可视化快速检测假禾谷镰孢菌RAA-LFD试剂盒、引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术申请涉及一种可视化快速检测假禾谷镰孢RAA‑LFD试剂盒、引物组合物及其应用，旨在解决现有检测方法难以从种类繁多且高度相似的镰孢中快速有效的区别鉴定出强致病力的假禾谷镰孢的技术问题。结合长期实践研究及大量的筛选试验，发现1对基于假禾谷镰孢EF‑1a基因序列而设计的RAA引物具有非常好的特异性和稳定性，能够从众多具有相似特性的镰孢中有效地区别鉴定出假禾谷镰孢；进一步综合考量RAA‑LFD引物和探针的设计原则，将所筛选得到的RAA引物进一步设计成适用于RAA‑LFD试剂盒的引物，并在其适合的位置设计探针，再通过侧流纸层析试纸条检测特异性扩增结果，建立了灵敏性、特异性好且操作简便的假禾谷镰孢RAA‑LFD快速检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术申请涉及分子生物学检测，具体涉及一种可视化快速检测假禾谷镰孢raa-lfd试剂盒、引物组合物及其应用。

技术介绍

1、小麦田土壤中存在有多种镰孢菌，包括植物致病和非致病镰孢菌，主要有假禾谷镰孢（ f. pseudograminearum）、禾谷镰孢（ f. graminearum）、木贼镰孢（ f. equiseti）、亚洲镰孢( f. asiaticum)、尖镰孢（ f. oxysporum）、层出镰孢( f. proliferatum)、藤仓镰孢( f. fujikuroi)，黄色镰孢（ f. culmorum）。除此以外还有一些常见土壤真菌，如麦根腐平脐蠕孢（ bipolaris sorokiniana）、嘴突蠕孢 (exserohilum rostratum)、玉本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于假禾谷镰孢检测的引物，其核苷酸序列如下：

2.一种RAA-LFD试剂盒，含有权利要求1所述的引物及核苷酸序列如下所示的探针：

3.根据权利要求2所述的RAA-LFD试剂盒，其特征在于，所探针5'端以抗原标记物标记，3'端以阻断基因修饰，且在探针第32～33碱基之间设碱基替代物dSpcacer。

4.根据权利要求3所述的RAA-LFD试剂盒，其特征在于，所述抗原标记物为6-FAM，所述阻断基因为C3-spacer，所述碱基替代物dSpcacer为四氢呋喃。

5.根据权利要求2所述的RAA-LFD试剂盒，其特征在于，所述RAA试剂盒...

【技术特征摘要】

1.一种用于假禾谷镰孢检测的引物，其核苷酸序列如下：

2.一种raa-lfd试剂盒，含有权利要求1所述的引物及核苷酸序列如下所示的探针：

3.根据权利要求2所述的raa-lfd试剂盒，其特征在于，所探针5'端以抗原标记物标记，3'端以阻断基因修饰，且在探针第32～33碱基之间设碱基替代物dspcacer。

4.根据权利要求3所述的raa-lfd试剂盒，其特征在于，所述抗原标记物为6-fam，所述阻断基因为c3-spacer，所述碱基替代物dspcacer为四氢呋喃。

5.根据权利要求2所述的raa-lfd试剂盒，其特征在于，所述raa试剂盒为raa-nfo试剂盒。

6.权利要求2所述ra...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙炳剑，吴曼曼，李洪连，郭成瑾，王鹏坤，孙航军，李宇，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：