一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，将10日龄鸡胚处理成鸡胚消化液，再将鸡胚消化液脱酶并添加5％胎牛血清的培养基置于培养瓶中，鸡胚消化液和培养基体积少于培养瓶体积的4/5，培养瓶置于磁力搅拌器搅拌后，静置沉淀，去上清液，再对培养瓶中的沉淀加入胰蛋白酶消化多次，然后对细胞进行计数，2‑8℃保存，转入生物反应器前将细胞稀释至细胞密度为1.0‑2.0×106cells/ml；在生物反应器进行悬浮培养。本发明专利技术悬浮培养方法能使单位体积内有效细胞数量明显增加，降低了生产成本，终端产品均一性、稳定性高，产品产量提高，易于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗制备，具体涉及一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法。

技术介绍

1、在原代细胞培养中,鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,cef)得到普遍应用，与其他细胞相比,cef来源于spf鸡胚，相对容易获得,体外培养呈贴壁生长，增殖能力强，适应性强，具有良好的耐受性，性状比较稳定，不易发生转化。由于spf鸡胚纯净，无母源抗体，无家禽主要的传染病和人畜共患病、无对实验研究可能产生干扰的病原微生物，在病毒学和生物制品等方面意义巨大。目前鸡胚成纤维细胞根据其培养条件分为附着于容器表面上生长型(贴壁依赖型)或自由悬浮生长型。

2、转瓶贴壁培养具有结构简单，投资少，技术成熟，重复性好，放大只需简单的增加转瓶数量等优点，但其缺点同样突出：工艺复杂，占地面积大。

3、细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养基内生长增殖的一种培养方法，细胞能达到较高密度，可用于多种产品生产。该方法是当前国际上生物制品生产的主流模式，最大优势是通过精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量。随着我国本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，所述预处理具体步骤是：将10日龄鸡胚有空气部分朝上放置，用75％酒精棉球消毒鸡胚气室，静置待气室表面酒精干燥后，用剪刀剪去气室部位的蛋壳，撕开胚胎胎膜；用镊子夹住鸡胚头部或双腿将鸡胚挑出，移入平皿中，去除鸡胚眼睛和大脑部分，将鸡胚转移到烧杯中；用镊子搅拌以清洗鸡胚上附着的蛋黄、血水等，缓慢倒出洗液后再加入缓冲生理盐水连续清洗鸡胚2次后，用组织剪将鸡胚剪碎；再用缓冲生理盐水清洗至少2次。

3.根据权利要求1所述一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方...

【技术特征摘要】

1.一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，所述预处理具体步骤是：将10日龄鸡胚有空气部分朝上放置，用75％酒精棉球消毒鸡胚气室，静置待气室表面酒精干燥后，用剪刀剪去气室部位的蛋壳，撕开胚胎胎膜；用镊子夹住鸡胚头部或双腿将鸡胚挑出，移入平皿中，去除鸡胚眼睛和大脑部分，将鸡胚转移到烧杯中；用镊子搅拌以清洗鸡胚上附着的蛋黄、血水等，缓慢倒出洗液后再加入缓冲生理盐水连续清洗鸡胚2次后，用组织剪将鸡胚剪碎；再用缓冲生理盐水清洗至少2次。

3.根据权利要求1所述一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，所述胰蛋白酶是温度为36-40℃、浓度为0.25％的胰蛋白酶，每枚鸡胚使用6-8ml，消化时间为12-15min，并且每隔4-5min轻柔转动1次。

4.根据权利要求1所述一种鸡胚成纤维细胞悬浮培养方法，其特征在于，所述缓冲生理盐水的ph为7.0-7.3，脱酶至少3次。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王伟峰，肖华春，覃依依，戴金凤，何丽红，黄庆南，杨妮，韦杰康，蒋斌，何东贤，陆晶莹，雷谨畅，王成业，
申请(专利权)人：广西丽诚东生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：