【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外诊断，具体涉及一种检测pla2r-igg抗体和tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。
技术介绍
1、特发性膜性肾病(imn)是一种免疫介导的肾小球疾病，病理表现为肾小球上皮的免疫沉积和毛细血管壁功能的损害，临床表现有尿蛋白、低蛋白血症和水肿。如果不进行治疗，约三分之一的imn患者在一定程度上会发生自行缓解，三分之一的患者会发展成非进展性的慢性肾脏疾病，剩下的三分之一则会继续恶化，最终发展为终末期肾病(esrd)。imn是一种自身免疫性疾病，目前诊断的金标准仍然是肾穿刺。imn的临床预后监测主要包括尿蛋白和血清白蛋白。早期诊断和干预不仅可以为imn患者提供更好的治疗选择，而且可以改善预后，降低死亡率。
2、pla2r是一种由足细胞表达的大分子跨膜糖蛋白，是imn的主要靶抗原。pla2r诱导以igg为主的体液免疫反应产生循环自身抗体，通过检测特异性pla2r-igg抗体可实现对imn的诊断和监测。2021年kdigo指南指出，当患者的spla2r-ab>50ru/ml时，则属于高危分层。但如果仅以pla2r-ab作为评估对象，检测的实际结果与kidigo指南给出的标准存在不一致的情况，影响imn风险分层判断的准确性。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测pla2r-igg抗体和tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，采用高灵敏的时间分辨荧光免疫分析方法，检测样本中pla2r-igg抗体和tim-3抗原的浓度，以更准确
2、本专利技术提供了一种检测pla2r-igg抗体和tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括以下组成：
3、包被有pla2r抗原和tim-3捕获抗体的检测板、镧系元素1标记的抗人igg抗体、镧系元素2标记的tim-3检测抗体。
4、优选的，所述检测板中pla2r抗原的包被浓度为1.8～2.2μg/ml；tim-3捕获抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/ml。
5、优选的，所述检测板包被pla2r抗原和tim-3捕获抗体时，包被条件为3～5℃静置11～13h。
6、优选的，在所述镧系元素1标记的抗人igg抗体的制备时，镧系元素1螯合物和抗人igg抗体的质量比为1:5；
7、在所述镧系元素2标记的tim-3检测抗体的制备时，镧系元素2螯合物和tim-3检测抗体的质量比为1:5。
8、优选的，所述镧系元素1和镧系元素2为镧系金属中的任意两种；
9、所述镧系金属包括钐、铕。
10、优选的，还包括反应缓冲液、样本稀释液、洗涤液、增强液、pla2r-igg抗体标准品和tim-3抗原标准品。
11、优选的，所述镧系元素1标记的抗人igg抗体或镧系元素2标记的tim-3检测抗体利用反应缓冲液稀释成工作溶液；
12、镧系元素1标记的抗人igg抗体溶液的稀释度为1：(90～110)；
13、镧系元素2标记的tim-3检测抗体溶液的稀释度为1：(180～220)。
14、优选的，所述样本稀释液用于稀释待测样本血清进行检测；
15、血清的稀释度为1:(90～110)。
16、优选的，所述反应缓冲液为50mmol/l tris-hcl、0.9％nacl、0.5％bsa、0.0008％二乙基三胺五乙酸(dtpa)、体积浓度0.01％tween-40和体积浓度0.05％proclin300，ph值为7.8；
17、所述样本稀释液为50mmol/l tris-hcl、0.9％nacl、0.5％bsa、体积浓度0.01％tween-40和体积浓度0.05％proclin300，ph值为7.8；
18、优选的，所述洗涤液为50mmol/l tris-hcl、0.9％nacl、体积浓度0.02％tween-20和体积浓度0.01％proclin300，ph7.8；
19、所述增强液为15μmol/l n-取代β-氨基酸n-硫代羧环内酸酐(β-nta)、50μmol/l正三辛基氧膦(topo)和体积浓度0.1％triton x-100，ph值3.2。
20、本专利技术提供了一种检测pla2r-igg抗体和tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括以下组成：包被有pla2r抗原和tim-3捕获抗体的检测板、镧系元素1标记的抗人igg抗体、镧系元素2标记的tim-3检测抗体。本专利技术针对现有技术中存在的以pla2r-igg作为评估对象判断患者危险分层结果与实际结果仍然有不一致的问题，tim-3作为自身免疫的重要组成部分，可以反映机体对自身抗原的免疫情况，将最重要的pla2r-igg作为主要评价因素，tim-3作为辅助评价因素，可以更准确地判断imn的风险分层。实验结果表明，在特发性膜性肾病患者的未缓解组和缓解组的对病人危险分层判断中，pla2r-igg组中，曲线下面积auc＝0.849，tim-3组中，曲线下面积auc＝0.815，而pla2r-igg+tim-3组中，曲线下面积auc＝0.866。可见，同时检测pla2r-igg+tim-3有利于更准确的进行特发性膜性肾病的危险分层。同时鉴于镧系金属的特点和抗原抗体高特异性的特点，本专利技术提供的试剂盒可以检测待测样品中pla2r-igg和tim-3含量，效率高、特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于特发性膜性肾病的危险分层和预后检测，具有较好的应用前景。
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1.一种检测PLA2R-IgG抗体和Tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括以下组成：
2.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述检测板中PLA2R抗原的包被浓度为1.8～2.2μg/mL；Tim-3捕获抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/mL。
3.根据权利要求2所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述检测板包被PLA2R抗原和Tim-3捕获抗体时，包被条件为3～5℃静置11～13h。
4.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，在所述镧系元素1标记的抗人IgG抗体的制备时，镧系元素1螯合物和抗人IgG抗体的质量比为1:5；
5.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述镧系元素1和镧系元素2为镧系金属中的任意两种；
6.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，还包括反应缓冲液、样本稀释液、洗涤液、增强液、PLA2R-IgG抗体标准品和Tim-3抗原标准品。
7.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析
8.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液用于稀释待测样本血清进行检测；
9.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液为50mmol/L Tris-HCl、0.9％NaCl、0.5％BSA、0.0008％二乙基三胺五乙酸、体积浓度0.01％Tween-40和体积浓度0.05％Proclin300，pH值为7.8；
...【技术特征摘要】
1.一种检测pla2r-igg抗体和tim-3抗原的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括以下组成：
2.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述检测板中pla2r抗原的包被浓度为1.8～2.2μg/ml；tim-3捕获抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/ml。
3.根据权利要求2所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述检测板包被pla2r抗原和tim-3捕获抗体时，包被条件为3～5℃静置11～13h。
4.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，在所述镧系元素1标记的抗人igg抗体的制备时，镧系元素1螯合物和抗人igg抗体的质量比为1:5；
5.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述镧系元素1和镧系元素2为镧系金属中的任意两...
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