【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蛋白酶抑制剂领域，具体涉及一种丝氨酸蛋白酶抑制剂及其应用。
技术介绍
1、异常丝氨酸蛋白酶活性或蛋白酶与蛋白酶抑制剂的失衡可导致蛋白酶-介导的炎性反应。因此，对靶向异常丝氨酸蛋白酶活性或蛋白酶与蛋白酶抑制剂的失衡的治疗剂存在需要。本专利技术的serpine3融合蛋白具有抑制炎性细胞因子活性的潜力。
2、丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins)蛋白家族是一个成员众多、分布广泛的蛋白酶抑制剂家族，能够抑制丝氨酸蛋白酶活性，参与调节生物体内多种生理反应，在生物体内血液凝结、免疫反应、纤溶、炎症和肿瘤抑制等过程中起重要作用。serpins蛋白家族成员功能差异显著。serpin通过与靶蛋白酶形成共价复合物，从而使后者失活。serpin的活性中心环(reactive centre loop，rcl)主要由位于c末端的约20个氨基酸残基组成，暴露在serpin的蛋白主体之外，带有能够被靶酶特异识别的位点。serpin的作用机制不同于常规酶与底物间的相互作用。它通过破坏靶酶的结构而使靶酶完全丧失活性。serpin首先与靶酶形成共价酯键，即形成酰基酶中间体。有解释称：rcl牵引靶酶转向serpin的另一侧从而引起靶酶构象改变，因此serpin型抑制剂也被称为自杀性抑制剂。
3、在人体中，丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin可被分为9个亚家族a-i，serpine家族是其中一员，包括serpine1，serpine2，serpine3三个成员。其中serpine3研究很少。serpine3，有两种编码形式，分别是全长40
技术实现思路
1、解决的技术问题：本专利技术提供一种丝氨酸蛋白酶抑制剂及其应用，所提供的融合蛋白显示抑制活性，具体通过克隆人serpine3的全长404氨基酸的基因和424氨基酸的基因，并通过与fc连接，转化将基因转入酵母内。纯化获得fc-serpine3-404和fc-serpine3-424融合蛋白。其对丝氨酸蛋白酶tmprss11e有强烈的抑制活性。而丝氨酸蛋白酶tmprss11e在肺癌，炎症感染等疾病中升高，而抑制tmprss11e可以减轻炎症，抑制肿瘤的进展。
2、本专利技术提供的fc-serpine3-404和fc-serpine3-424蛋白能够作为负调控因子抑制tmprss11e活性。本文所述的丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白预期可用于减轻包括肺部感染等炎症症状。
3、技术方案：一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，包括fc-serpine3-404和fc-serpine3-424，所述fc-serpine3-404的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述fc-serpine3-424的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、上述fc-serpine3-404的核苷酸序列如seq id no.3所示。
5、上述fc-serpine3-424的核苷酸序列如seq id no.4所示。
6、含有上述核苷酸的质粒。
7、含有上述质粒的载体。
8、上述载体为酵母、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、人胚肾(hek)293细胞或cos细胞。
9、上述丝氨酸蛋白酶抑制剂在制备治疗细菌病毒等感染性炎症疾病中的应用。
10、治疗如急性呼吸窘迫综合征(ards)、病毒感染或脓毒症等炎症时的药物，含有上述丝氨酸蛋白酶抑制剂。
11、有益效果：本专利技术提供的人丝氨酸蛋白酶抑制剂包括fc-serpine3-404和fc-serpine3-424两种形式。tmprss11e能导致炎症增强。本专利技术的丝氨酸蛋白酶抑制剂fc-serpine3-404和fc-serpine3-424能够与tmprss11e结合，有效抑制tmprss11e活性。因此，本专利技术丝氨酸蛋白酶抑制剂能够通过抑制tmprss11e活性而有效抑制炎症反应。获得稳定表达该融合蛋白的酵母菌株，表达量高，成本低。在纯化方面，纯化工艺中的亲和层析步骤具有很高的纯化效率，易于放大生产。
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1.一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，包括Fc-serpinE3-404和Fc-serpinE3-424，所述Fc-serpinE3-404的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Fc-serpinE3-424的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，所述Fc-serpinE3-404的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1所述丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，所述Fc-serpinE3-424的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.含有权利要求2或3所述核苷酸的质粒。
5.含有权利要求4所述质粒的载体。
6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，所述载体为酵母、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾(HEK)293细胞或COS细胞。
7.权利要求1所述丝氨酸蛋白酶抑制剂在制备治疗细菌病毒等感染性炎症疾病中的应用。
8.治疗如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、病毒感染或脓毒症等炎症时的药物，其特征在于，含有权利要
...【技术特征摘要】
1.一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，包括fc-serpine3-404和fc-serpine3-424，所述fc-serpine3-404的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述fc-serpine3-424的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，所述fc-serpine3-404的核苷酸序列如seq id no.3所示。
3.根据权利要求1所述丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，所述fc-serpine3-424的核苷...
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