【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物，尤其涉及一种nrps基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用。
技术介绍
1、水杨酸及其衍生物是重要的医药和化工中间体或产品，年产量巨大，例如阿司匹林(aspirin)，又名乙酰水杨酸，是世界上应用最广泛的解热、镇痛的抗炎药，全球年需求量达到4万吨。每年，大量水杨酸及其衍生物输入各类水体并最终进入海洋，由于降解速度缓慢，造成严重的水体污染问题，破坏了水生生态系统，进而危害水生生物安全。
2、目前，去除水体中水杨酸及其衍生物等污染物的技术很多，例如吸附、光催化、膜过滤、絮凝、氧化等，但通常这些方法要求的作用条件苛刻、容易导致二次污染、操作和维护成果过高，导致它们在实际应用中面临很多困难。
3、海洋硅藻是重要的海洋动物饵料，大规模的硅藻养殖需要耗费大量天然海水，而海水中不断积累的水杨酸及其衍生物等污染物严重影响硅藻的生长，亟待解决。
技术实现思路
1、有鉴于此，本公开的目的在于提出一种nrps基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，以解决
技术介绍
中提及的问题。
2、基于上述目的，本公开提供了一种nrps基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，所述nrps基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述nrps基因在硅藻中呈现过表达状态。
3、进一步，所述的应用，包括以下步骤：
4、(1)构建nrps基因过表达载体：根据nrps基因的cds序列设计引物后，进行pcr扩增；扩增产物纯化后，回
5、(2)构建nrps基因过表达藻株：将nrps基因过表达载体pyt28nrps转入含有pta-mob质粒的大肠杆菌中，通过大肠杆菌将pyt28nrps接合转移到硅藻细胞内，获得nrps基因过表达藻株。
6、进一步，所述的应用中，所述步骤(1)中引物的序列为：
7、nrps-f1：
8、gcatcaccatcaccatcacggatccatgactcaggacgagccgaagt g；
9、nrps-r1：
10、ggagtccaagctcagctaattaagcttttaggcgggctcgtctcgag g。
11、进一步，所述的应用中，所述pyt28质粒由pptpuc3质粒转化得到。
12、进一步，所述的应用中，所述pyt28质粒由pptpuc3质粒转化得到，包括：
13、(1)合成包含ap1启动子、t2a、增强型gfp和fcpa终止子的合成序列，并在该合成序列两侧添加xbai和sphi酶切位点序列；
14、(2)用xbai和sphi这两个限制性内切酶分别酶切所述合成序列和pptpuc3质粒后，利用t4 dna连接酶进行连接，使合成序列插入到pptpuc3质粒中cen6-arsh4-his3下游元件的xbai和sphi酶切位点之间，获得pyt28质粒。
15、进一步，所述的应用，所述大肠杆菌为epi300。
16、进一步，所述的应用，所述硅藻为三角褐指藻。
17、从上面所述可以看出，本公开的nrps基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，通过构建的nrps过表达藻株竞争性结合水杨酸及其衍生物等环境污染物，将水杨酸及其衍生物吸附在硅藻细胞中过表达的nrps蛋白上，将有助于减少这些污染物直接参与与硅藻生命活动密切相关的初级或次级代谢通路，减缓其对硅藻的毒害作用，从而提高硅藻对水杨酸及其衍生物等污染的耐受性，提高硅藻产量。更为重要的是，构建的nrps过表达藻株也可用于吸收水杨酸及其衍生物，从而生物修复因这类物质引起的水体污染。
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1.一种NRPS基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，所述NRPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述NRPS基因在硅藻中呈现过表达状态。
2.根据权利要求1所述的应用，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的应用，所述步骤(1)中引物的序列为：
4.根据权利要求2所述的应用，所述pYT28质粒由pPtPuc3质粒转化得到。
5.根据权利要求4所述的应用，所述pYT28质粒由pPtPuc3质粒转化得到，包括：
6.根据权利要求2所述的应用，所述大肠杆菌为EPI300。
7.根据权利要求2所述的应用，所述硅藻为三角褐指藻。
【技术特征摘要】
1.一种nrps基因在提高硅藻对水杨酸及其衍生物耐受性中的应用，所述nrps基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述nrps基因在硅藻中呈现过表达状态。
2.根据权利要求1所述的应用，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的应用，所述步骤(1)中引物的序列为：
4....
【专利技术属性】
技术研发人员：邹慧熙，李楠，阎秀峰，赵东升，陈玉婷，许佳敏，刘肖丽，
申请(专利权)人：温州大学，
类型：发明
国别省市：
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