8、所述宏观指标包括模型动物的体重、进食量、饮水量、抓力、肛温、毛发油腻及旷场实验。
9、所述病理组织指标包括he染色和油红o染色观察肝脏组织变化。
10、所述糖脂代谢指标包括空腹血糖、随机血糖、血清血糖、葡萄糖耐量、胰岛素耐量、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。
11、所述炎症指标包括肝脏组织的il1β、il6、il10、tnf-α。
12、所述肠道菌群变化指丹毒丝菌纲(erysipelotrichia)、丹毒丝菌目(erysipelotrichales)、丹毒丝菌科(erysipelotrichaceae)和粪杆菌属(faecalibaculum)菌群丰度增加。
13、所述特异性基因包括cyp4a10、irf7、cptlb和zbp1。
14、所述免疫指标包括肝脏组织的m1和m2型巨噬细胞。；氧化应激指标包括肝脏组织的超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、一氧化氮和丙二醛。
15、本专利技术的有益效果是：
16、(1)本专利技术通过高脂高糖饮食构建nafld湿热证形成的内因，高温高湿环境干预构建nafld湿热证形成的外因，将中医湿热证动物模型和nafld动物模型有机结合，并对造模方法进行优化处理，造模期间无化学试剂干预，动物模型符合nafld湿热证的临床表现，模拟了疾病的发生发展，与人类的发病机制十分接近。结果表明，构建的动物模型具备稳定性好、重复性高、易于操作、无化学毒副作用、死亡率低的特点。
17、(2)传统动物模型评价指标主观性较强，而本专利技术的评价指标特异性强，包括筛选出湿热证型nafld特征性基因，发现湿热证型nafld优势菌群，更加具备科学性和规范化。本专利技术为nafld湿热证模型评价提供了科学方法。
18、(3)中医药治疗非酒精性脂肪肝湿热证疗效确切，毒副作用小，相比西药具有独特的优势。辩证论治是中医药的指导思想，现有动物模型不能体现中医证型，本方法中建造的动物模型即有非酒精性脂肪肝的疾病特点，又具备湿热证的特点，可以用于研究中医药疗效评价和作用机理研究，为非酒精脂肪肝中医证型的发病机制和新药研发奠定基础。
19、(4)本专利技术首次提出使用特异性基因对湿热证模型进行评价，发现了四种对于湿热证模型动物起到影响作用的基因cyp4a10、irf7、cpt1b和zbp1，实验结果显示模型动物组cpt1b、cyp4a10、zbp1、irf7基因mrna的表达显著性升高；且western blot结果证实，与正常组相比，模型动物组cyp4a10、zbp1、iri7的蛋白表达升高。这为湿热证动物模型的建立在基因水平给出了更准确的评价方法和标准。
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1.一种非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，所述模型动物的评价和检测还包括免疫指标和氧化应激指标。
3.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述步骤(1)的高温高湿环境是指将模型动物放入小动物培养箱，设置温度35℃、湿度95％，每日干预8小时；所述模型动物为小鼠。
4.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述宏观指标包括模型动物的体重、进食量、饮水量、抓力、肛温、毛发油腻及旷场实验。
5.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述病理组织指标包括HE染色和油红O染色观察肝脏组织变化。
6.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述糖脂代谢指标包括空腹血糖、随机血糖、血清血糖、葡萄糖耐量、胰岛素耐量、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。p>
7.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述炎症指标包括肝脏组织的IL1p、IL6、IL10、TNF-α。
8.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述肠道菌群变化指丹毒丝菌纲(Erysipelotrichia)、丹毒丝菌目(Erysipelotrichales)、丹毒丝菌科(Erysipelotrichaceae)和粪杆菌属(Faecalibaculum)菌群丰度增加。
9.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述特异性基因包括cyp4a10、Irf7、cpt1b和zbp1。
10.根据权利要求2所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述免疫指标包括肝脏组织的M1和M2型巨噬细胞；氧化应激指标包括肝脏组织的超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、一氧化氮和丙二醛。
...【技术特征摘要】
1.一种非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，所述模型动物的评价和检测还包括免疫指标和氧化应激指标。
3.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述步骤(1)的高温高湿环境是指将模型动物放入小动物培养箱，设置温度35℃、湿度95％，每日干预8小时；所述模型动物为小鼠。
4.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述宏观指标包括模型动物的体重、进食量、饮水量、抓力、肛温、毛发油腻及旷场实验。
5.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述病理组织指标包括he染色和油红o染色观察肝脏组织变化。
6.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝病湿热证模型的构建及检测方法，其特征在于：所述糖脂代谢指标包括空腹血糖、随机血糖、血清血糖、葡萄糖耐量、胰岛...
【专利技术属性】
技术研发人员：康宁，邱峰，曹世杰，李志鹏，赵少莉，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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