一种用于检测精神活性药物的重组质粒、基因工程菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测精神活性药物的重组质粒，并基于其构建了用于检测精神活性药物的基因工程菌。本发明专利技术通过将绿色荧光蛋白cpGFP插入人类5‑HT受体HTR2A的第三个环中（GenBank:MW285156.1）构建融合蛋白，利用受体与精神活性药物结合后的构象变化诱导荧光强度变化，从而实现快速定量检测精神活性药物的目的。本发明专利技术针对精神活性药物建立了快速定量检测方法，可实现原位实时监测，且操作简便，成本低廉，灵敏度高，结果可靠，是具有竞争力的精神活性药物快速检测方法，对精神活性类药物监管以及污水流行病学研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境生物学和环境监测，尤其涉及一种用于检测精神活性药物的重组质粒、基因工程菌及应用。

技术介绍

1、精神活性药物被定义为可以影响人心理功能和情绪状态的一类药物，其被广泛用于治疗心理疾病、镇静或是非法娱乐。根据联合国毒品和犯罪问题办公室2018年的报告，2016年全球约有2.75亿人至少使用过一次精神活性药物，2015年约有167750人直接死于使用精神活性药物。精神活性药物被人们使用后会随排泄物进入污水处理厂，之后随污水厂尾水排放进入环境。通过检测污水中精神活性类药物的赋存倒推精神活性类药物的使用，可以协助精神活性类药物的监管。随着精神活性类药物的生产和使用，其在污水中已被频繁检出，存在浓度波动。因此，对污水中的精神活性药物进行检测，对精神活性类药物监管以及污水流行病学研究具有重要意义。

2、精神活性药物的常规检测手段主要是液相色谱-质谱联用(lc-ms)和高效液相色谱(hplc)技术，虽然这些技术使精神活性药物检测具有高可靠性、高灵敏度和准确性，但它们仍然受到一些限制，例如其要求先进昂贵的设备、专业的技术人员和长时间的分析成本，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测精神活性药物的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒通过将目标蛋白基因与载体结合后得到，所述目标蛋白基因如SEQ ID No:1所示；所述载体为pET系列表达载体。

2.根据根据权利要求1所述的用于检测精神活性药物的重组质粒，其特征在于，所述载体为pET28b(+)载体，所述pET28b(+)载体去掉His标签，信号肽为pelB，所述信号肽的基因序列如SEQ ID No:2所示，信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示。

3.一种用于检测精神活性药物的基因工程菌，其特征在于，通过将权利要求1或2所述的重组质粒转化大肠杆菌后得到。

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【技术特征摘要】

1.一种用于检测精神活性药物的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒通过将目标蛋白基因与载体结合后得到，所述目标蛋白基因如seq id no:1所示；所述载体为pet系列表达载体。

2.根据根据权利要求1所述的用于检测精神活性药物的重组质粒，其特征在于，所述载体为pet28b(+)载体，所述pet28b(+)载体去掉his标签，信号肽为pelb，所述信号肽的基因序列如seq id no:2所示，信号肽的氨基酸序列如seq id no:3所示。

3.一种用于检测精神活性药物的基因工程菌，其特征在于，通过将权利要求1或2所述的重组质粒转化大肠杆菌后得到。

4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为bl21类型的大肠杆菌，优选地，所述大肠杆菌为bl21(de3)大肠杆菌。

5.权利要求1所述的重组质粒或权利要求3所述的基因工程菌在检测精神活性药物，其中，所述精神活性药物为能与htr2a受体作用的药物；所述精神活性药物包括氟西汀、酮色林、氟利色林，激动剂有doi、5-ht、lsd、美斯卡林和赛洛西宾。

6.一种基于受体构象诱导荧光变化的定量快速检测精神活性药物方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（1）中活化的方法为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴兵，何若男，任洪强，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：