【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药。具体涉及到一种鸭坦布苏病毒核酸疫苗的抗原设计及应用，属于动物免疫药物。本案是申请号为202311177182.5，专利技术名称为“一种鸭坦布苏病毒核酸疫苗及应用”的分案申请。
技术介绍
1、鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus, dtmuv）感染引起的一种病毒性传染病，临床症状主要表现为产蛋鸭产蛋量急剧下降，雏鸭高热、生长迟缓并伴有神经症状。
2、目前，接种疫苗是生产上防控鸭坦布苏病毒病的主要手段。现有的dtmuv商品化疫苗主要为灭活疫苗和弱毒活疫苗两类，已在全国各地主要养鸭地区种鸭场大范围推广使用。灭活疫苗和弱毒活疫苗作为传统疫苗，在工业生产和免疫效力方面具有一定的优势，但在实际应用中仍存在一些问题：灭活疫苗只能引起体液免疫，因此使用的免疫剂量大、需多次免疫，且免疫效果维持时间短；弱毒活疫苗具有免疫剂量小、免疫反应产生迅速、免疫维持期长等优点，但其安全性较低，存在遗传突变和毒力返强风险。此外，灭活疫苗和弱毒活疫苗都容易诱导产生抗体依赖增强作用（antibody-dependent enhancement，ade），不利于为接种个体提供长期且有效的免疫保护。
3、因此，开发一种安全、高效的新型鸭坦布苏病毒病疫苗势在必行。在疫苗设计过程中，抗原是激发动物产生特异性抗体的关键因素，其架构设计尤为重要。dtmuv为黄病毒属成员，其e蛋白（envelope protein）作为病毒的囊膜蛋白，富含中和抗体靶向表位，是主要的保护性抗原。已有多项黄病毒相关研究表
4、当前已有专利构建了表达prm-e蛋白的重组新城疫活病毒疫苗，用来解决灭活疫苗或者弱毒活疫苗存在的问题。如公开号为cn106520710a的中国专利，公开了表达鸭坦布苏病毒prm和e蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的制备及应用，通过将prm蛋白和e蛋白插入新城疫病毒的表达框架中，构建了重组新城疫活病毒疫苗。该方法能够利用prm和e蛋白成功诱导蛋鸭产生dtmuv特异性中和抗体，改善灭活疫苗和弱毒疫苗效价不高的情况。但新城疫病毒能够自然感染鸭等禽类，用其作为活病毒载体疫苗存在母源抗体干扰的潜在风险，在连续使用过程中会降低疫苗的保护作用。此外，该疫苗免疫后的鸭虽然自体不再产生临床症状，但存在持续带毒的问题，免疫成功的个体能够继续感染其他健康个体。
5、核酸疫苗（nucleic acid vaccine），也称基因疫苗（genetic vaccine），是指将含有编码抗原蛋白核酸序列的载体，经肌肉注射等方法导入宿主体内，通过宿主细胞表达抗原蛋白，诱导宿主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。
6、核酸疫苗是利用现代生物技术免疫学、生物化学、分子生物学等研制成的，分为dna疫苗和rna疫苗两种。与传统的灭活疫苗、亚单位疫苗和基因工程疫苗相比，核酸疫苗具有多项优势：（1）核酸疫苗不携带毒力病毒颗粒，也不存在毒力返祖现象，安全性更高；（2）核酸疫苗可以在细胞内完成抗原蛋白表达，从而诱发机体对该蛋白的体液免疫和细胞免疫，能够增强免疫效果，延长有效保护的持续时间，无需多次重复加强免疫；（3）核酸疫苗接种后，抗原蛋白在细胞内表达，能够直接与组织相容性复合物mhci或ii类分子结合，不受母源抗原干扰。
7、综上所述，选择足够有效的抗原架构，结合更为安全高效的疫苗体系，将成为解决当前鸭坦布苏病毒病疫苗各项问题的关键，并且为预防包含鸭坦布苏病毒在内的多种黄病毒提供通用的疫苗设计思路。
技术实现思路
1、本专利技术为了克服现有dtmuv灭活疫苗、弱活病毒疫苗、重组病毒载体疫苗等技术或效果的缺陷，本专利技术提供一种同时表达dtmuv的prm和e蛋白的串联抗原融合蛋白、编码其的核酸、包含所述核酸的疫苗，以及相关制备方法和应用等。相对于基于病毒载体的疫苗架构，本专利技术提供更安全、更有效的针对dtmuv毒株的核酸疫苗架构更有利于产业生产及应用。此外，本专利技术的抗原融合蛋白融合了协助vlp形成的信号肽，因此显著地增加了prm和e蛋白的联合表达的免疫原性，提高了适用对象体内产生的针对dtmuv的中和抗体水平。同时，由本专利技术描述的核酸疫苗抗原架构所生产的疫苗，能有效抑制感染后细胞持续排毒现象，达到预防和治疗的双重效果。
2、本专利技术公开了一种鸭坦布苏病毒的mrna疫苗，所述mrna的编码序列如seq id no:7所示。
3、优选的。所述mrna经过加帽处理。
4、本专利技术公开了所述表达载体表达所述的mrna分子。
5、优选的，所述表达载体为puc57载体。
6、本专利技术公开了一种细胞，其特征在于，所述细胞包含所述的表达载体。
7、本专利技术公开了一种鸭坦布苏病毒的mrna疫苗，所述mrna采用所述的表达载体和/或所述的细胞制备。
8、本专利技术公开了所述的mrna在制备抗鸭坦布苏病毒的疫苗组合物中的应用。
9、本专利技术公开了所述的表达载体在制备抗鸭坦布苏病毒的疫苗组合物中的应用。
10、本专利技术公开了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括所述的mrna和/或所述的表达载体。
11、本专利技术公开了所述的mrna疫苗和/或所述的表达载体在以下任一项中的用途：（1）制备治疗或预防dtmuv感染引起的疾病的药物；或者，（2）制备治疗或预防鸭坦布苏病毒病的药物；或者，（3）制备在施用对象体内诱导产生针对dtmuv的特异性免疫反应的药物。
12、优选的，所述施用对象为鸭、鹅、鸡或麻雀。
13、本专利技术公开了一种分离的mrna，所述mrna的编码序列如seq id no:7所示，所述mrna用于针对鸭坦布苏病毒的核酸疫苗。
14、本专利技术的一个方面提供了一种dtmuv抗原片段，其特征在于，包含信号肽（sp）、鸭坦布苏病毒prm蛋白和鸭坦布苏病毒e蛋白；位于sp下游的prm和e蛋白可以在表达后形成vlp。
15、进一步地，包含的信号肽序列位于鸭坦布苏病毒prm蛋白和鸭坦布苏病毒e蛋白序列的上游，可以来源于多种真核生物；优选地，所述信号肽序列可以来源于鸭；更优地，所述信号肽的核酸序列如seqid no.5所示，其编码的氨基酸序列如seq id no.6所示。
16、本专利技术的一个方面提供了一种dtmuv抗原融合片段，其特征在于，包含信号肽（sp）与鸭坦布苏病毒prm蛋白和/或鸭坦布苏病毒e蛋白中的一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种DTMUV抗原融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端，依次包含信号肽（SP）片段、鸭坦布苏病毒prM蛋白片段和鸭坦布苏病毒E蛋白片段。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:8所示。
3.一种重组核酸，其特征在于，所述重组核酸编码权利要求1或2任一所述的融合蛋白。
4.重组mRNA，其特征在于，所述mRNA编码权利要求1或2任一所述的融合蛋白。
5.鸭坦布苏病毒的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA的编码序列如SEQ ID NO:7所示。
6.表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求3所述的重组核酸。
7.表达载体，其特征在于，所述表达载体表达权利要求4所述的mRNA。
8.细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求6-7任一所述的表达载体。
9.一种鸭坦布苏病毒的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA采用权利要求6-7任一所述的表达载体和/或权利要求8所述的细胞制备。
10.权利要求1-2任一所述的融
11.疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括权利要求1-2任一所述的融合蛋白和/或权利要求3所述的重组核酸和/或权利要求4所述的重组mRNA和/或权利要求6-7任一所述的表达载体和/或权利要求8所述的细胞。
12.权利要求1-2任一所述的融合蛋白和/或权利要求3所述的重组核酸和/或权利要求4所述的重组mRNA和/或权利要求6-7任一所述的表达载体和/或权利要求8所述的细胞在以下任一项中的用途：（1）制备治疗或预防鸭坦布苏病毒感染引起的疾病的药物；或者，（2）制备治疗或预防鸭坦布苏病毒病的药物；或者，（3）制备在施用对象体内诱导产生针对鸭坦布苏病毒的特异性免疫反应的药物。
...【技术特征摘要】
1.一种dtmuv抗原融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从n端到c端，依次包含信号肽（sp）片段、鸭坦布苏病毒prm蛋白片段和鸭坦布苏病毒e蛋白片段。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq idno:8所示。
3.一种重组核酸，其特征在于，所述重组核酸编码权利要求1或2任一所述的融合蛋白。
4.重组mrna，其特征在于，所述mrna编码权利要求1或2任一所述的融合蛋白。
5.鸭坦布苏病毒的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna的编码序列如seq id no:7所示。
6.表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求3所述的重组核酸。
7.表达载体，其特征在于，所述表达载体表达权利要求4所述的mrna。
8.细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求6-7任一所述的表达载体。
9.一种鸭坦布苏病毒的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna采用权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩悌云，徐实，李静，费才溢，
申请(专利权)人：南京澄实生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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