土著益生微生物固体菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术主要涉及微生物的发酵方法，尤其涉及利用食品行业产生的废液废渣制备巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌三菌组合的固体菌剂的方法和应用。一种土著益生微生物固体菌剂，其主要特点在于由巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、圆褐固氮菌和固体培养基组成，其三种菌株的重量百分比为巨大芽孢杆菌为５５～６５％、胶冻样芽孢杆菌为３０～３５％、圆褐固氮菌５～１０％，所述的巨大芽孢杆菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ?３７７０；所述的胶冻样芽孢杆菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ?３７６９；所述的圆褐固氮菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ?３７６８。所述的微生物固体菌剂用于农作物和植物生长剂或畜禽饲料添加剂。本发明专利技术的优点是用食品行业产生的废液、废渣为原料，生产过程无“三废”污染，生产工艺简单，操作方便，节省人力，节省能源，其固体菌剂，可作为微生物肥料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术主要涉及微生物的发酵方法，尤其涉及利用食品行业产生的废液废渣制备 巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌三菌组合的固体菌剂的方法和应用。
技术介绍
传统的微生物菌剂的制备方法，所用原料是葡萄糖、蛋白胨、糖蜜、牛肉膏、维生 素，无机盐和水配制成液体培养基，从试管斜面菌种上刮取菌苔接种在液体培养基中，经好 氧或厌氧培养制备成液体菌剂或将液体菌种接种在由玉米粉、麸皮、豆面、籽饼、豆粕和米 糠等原料组成的固料培养基上，发酵制备成固体菌剂。其缺点是所用原料成本高，生产工 艺复杂，不能节约能源。混合菌剂传统做法，是将各种不同的菌种(好氧和厌氧)在各自不同的生长环境 中培养菌种，然后从每个菌种的培养物中刮取菌苔制取每个菌的液体菌悬液，再转种于各 自的液体培养液经通气或厌氧发酵培养后离心制取活性细胞菌，将沉淀物喷雾干燥制成粉 剂，制成多菌的混合。其缺点是制备工艺复杂，发酵周期长，成本高，应用受到限制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于避免现有微生物固体菌剂生产技术不足之处而提供一种土著 益生微生物固体菌剂及其制备方法和应用。使用巨大芽孢杆菌与胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌科学配伍，以新鲜豆腐或粉丝 或玉米或洋芋淀粉产生的废渣及农业秸秆为原料，添加少量无机盐，培养料不灭菌，三种菌 在同一条件下制备巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌固体菌剂的制备方法。该 方法是利用食品行业产生的废渣为原料，生产过程无“三废”污染，生产工艺简单，操作方 便，节省人力，节省能源，其固体菌剂，即可用于有机废水净化剂，又可作为微生物肥料和微 生物饲料添加剂。本专利技术的目的可以通过采用以下技术方案实现一种土著益生微生物固体菌剂， 其主要特点在于由巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)、圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum)禾口固体培养基组成，其三种菌 株的重量百分比为巨大芽孢杆菌为55 65%、胶冻样芽孢杆菌为30 35%、圆褐固氮菌 5 10%，所述的巨大芽孢杆菌的保藏号为CGMCC 3770 ；所述的胶冻样芽孢杆菌的保藏号 为CGMCC 3769 ；所述的圆褐固氮菌的保藏号为CGMCC 3768。所述的土著益生微生物固体菌剂，所述的固体培养基包括有重量百分比为以干料 计50-80%的糟渣，15-30%的玉米芯粉，8-12%的麸皮，0. 5-0. 8%的玉米面，0. 1-3 %的尿 素，0. 2-4%的硫酸铵，再加入新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水使 其含水重量百分比为45-65%，用的石灰水调pH 7. 0-7. 5。一种土著益生微生物固体菌剂的制备方法，其主要特点在于包括有如下步骤A. 土著益生巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌琼脂斜面培养基的制备及菌种的培a.琼脂斜面培养基的制备麦芽汁0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、蛋白胨0.2-0.6%、 琼脂粉1_3%、无菌水80-120ml，加热溶解后，用1 %的氢氧化钠调pH值至ρΗ7· 0-7. 5，经 110-114°C,30-35分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于15X1. 5cm的干燥灭菌的试管 摆成斜面待凝固后备用；b.菌种的培养分别取巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌的母种琼脂斜面菌，在无 菌条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经28-32°C、24-48小时培养，即得琼脂斜 面菌种，为巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌的一级菌种；B. 土著益生圆褐固氮菌琼脂斜面培养基的制备及菌种的培养a.琼脂斜面培养基的制备磷酸二氢钾0.01-0. 03%，硫酸镁0.01-0. 03%， 氯化纳0. 01-0. 03 %，碳酸钙0. 4-0. 6 %，甘露醇0. 8-1. 2 %，硫酸钙0. 08-0. 12 %，琼脂 1. 8-2. 2 %，水80-120毫升，加热溶解，用1 %的氢氧化纳调pH值6. 8-7. 0，经110_114°C， 30-35分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下，分装于15 X 1. 5cm干燥灭菌的试管摆成斜面待凝 固后备用；b. 土著益生圆褐固氮菌菌种的培养取土著益生圆褐固氮菌的母种琼脂斜面菌， 在无菌条件下转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经28-32°C，48-32h，即得土著益生圆 褐固氮菌琼脂斜面菌种，为一级菌种；C 土著益生巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、圆褐固氮菌液体培养基的制备及液体 菌种的培养a.液体培养基的制备在1升新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀 粉废水中加入硫酸铵l_2g，磷酸0. 5-lml，用的石灰水调pH 7. 0-7. 5，分装于500ml三 角烧瓶中，分装量为瓶子容量的1/4，然后经110-112°C，30-35分钟高压灭菌，冷却后备用；b.分别取巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌的一级菌种，在无菌条件 下，接种于液体培养液中，经28-32°C、24-48小时培养，其培养液为二级菌种；c.分别取巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌的二级菌种再扩大培养， 上摇床振荡培养，经振幅100 120r/min、温度28 32°C、18 24小时培养，其菌液为三 级菌种；d.分别将重量百分比为巨大芽孢杆菌为55 65%、胶冻样芽孢杆菌为30 35%、圆褐固氮菌5 10%三级菌种再扩大培养，三种菌在同一个发酵罐，经28-32°C、 18-24小时的通气搅拌发酵培养，其菌液为巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌混 合菌剂，或为四级菌种继续逐级扩大培养，用此菌剂作为制备固体菌剂的菌种；D.固体菌剂的培养将含水比为60-80%新鲜的豆腐渣或粉丝渣或玉米淀粉渣或洋芋淀粉，加入经 0. 5-1.2% H2SO4处理的玉米芯粉和麸皮、玉米面，其中玉米芯粉、麸皮、玉米面的重量比为 2 4 1 3 0. 5 1，并加入相对于干料的0. 2-4%的硫酸铵，相对于干料的0. 1-3% 的尿素，均勻搅拌，使其含水量达到45-65%，用的石灰水调pH 7. 0-7. 5，然后加入相对 于干料总量为8-12%巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌混合菌液，充分搅拌混 合均勻后，在发酵和干燥两用发酵池中经温度28 32°C通风搅拌发酵18 24小时后，再 经40 60°C通热风干燥，制成巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和圆褐固氮菌固体菌剂。5所述的土著益生微生物固体菌剂的应用，所述的微生物固体菌剂应用于农作物和 植物生长剂或畜禽饲料添加剂。土著益生巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、圆褐固氮菌是在暗灰钙土、淡灰钙土、红 粘土和盐碱土四种不同土壤类型多种植物根区的0-10Cm、10-20Cm、20-30Cm深层土壤中的 266个样品分离培养所得的3868株，经筛选优育后，经紫外线和亚硝基胍(NTG)诱变和反复 驯化培养又经生物化学、形态学鉴定获得优良菌株；2010年04月26日，在中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏的土著 益生巨大芽孢杆菌(Bacillus megterium) (LJP106)菌种保藏号为CGMCC 3770 土著益生胶 冻样芽胞杆菌(Bacillus mucilagi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种土著益生微生物固体菌剂，其特征在于由巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、胶冻样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓｕｓ）、圆褐固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｍ）和固体培养基组成，其三种菌株的重量百分比为巨大芽孢杆菌为５５～６５％、胶冻样芽孢杆菌为３０～３５％、圆褐固氮菌５～１０％，所述的巨大芽孢杆菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．３７７０；所述的胶冻样芽孢杆菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．３７６９；所述的圆褐固氮菌的保藏号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．３７６８。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钟芳，孙荣高，秦伟志，李春杰，柴青，
申请(专利权)人：兰州市南北两山环境绿化工程指挥部，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]