【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法，属药物质量检测领域。
技术介绍
1、近年来，心血管疾病呈现出日益严重的流行态势，已成为扼杀人类健康的头号“杀手”。特别是随着肥胖、高血脂以及老龄化问题的日益加重，缺血性心脏病的发病人数也明显增加。心肌缺血(myocardial ischemia)是指冠状动脉给心脏的血液灌注减少、供氧量降低，使能量代谢异常，无法维持心脏正常工作的一种病理生理状态，属于中医“胸痹心痛”的范畴，临床表现为胸骨后或心前区闷痛，甚则胸痛彻背，喘息不得卧，甚至威胁人的生命。川芎为川产道地中药材，辛散温通，既能活血化瘀，又能行血中气滞，为血中之气药，具有活血行气，祛风止痛之功效，是临床上常用于治疗心肌缺血和冠心病的中药材，具有疗效确切，副作用少的特点。然而，对于川芎其活血化瘀和治疗心肌缺血的物质基础还不明确，缺乏系统研究，严重限制了该中药用于心肌缺血相关疾病的质量控制和现代制剂开发。任伟光等，川芎的研究进展及质量标志物(q-marker)的预测分析，世界科学技术-中医药现代化★中药学研究，第二十三卷第九期，根据质量标志物(q-marker)理念，通过化学成分与成分有效性、成分可测性、入血成分、不同配伍中表达成分、贮藏温度几个方面对川芎质量标志物成分进行预测与分析，建议将酚酸类中阿魏酸、阿魏酸松柏酯，苯酞成分中z-藁本内酯、洋川芎内酯a、i、h、欧当归内酯a可作为川芎的q-marker，但是由于该文献中涉及了川芎的多种功能(心脑血管系统、神经系统、呼吸系统、肝、肾功能)，对于药材的质量控制针对性和操
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供了川芎活血化瘀、抗心肌缺血的中药质量标志物的筛选和检测方法及其应用。
2、本专利技术提供了川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法，它包括如下步骤：
3、a、分别取川芎提取物和动物含药血清，采用uplc-q-tof-ms/ms检测，比较检测得到的总离子流图，将具有差异的峰的色谱信息与文献比对确定入血成分；
4、b、取步骤(1)所得入血成分，采用氧化应激损伤心肌细胞模型，评价入血成分的心肌细胞保护活性，筛选能增加心肌细胞细胞活力的成分，即为川芎抗心肌缺血的中药质量标志物。
5、其中，所述的川芎提取物是川芎的80％乙醇提取物；
6、所述的所述uplc-q-tof-ms/ms的色谱条件为：流动相0.1％磷酸水-乙腈溶液，梯度洗脱程序：0～5min，10％乙腈；5～12min，10％-15％乙腈；12～17min，15％-20％乙腈；17～33min，20％-40％乙腈；33～48min，40％-80％乙腈；48～50min，80％-10％乙腈；50～55min，10％乙腈；流速0.3ml/min，柱温35℃，进样量10μl；
7、所述uplc-q-tof-ms/ms的质谱条件为：电喷雾离子源，负离子扫描，毛细管电压，3.0kv；样品锥电压，40v；源温度，150℃；解吸气体温度，450℃；解吸气体流速，800l/h；分子离子扫描碰撞能量，6v；ms/ms碰撞能量，2-4v，质量数扫描范围m/z 100～1000。
8、本专利技术提供了一种川芎抗心肌缺血的质量标志物，它是由所述的川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法筛选得到的，是由阿魏酸、洋川芎内酯a、洋川芎内酯i、藁本内酯、洋川芎内酯h、正丁烯基苯酞、丁基苯酞组成。
9、其中，所述的标志物的hplc指谱图谱具有七个特征峰，相对保留时间分别为：13.648、16.919、17.993、35.424、36.497、40.586和41.149min，相对保留时间在±10％范围内波动；
10、色谱条件为：色谱柱：capcell pak mg ii s5 c18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈(a)–1％磷酸水(b)；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；柱温：30℃；(6)进样量：10.0μl；
11、梯度洗脱程序如下表：
12、
13、
14、本专利技术提供了一种具有抗心肌缺血作用的川芎提取物，它是以所述的质量标志物为指标用于控制川芎提取物的质量，所述的川芎提取物的制备方法为：取川芎药材，加10-20倍量40％-80％乙醇回流提取1-3次，每次1.5-2.5h。
15、进一步优选地，所述的川芎提取物的制备方法为：取川芎药材，加20倍量80％乙醇回流提取3次，每次1.5h。
16、本专利技术还提供了一种检测所述的川芎抗心肌缺血的质量标志物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
17、a、供试品制备：
18、取川芎粗粉20g，加入400ml浓度为80％的乙醇，冷凝回流提取1.5小时，重复3次，合并滤液，真空减压浓缩滤液至100ml；使用甲醇将川芎对照品浓度稀释为0.04g/ml并通过0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
19、b、对照品溶液制备：取质量标志物的对照品，加甲醇溶解，即得；
20、c、测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10.0μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
21、色谱条件为：色谱柱：capcell pak mg ii s5 c18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈(a)–1％磷酸水(b)；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；柱温：30℃；(6)进样量：10.0μl；
22、梯度洗脱程序如下表：
23、
24、本专利技术对川芎治疗心肌缺血的质量标志物(q-marker)进行筛选，在发现q-marker成分的基础上，优化川芎的提取工艺，建立了一套新的检测方法和质量标准，有利于川芎提取工艺的优化、质量控制和现代制剂的开发。
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1.川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法，其特征在于：它包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述的川芎提取物是川芎的80％乙醇提取物；
3.一种川芎抗心肌缺血的质量标志物，其特征在于：它是由权利要求1或2所述的川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法筛选得到的，是由阿魏酸、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、藁本内酯、洋川芎内酯H、正丁烯基苯酞、丁基苯酞组成。
4.根据权利要求3所述的川芎抗心肌缺血的质量标志物，其特征在于：所述的标志物的HPLC指谱图谱具有七个特征峰，相对保留时间分别为：13.648、16.919、17.993、35.424、36.497、40.586和41.149min，相对保留时间在±10％范围内波动；
5.一种具有抗心肌缺血作用的川芎提取物，其特征在于：它是以权利要求3或4所述的质量标志物为指标用于控制川芎提取物的质量，所述的川芎提取物的制备方法为：取川芎药材，加10-20倍量40％-80％乙醇回流提取1-3次，每次1.5-2.5h。
6.根据权利要求5所述的川芎
7.一种检测权利要求3或4所述的川芎抗心肌缺血的质量标志物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法，其特征在于：它包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述的川芎提取物是川芎的80％乙醇提取物；
3.一种川芎抗心肌缺血的质量标志物，其特征在于：它是由权利要求1或2所述的川芎活血化瘀、抗心肌缺血的质量标志物的筛选方法筛选得到的，是由阿魏酸、洋川芎内酯a、洋川芎内酯i、藁本内酯、洋川芎内酯h、正丁烯基苯酞、丁基苯酞组成。
4.根据权利要求3所述的川芎抗心肌缺血的质量标志物，其特征在于：所述的标志物的hplc指谱图谱具有七个特征峰，相对保留时间分别为：13.648、16.919、17.993、...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭伟，王玲玉，汤丹丹，吴纯洁，赵姝婷，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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