本发明专利技术涉及一种人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ｌ１（ＨＰＶＬ１）多肽及其制备与应用。该人类乳头瘤病毒衣壳蛋白Ｌ１多肽，氨基酸序列为Ｎ端－－－Ｃｙｓ?Ｔｈｒ?Ｌｅｕ?Ｔｈｒ?Ａｌａ?Ａｓｐ?Ｖａｌ?Ｍｅｔ?Ｔｈｒ?Ｔｙｒ?Ｉｌｅ?Ｈｉｓ－－－Ｃ端的肽段，或者是包含这一氨基酸序列且长度小于５０个氨基酸的肽段。本发明专利技术是通过对１８种低危型和高危型ＨＰＶ亚型（６，１１，１６，１８，５２，５８等）的Ｌ１蛋白表位预测和多序列比对，筛选出的一条非常保守且位于蛋白质表面的肽段，诱导产生的抗体可以与多型别ＨＰＶＬ１反应，可用于多种型别ＨＰＶＬ１的检测，尤其是在人类宫颈癌癌前病变检测中的应用，针对这一肽段的抗体还可用于多型别ＨＰＶＬ１的纯化、制备。另外，本发明专利技术还提供这一肽段作为多种型别ＨＰＶ抗血清和单克隆抗体被检测物的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种多肽，具体地说是一种人类乳头瘤病毒(HPV)衣壳蛋白Ll多肽及 其制备与应用。
技术介绍
宫颈癌是一种严重影响妇女健康的疾病。全球范围内，宫颈癌是第二大妇女 常见肿瘤，在一些发展中国家甚至居于首位，每年新发病例接近50万(Valdespino VM, Valdespino VE. . Curr Op in Obstet Gynecol，2006，18 :35_40·)。近年来，人类乳头瘤病 毒(HPV)感染被认为是宫颈癌发生的主要病因。Warlboomers等在1999年对22个国家的 1035例宫颈癌标本的研究发现，人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)的检出率为 99.7%。从1933年第一例人乳头瘤病毒(HPV)被发现，到目前已确定的人类乳头瘤病毒亚 型已有200余种。按致病力的高低分为高危型和低位型，高危型包括HPV16，18，31，33，35， 39，45，51，52，56，58，59，63，78，82等，主要与宫颈鳞状上皮内不典型增生以及宫颈癌的发 生有关；低危型包括朋￥6，11，40，42，44，54，61，70，72，81等，主要与生殖道疣状物的发生 有关。有研究表明，感染了高危型HPV的女性发展为宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌的风 险高出了 HPV 阴性的女性 100 倍(von Knebel DM. Eur J Cancer 2002 ；38 2229~42)。HPV 感染是宫颈上皮内瘤变(CIN)发生发展的必要因素，但流行病学的调查表明，CINI和CINII 进展为CINIII或宫颈癌的几率是9%和22%。大部分的CINI和CINII的病人会自动恢复， 而机体对HPV病毒的清除是病变消退的主要原因。随着巴氏涂片、液基细胞学等检查的普 及，大大提高了宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的检出率。但也常导致过度治疗和相关并 发症，加重病人心理和经济负担，临床亟需新的检测手段分流低危和高危病人。近年来人们 发现了一些与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌发生发展有关的标志物，如P16、Ki67、HPVLl 等。其中HPVLl蛋白占HPV表面蛋白的90%以上，被认为是机体识别并清除病毒的主要靶 点。大量研究表明，随着宫颈鳞状上皮内病变(SIL)的进展，病变组织HPV-Ll衣壳蛋白表 达呈现下降的趋势。人类乳头瘤病毒(HPV)为不全封闭式病毒，成熟HPV病毒由环状双链DNA核心及 蛋白衣壳组成，无包膜结构。HPV病毒基因组主要分为3个区①早期基因区(Early，E区)， 编码与病毒转录、翻译和与细胞转化有关的蛋白。②晚期基因区(Late，L区)，包括L1、L2 基因，分别编码病毒的衣壳蛋白Li、L2。③非编码的上游调节区(URR)，含有调节病毒DNA 复制及转录的增强子、沉默子等。HPV病毒衣壳呈对称的二十面体，直径50-55nm。Ll蛋白 为HPV病毒的主要结构蛋白，L2蛋白为次要结构蛋白。每个病毒含72个由Li、L2组成的 壳蛋白单位，而每个壳蛋白单位由5个位于外围的Ll蛋白和一个位于中心的L2蛋白构成。 Ll蛋白分子量约55KDa，在不同HPV型别中高度保守，是主要的属特异性抗原。HPV病毒感染宿主以后，常经过一个无症状的潜伏期。此后，因病毒自身致病性的 高低和宿主免疫状态的不同，病毒或者继续潜伏，或者开始复制。HPV病毒在感染人体细胞 后有两种复制方式一种为将HPV病毒DNA整合到宿主细胞DNA的固定复制方式，另一种则以病毒DNA宿主细胞核内的寄生性的流动式的复制方式。一般而言，HPV引起良性或癌前 病变早期病毒基因组DNA是以游离的形式存在，而HPV基因组整合入宿主染色体是其致癌 的重要标志。近年来大量研究表明，HPV病毒蛋白Ll的表达能反映宫颈鳞状上皮内病变 (SIL)的预后及进展，Ll蛋白的表达与宫颈鳞状上皮内病变的程度以及预后呈负相关。 Heejeong Lee ^RM, ^^M^MX^&^M7^. (low squamous intraepithelial lesion, LSIL)患者HPV Ll蛋白的表达的几率，明显高于宫颈高鳞状上皮内病变(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)和宫颈癌(分别为 75. 8%，40%，40% )，且感染了低危型 HPV患者的细胞涂片Ll蛋白的阳性率高于感染了高危型患者的细胞涂片(分别为88. 9%， 70. 8 % ) (Heejeong Lee, M. D. , Kyung-Ji Lee, M. D. , Chan-Kwon Jung, Μ. D. Diagnostic Cytopathology, 2008, 36 (12) :864_867)。Melsheimer 等的研究也发现，HSIL 患者 HPV Ll 蛋白的表达水平与LSI患者比较显著下降(Melsheimer P, Kaul S, Dobeck S, et al. Acta Cytologica，2003，47 124-128.)。Griesser在一项前瞻性研究中发现(平均随访时间22. 8 个月，随访其细胞学涂片或锥切组织病理结果)，84例伴hrHPV感染的轻到中度宫颈上皮不 典型增生病例中，HPV Ll蛋白阳性者只有31%进展为CIN II (cervical intraepithelial neoplasia II，II度宫颈上皮内瘤变)或CIN III ；而HPV Ll蛋白表达阴性者中，76. 4%进 展为CIN II，CIN III，或微侵癌，提示在低到中度不典型鳞状上皮病变中，HPVLl蛋白阴性 病例比阳性病例更倾向于进展(Griesser H, Sander H, Hilfrich R, et al. Anal Quant Cytol Histol，2004，26 (5) :241_245.)。D. Rauber 等在对 279 例感染了 hrHPV 且经细胞 学和组织学证实为CINI和CINII的病人随访了 25个月后发现HPVL1阳性的病人49. % 恢复，41. 5%的病人病情呈保持状态，只有9. 4%的病人进展；而在HPVLl阴性的病例中 恢复、保持现状和进展的比例分别是33. 3 %、40. 7 %、25. 9 % (D. Rauber，G. Mehlhorn, P. A.Fasching, M. W. Beckmann, S. Ackermann.European Journal of Obstetrics & Gynecology andReproductive Biology 140(2008)258—262)。 Tomomi Yoshida ^RMM HPV Ll衣壳蛋白与P16联合应用，可使CIN患者预后的预测更为准确，他将Ll (_)/pl6(+) 定义为高危型，Ll(+)/pl6(+)定义为中间型，Ll(+)/pl6(-)定义为低危型，Ll(-)/pl6(_) 定义为低危型或无CIN证据型。以上研究强烈提示，HPVLl蛋白可作为判断CINI或CINII病 人予页后的标志物(Yoshida T, Sano T, 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）衣壳蛋白Ｌ１多肽，其特征是：由含Ｎ端－－－Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ－－－Ｃ端所示的氨基酸序列组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡丽娜，王霞，刘宝，林勇，陈恒禧，张林，甘晓玲，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]
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