一种生产重组蛋白Ａ的方法技术

本发明专利技术涉及一种生产重组蛋白Ａ的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术提供了利用一种基因工程菌进行高密度发酵表达重组蛋白Ａ的工艺条件，以及利用以ＩｇＧ的Ｆｃ片段为亲和配基的亲和层析一步法高纯度分离纯化重组蛋白Ａ的方法。应用以上方法生产重组蛋白Ａ，高密度发酵的重组菌体培养密度达到ＯＤ６００ｎｍ＝８０－１００，菌体干重４０－５０ｇ／Ｌ，蛋白Ａ表达量占菌体总蛋白的３０－５０％，每升菌液生产的蛋白Ａ量最高达３ｇ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＨＰＬＣ检测蛋白Ａ纯度达９５％以上。该方法具有生产量大，成本低，产品质量高等优点，为重组蛋白Ａ的制备提供了一条切实可行的途径。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种生产重组蛋白Ａ的方法，包括表达蛋白Ａ基因工程菌的高密度发酵及重组蛋白Ａ的分离纯化方法；其特征在于如下步骤：　　第一步，基因工程菌的高密度发酵；　　本专利技术中所使用的基因工程菌，是将蛋白Ａ完整的ＩｇＧ结合功能区基因连接入ｐＥＴ表达载体中，再将上述重组质粒转入感受态Ｅ．ｃｏｌｉ　ＢＬ２１（ＤＥ３）中；　　采用补料分批发酵的培养方式，利用指数流加的补料方法实现表达重组蛋白Ａ基因工程菌株的高密度发酵；发酵培养基中的碳源选用葡萄糖或甘油，诱导重组蛋白Ａ表达的诱导剂选用ＩＰＴＧ或乳糖；第二步，重组蛋白Ａ的分离纯化；　　利用以ＩｇＧ的Ｆｃ片段为配基的亲和层析填料分离纯化重组蛋白Ａ；　　（１）ＩｇＧ的Ｆｃ片段的获取：采用木瓜蛋白酶酶解ＩｇＧ，使其分解为Ｆｃ片段和Ｆａｂ片段，通过以重组蛋白Ａ为配基的亲和层析柱分离纯化Ｆｃ片段；　　（２）以ＩｇＧ的Ｆｃ片段为配基的亲和层析填料的合成：采用高碘酸钠氧化Ｆｃ片段糖侧链，利用反应后得到的醛基实现Ｆｃ片段的定向固定化；采用琼脂糖凝胶为基质，以羰基二咪唑活化，通过双功能团间隔臂分子将氧化后的Ｆｃ片段固定，合成了特异性结合重组蛋白Ａ的亲和层析填料；　　（３）利用以上合成的亲和层析填料分离纯化重组蛋白Ａ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：贾凌云，林雪，侯率，张嘉玉，任军，谢键，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]