本发明专利技术公开了一种从莜麦中提取α－淀粉酶抑制剂的方法，本方法先将莜麦种子去壳粉碎，经丙酮脱脂，然后硫酸铵沉淀、离子交换层析及凝胶层析最后获得电泳纯的α－淀粉酶抑制剂，抑制比活为２６．４３Ｕ／ｍｇ。本发明专利技术提取α－淀粉酶抑制剂的材料来源于莜麦，提纯方法简便，产品纯度高，抑制活性强，提取的α－淀粉酶抑制剂可用于制备减肥和治疗糖尿病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物有效成份的提取方法，具体是一种从莜麦种子中提取α “淀粉酶 抑制剂的方法。
技术介绍
近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病、高血压、肥胖症正成为普遍的高发病， 严重危害着人类的健康。糖尿病是一种由于体内胰岛素分泌不足引起的以糖代谢紊乱为主 的全身性疾病。而肥胖则引发多种疾病，如高血压，冠心病、心血管疾病、糖尿病、高血脂等， 成为威胁人类健康和生活满意度的最大杀手。α _淀粉酶抑制剂在临床医学上，可以防治糖 尿病、高血压、高血脂等疾病。α-淀粉酶抑制剂属于糖苷水解酶抑制剂中的一种，是近年来国外开发的一类新 型口服抗糖尿病的药物，主要是通过特异性抑制唾液及胰腺分泌的α-淀粉酶的水解，来 减少二级产物还原糖的生成，抑制食物中碳水化合物的水解和消化，从而减缓或减少对糖 分的摄取，降低血糖和血脂水平，降低食后食物中淀粉等糖类物质的分解和吸收，从而起到 减低血糖、血脂的作用。另一方面α-淀粉酶抑制剂通过抑制饮食后血糖浓度升高，脂肪合 成降低，延缓肠道的排空，来增加脂肪消耗以达到体重减轻的目的。目前上市的α-淀粉酶 酶抑制剂类药品有良好的降低餐后血糖的作用，但其价格高，而且在临床应用上存在着副 反应，从一些能够安全的食用植物中寻找天然的、副作用弱的α-淀粉酶抑制剂具有广泛 的前景。鉴于莜麦中蛋白含量高，又有高质量的膳食纤维，丰富的维生素和矿物质，莜麦常 作为糖尿病人的推荐食物之一。因此，国际卫生组织把它正式列为推荐的保健食品。从莜 麦中分离纯化具有抑制α “淀粉酶活力的蛋白类成分，具有很好的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，所提取的 α-淀粉酶抑制剂纯度高。本专利技术提供的一种从莜麦中提取α -淀粉酶抑制剂的方法，包括如下步骤(1)将莜麦种子磨碎，按每IOOg莜麦300_600mL丙酮的量，将莜麦粉加入丙酮中， 室温放置10小时以上，用真空减压泵抽干成丙酮粉；(2)配制含IOOmM NaCl的20mM Tris-HCl ρΗ8· 0的缓冲液，用每IOOml缓冲液溶 解10-20g丙酮粉，在高速离心机上离心30min以上，保留上清液；(3)在上清液中加入硫酸铵，收集30% -80%硫酸铵沉淀；(4)悬浮沉淀，用20mM Tris-HCl pH8. 0缓冲液透析除盐，得到蛋白溶液；(5)将蛋白溶液，在高速离心机上离心30min以上，取上清液上样于经20mM Tris-HCl pH8. 0缓冲液平衡的阴离子型柱上，收集穿透蛋白溶液；(6)将穿透蛋白溶液上样到经20mM Tris-HCl pH8. 0缓冲液平衡的阳离子型柱上，进行NaCl浓度梯度洗脱，收集50mMNaCl盐浓度下的洗脱蛋白溶液；(7)将洗脱蛋白溶液上样到经20mM Tris-HCllOOmM NaCl pH8. 0缓冲液平衡的凝 胶层析柱上，用20mM Tris-HCl IOOmM NaCl pH8. 0缓冲液洗脱，收集活性洗脱峰，脱盐，冷 冻干燥，获得冻干粉。所述的阴离子型柱是 Q-S印harose，如 Qipharose fast flow Q-Sepharose HP。所述的阳离子型柱是Herparin-Sepharose,如Herparin-Sepharose fast flow或 herparin-Sepharose HP。所述的凝胶层析柱是S印hacryl凝胶层析柱，如S印hacryl-200凝胶层析柱。所述的高速离心机，使用的转速在IOOOOrpm以上。 本专利技术从莜麦中分离提取出α -淀粉酶抑制剂的纯度高，抑制比活为26. 43U/mg, 可用于制备减肥和治疗糖尿病的药物。莜麦是一种高蛋白低糖的农作物，是糖尿病人的极好食品，对其有效成分的进一 步分离，有利于提高其附加值；从莜麦中提取出α-淀粉酶抑制剂作为药品，存在极好的安 全性。附图说明图1莜麦α _淀粉酶抑制剂纯化电泳图，图中1、蛋白质分子量标准；2、莜麦种子 蛋白粗提液；3、硫酸铵沉淀透析后蛋白样品；4、Q柱分离蛋白样品；5、Heparin柱分离蛋白 样品；6、Sephacryl-200柱分离蛋白样品。具体实施例方式实施例1 α -淀粉酶抑制剂制备粉碎与脱脂将莜麦种子去壳粉碎成莜麦面粉；称取IOOg莜麦面粉，加入500ml的丙酮，在室温 下放置12小时后，真空减压泵下抽成丙酮粉；蛋白抽提与粗分离用含IOOmM NaCl的20mM Tris-HCl pH8. 0的缓冲液100ml， 溶解丙酮粉，然后将溶解的蛋白溶液在高速离心机上，12000rpm，4°C离心30min，取上清液 进行硫酸铵沉淀，收集30% -80%硫酸铵沉淀，用20mM Tris-HCl pH8. 0缓冲液20ml悬浮， 装透析袋，用1000ml的相同缓冲液透析，更换外透析液四次；蛋白柱层析分离将透析后的蛋白溶液，在高速离心机上，12000rpm，4°C离心 30min，取上清液上样到经20mM Tris-HCl pH8. 0平衡的Q_s印harose fast flow柱上，收 集穿透蛋白溶液；并再上样将于经20mM Tris-HCl (pH8. 0)平衡的!feparin-s印harose fast flow柱上，进行NaCl浓度梯度洗脱，收集50mM NaCl盐浓度下洗脱蛋白溶液；最后上样到 经20mMTris-HCl，50mM NaCl平衡的S印hacryl_200凝胶柱层析柱上，收集不同的洗脱峰， 进行活性测定，收集具有活性的蛋白溶液洗脱峰。蛋白冷冻干燥活性蛋白溶液用G25凝胶柱进行脱盐处理，然后冷冻干燥。IOOg莜 麦获得20mg电泳纯度的α -淀粉酶抑制剂。表1实施例1 α -淀粉酶抑制剂分离纯化总表4 实施例2 莜麦α -淀粉酶抑制剂活性测定及与阿卡波糖淀粉酶抑制活性的比较1、α -淀粉酶抑制剂抑制活性的测定利用3. 5-二硝基水杨酸法进行测定，将IOOyL α -淀粉酶与100 μ L α -淀粉 酶抑制剂于37°C保温lOmin，然后在反应体系中加入IOOyL 可溶性淀粉(用含20mM NaCl,0. 2mM CaCl2的20mM磷酸钠缓冲液pH6. O配制)，37°C保温lOmin，最后向反应体系中 加入Iml 3. 5- 二硝基水杨酸，沸水浴lOmin，用蒸馏水将反应体系补足到10ml，在540nm处 测定光吸收，以不加α-淀粉酶抑制剂为对照。α-淀粉酶抑制剂的活力定义为在37°C条件下，每分钟抑制α _淀粉酶催化 1 U mol葡萄糖生成所需的抑制剂的量。2、莜麦α -淀粉酶抑制剂与阿卡波糖对α _淀粉酶抑制活性的比较分别称取5mg的莜麦α -淀粉酶抑制剂与阿卡波糖，利用3. 5_ 二硝基水杨酸法， 测定两者对α _淀粉酶抑制活性，莜麦α -淀粉酶抑制剂的抑制比活力为26. 4U/mg，阿卡波 糖为1. 84U/mg，前者大约是后者活力的14. 4倍。权利要求一种从莜麦中提取α 淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤(1)将莜麦种子磨碎，按每100g莜麦300 600mL丙酮的量，将莜麦粉加入丙酮中，室温放置10小时以上，用真空减压泵抽干成丙酮粉；(2)配制含100mM NaCl的20mM Tris HCl pH8.0的缓冲液，用每100ml缓冲液溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从莜麦中提取α－淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤： （１）将莜麦种子磨碎，按每１００ｇ莜麦３００－６００ｍＬ丙酮的量，将莜麦粉加入丙酮中，室温放置１０小时以上，用真空减压泵抽干成丙酮粉； （２）配制含１００ｍＭ－ＮａＣｌ的２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ－ｐＨ８．０的缓冲液，用每１００ｍｌ缓冲液溶解１０－２０ｇ丙酮粉，在高速离心机上离心３０ｍｉｎ以上，保留上清液； （３）在上清液中加入硫酸铵，收集３０％－８０％硫酸铵沉淀； （４）悬浮沉淀，用２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ－ｐＨ８．０缓冲液透析除盐，得到蛋白溶液； （５）将蛋白溶液，在高速离心机上离心３０ｍｉｎ以上，取上清液上样于经２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ８．０缓冲液平衡的阴离子型柱上，收集穿透蛋白溶液； （６）将穿透蛋白溶液上样到经２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ－ｐＨ８．０缓冲液平衡的阳离子型柱上，进行ＮａＣｌ浓度梯度洗脱，收集５０ｍＭ－ＮａＣｌ盐浓度下的洗脱蛋白溶液； （７）将洗脱蛋白溶液上样到经２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ１００ｍＭ－ＮａＣｌ－ｐＨ８．０缓冲液平衡的凝胶层析柱上，用２０ｍＭ－Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ１００ｍＭ－ＮａＣｌ－ｐＨ８．０缓冲液洗脱，收集活性洗脱峰，脱盐，冷冻干燥，获得冻干粉。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：石亚伟，闫永飞，钮利喜，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。