脂肪酶催化猪油合成抗坏血酸脂肪酸酯的方法技术

本发明专利技术涉及脂肪酶催化猪油合成抗坏血酸脂肪酸酯的方法，属于生物催化领域。以天然动物油脂－猪油和Ｌ－抗坏血酸为原料，非水体系中脂肪酶催化猪油和甲醇进行醇解反应制备复合脂肪酸甲酯，然后再催化复合脂肪酸甲酯与Ｌ－抗坏血酸进行转酯化反应制备抗坏血酸脂肪酸酯。该方法在反应介质中，以固定化酶作为催化剂，酶用量为１２～２０％，底物比率１∶２～１１，反应温度５０～５５℃，反应时间２０～３２ｈ，然后将反应液经过滤、洗涤、萃取或硅胶柱分离、低压真空干燥等步骤制备Ｌ－抗坏血酸脂肪酸酯。本发明专利技术的方法利用廉价的猪油作为反应底物，能在较短的反应时间内获得高的转化率，从而降低了生产成本，有利于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
脂肪酶催化猪油合成抗坏血酸脂肪酸酯的方法，其特征为：　　１）复合脂肪酸甲酯的制备　　称取猪油，按精制猪油与甲醇摩尔比为１∶４～５加入甲醇，按猪油体积分数４０％加入叔戊醇，混合均匀后，按猪油质量分数２～５％加入固定化脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５，置于５０℃恒温摇床中以２００ｒ／ｍｉｎ的转速醇解反应１０ｈ，反应结束后，过滤除去固定化脂肪酶，反应液经减压蒸馏出甲醇和叔戊醇，并移入分液漏斗，静置后分离出下层的甘油，上层为纯度９８％油状的复合脂肪酸甲酯；　　２）非水体系中脂肪酶催化合成Ｌ－抗坏血酸脂肪酸酯　　按Ｌ－抗坏血酸与复合脂肪酸甲酯的摩尔比为１∶２～１１称取Ｌ－抗坏血酸和步骤１）得到的复合脂肪酸甲酯，加入２０ｍｌ反应介质中，在反应温度５０～５５℃下预热使反应物溶解并混合均匀，然后按复合脂肪酸甲酯质量分数１０～２０％加入Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５固定化脂肪酶，反应混合物在５０～５５℃摇床中以１８０ｒ／ｍｉｎ的转速转酯化反应４～３３ｈ，得到Ｌ－抗坏血酸脂肪酸酯的反应液；　　或者按Ｌ－抗坏血酸与复合脂肪酸甲酯的摩尔比为１∶２～１１称取Ｌ－抗坏血酸和复合脂肪酸甲酯，在规格为２０＊２５０ｍｍ的不锈钢柱里装入Ｌ－抗坏血酸，２０＊１００ｍｍ的不锈钢柱里按复合脂肪酸甲酯质量分数１０～２０％装入Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５固定化脂肪酶，放入５０～５５℃恒温水浴锅中，在称取复合脂肪酸甲酯的物料瓶中，加入３００ｍｌ反应介质，并通过磁力搅拌器不断搅拌，然后依次将蠕动泵、Ｌ－抗坏血酸柱和酶柱用耐有机溶剂的硅胶管连接起来，启动恒流泵，流速为０．５～２．０ｍＬ／ｍｉｎ，循环反应２０～２４ｈ，得到Ｌ－抗坏血酸脂肪酸酯的反应液；　　３）产物的分离纯化　　有机溶剂萃取法，先通过过滤的方法除去固定化脂肪酶，将滤液真空蒸发除去有机溶剂后，取在２５～５０℃下溶解于正己烷中，４℃下静止，于４℃高速离心２０ｍｉｎ得到沉淀，沉淀用乙酸乙酯溶解后，再加入乙酸乙酯体积４倍的去离子水，充分混匀，置于分液漏斗中静置分层，取上层液低压真空干燥得到白色结晶；　　或者硅胶柱分离法，硅胶浸泡于含体积比５％异丙醇的正己烷中，湿法上柱，用含５％异丙醇的正己烷洗脱２～３个柱体积平衡后上样，用含体积比５％异丙醇的正己烷洗脱去杂，然后用含１０％异丙醇和２０％异丙醇的正己烷分段洗脱并收集，将收集液低压真空干燥得到白色结晶。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆兆新，吕凤霞，赵海珍，别小妹，张宇，刘建伟，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]