【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种三金属纳米酶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、本专利技术属于生物检测和纳米材料合成领域，具体涉及一种具有中空结构的三金属有机骨架纳米酶的制备方法及高灵敏度、高特异性比色/荧光双信号传感检测四环素。
2、四环素类抗生素是一类广谱抗生素，广泛用于治疗人类和动物的某些疾病或作为促进生长的饲料添加剂。每年的四环素消耗量高达5000公吨，误用或滥用会导致废水中甚至饮用水和食物(牛奶、蜂蜜、鱼)中的抗生素残留升高，这极大地促进了耐抗生素细菌的进化。此外，抗生素残基还对环境和涉及遗传信息解码和蛋白质合成的重要生物过程造成破坏性影响，增加感染风险，如过敏反应、肝毒性等对人类健康产生不良影响。因此，开发有效检测抗生素的方法是非常必要的。目前，四环素的检测方法主要集中在液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)、电化学、毛细管电泳(ce)和酶联免疫分析法(elisa)等。然而，这些方法大多繁琐，耗时长，需要专业仪器和人员。因此，开发廉价、简单、灵活的通用技术用于特异性检测四环素具有重要的实际意义。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供一种三金属纳米酶及其制备方法和应用，是一种廉价、简单、灵活的通用技术用于特异性检测四环素的方法。
2、本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
3、本申请的第一目的在于提供一种三金属纳米酶的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)：将h4dot、fe(no3)3·9h
5、(2)：在标准液中加入乙酸和ctab，震荡混匀，在120℃下加热24h；
6、(3)：反应结束冷却至室温后，用丙酮洗涤三次，在60℃下真空干燥，得到具有中空结构的三金属纳米酶。
7、优选地，步骤(1)中，h4dot、fe(no3)3·9h2o、co(no3)2·6h2o、ni(no3)2·6h2o的质量比为39:73:55:55，dmf、etoh和h2o的体积比为15:1:1。
8、优选地，步骤(2)中，乙酸和ctab的用量比为100μl：100mg。
9、本申请的第二目的在于提供一种三金属纳米酶材料，所述三金属纳米酶材料是上述的三金属纳米酶的制备方法制备得到的。
10、本申请的第三目的在于提供一种三金属纳米酶在特异性检测tet中的应用。
11、本申请的第四目的在于提供一种对tet具有选择性的三金属中空纳米材料，所述三金属中空纳米材料的制备方法包括以下步骤：
12、(1)：将上述的三金属纳米酶分散在pei水溶液中，混匀；
13、(2)：向混匀的液体中加入tet适配体和pbs，在室温下磁力搅拌4h；
14、(3)：离心，所得产物用pbs洗涤，再次离心进行冷冻干燥，即得到对tet具有选择性的三金属中空纳米材料(apt-nicofe-mof-74)。
15、优选地，步骤(1)中，三金属纳米酶和pei水溶液的质量体积比为2:1，所述pei水溶液为20mg·ml-1,ph＝8.5；步骤(3)中，离心的转速为1×104rpm；步骤(2)和步骤(3)中，pbs为10mm,ph＝7.4。
16、本申请的第五目的在于提供一种比色和荧光双传感器特异性检测tet的方法，包括以下步骤：
17、(1)比色法：在ph＝4、温度为37℃、time＝30min的条件下，在apt-nicofe-mof-74、tmb、h2o2组成的缓冲溶液中加入不同浓度的tet溶液，反应15min后离心后测吸光度，652nm处的吸光度变化得到线性标准曲线，通过此线性标准曲线分析tet浓度；
18、(2)荧光法：将不同浓度的tet抗生素标准液加入到5μ·ml-1纳米酶溶液的检测系统中，相互作用15min后，在370nm激发波长下记录540nm处的荧光强度，从而建立检测tet标准曲线。
19、优选地，步骤(1)中，吸光度变化差和tet浓度的函数关系为y＝0.22485x+0.02932和y＝0.00831x+0.24738，tet的线性范围为0.05～80μm，lod为6nm。
20、优选地，步骤(1)中，荧光强度与tet浓度的函数关系为y＝42.156x+10.449,r2＝0.9949，纳米酶在540nm处的荧光强度与tet浓度在0.5nm～70μm之间表现出良好的线性关系。
21、本专利技术上述技术方案，具有如下有益效果：
22、本发申请双信号传感器特异性检测tet的方法，该方法首次成功制备了具有中空结构的ni、co、fe三原子掺杂的三金属纳米酶材料，并用靶向四环素的适配体修饰作为双信号见检测探针(apt-nicofe-mof-74)。该纳米酶具有很强的可重用性和稳定性且在h2o2存在下催化3,3'，5,5'-四甲基联苯胺(tmb)氧化的能力，生成蓝色的oxtmb，表明其具有过氧化物酶样活性，且在激发波长为370nm，在540nm处发射出较强的荧光，当四环素分子与其结合后会发生荧光猝灭现象，基于以上的信号响应，构建了双信号模式传感器用于四环素的检测。
23、本申请开发一种廉价、简单、灵活的通用技术用于特异性检测四环素的方法，具有重要的实际意义。
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1.一种三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，H4DOT、Fe(NO3)3·9H2O、Co(NO3)2·6H2O、Ni(NO3)2·6H2O的质量比为39:73:55:55，DMF、EtOH和H2O的体积比为15:1:1。
3.根据权利要求1所述的三金属纳米酶材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，乙酸和CTAB的用量比为100μl：100mg。
4.一种三金属纳米酶材料，其特征在于，所述三金属纳米酶材料是根据权利要求1-3任一所述的三金属纳米酶的制备方法制备得到的。
5.根据权利要求4所述的三金属纳米酶在特异性检测TET中的应用。
6.一种对TET具有选择性的三金属中空纳米材料，其特征在于，所述三金属中空纳米材料的制备方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的对TET具有选择性的三金属中空纳米材料，其特征在于，步骤(1)中，三金属纳米酶和PEI水溶液的质量体积比为2:1，所述PEI水溶液为20mg·mL-1,pH＝8
8.一种比色和荧光双传感器特异性检测TET的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的比色和荧光双传感器特异性检测TET的方法，其特征在于，步骤(1)中，吸光度变化差和TET浓度的函数关系为y＝0.22485x+0.02932和y＝0.00831x+0.24738，TET的线性范围为0.05～80μM，LOD为6nM。
10.根据权利要求8所述的比色和荧光双传感器特异性检测TET的方法，其特征在于，步骤(1)中，荧光强度与TET浓度的函数关系为y＝42.156x+10.449,R2＝0.9949，纳米酶在540nm处的荧光强度与TET浓度在0.5nM～70μM之间表现出良好的线性关系。
...【技术特征摘要】
1.一种三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，h4dot、fe(no3)3·9h2o、co(no3)2·6h2o、ni(no3)2·6h2o的质量比为39:73:55:55，dmf、etoh和h2o的体积比为15:1:1。
3.根据权利要求1所述的三金属纳米酶材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，乙酸和ctab的用量比为100μl：100mg。
4.一种三金属纳米酶材料，其特征在于，所述三金属纳米酶材料是根据权利要求1-3任一所述的三金属纳米酶的制备方法制备得到的。
5.根据权利要求4所述的三金属纳米酶在特异性检测tet中的应用。
6.一种对tet具有选择性的三金属中空纳米材料，其特征在于，所述三金属中空纳米材料的制备方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的对tet具有选择性的三金属中空纳米材料，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张杨，张丹丹，张洪进，任群翔，张俊，
申请(专利权)人：沈阳医学院，
类型：发明
国别省市：
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