一种玫瑰花瓣原生质体分离及瞬时转化体系构建的方法技术

本发明专利技术涉及一种玫瑰花瓣原生质体提取及瞬时转化体系构建的方法，具体包括：玫瑰花瓣原生质体提取方法、原生质体瞬时转化方法、检测转录因子在下游靶基因启动子上富集的方法。本发明专利技术以“冷香”玫瑰花瓣为材料，用刀片将花瓣切成2mm左右细丝状，放入酶解液中进行酶解5h左右，酶解完成后用细胞筛过滤得到原生质体，加入1×W5洗液，反复洗涤3次以上，最后进行PEG介导原生质体瞬时转化，检测转录因子在靶基因启动子上富集情况。本发明专利技术建立了玫瑰花瓣原生质体制备和瞬时转化的方法，操作简单，无需无菌组培，省去大量前期准备工作，且转化率高，可为玫瑰基因功能分析和细胞工程等应用基础研究提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物生物，具体涉及玫瑰花瓣原生质体的提取和瞬时转化方法。

技术介绍

1、玫瑰（ rosa rugosa）系蔷薇科蔷薇属多年生常绿或落叶丛生灌木，是世界上重要的观赏和生产兼用型花卉。

2、玫瑰在我国有2000余年的栽培历史，当前广泛种植于全国各地，其中以山东平阴、甘肃苦水为代表，形成了具有地域特色的玫瑰栽培品种。

3、玫瑰是一种木本植物，具有漫长的遗传转化周期，成功率也较低，这严重限制了玫瑰基因功能验证和分子育种。

4、原生质体是细胞壁以内各种结构的总称，是组成细胞的一个形态结构单位。

5、原生质体能够直接摄取外源的dna(质粒)，是进行遗传转化的理想受体，广泛应用于细胞生物学、组织和细胞培养、分子生物学等方面的研究。

6、目前，植物原生质体的在模式植物和粮食作物上研究较多，有关玫瑰原生质体制备的研究报道较少。

7、建立高效的玫瑰原生质体提取和瞬时转化体系，将为玫瑰基因功能验证、基因表达调控、蛋白亚细胞定位以及基因编辑等方面本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.玫瑰花瓣原生质体的分离方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解液的组成为：20 mmol/L KCl 、20mmol/L MES-KOH 、10 mmol/L CaCl2 、0.8 mol/L Mannitol、3% 纤维素酶 、0.8% 果胶酶和0.1% BSA（牛血清白蛋白），余量为水；所述W5溶液的组成为：154 mmol/L NaCl 、125mmol/L CaCl2、5 mmol/L KCl、2 mmol/L MES-KOH。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述玫瑰原...

【技术特征摘要】

1.玫瑰花瓣原生质体的分离方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解液的组成为：20 mmol/l kcl 、20mmol/l mes-koh 、10 mmol/l cacl2 、0.8 mol/l mannitol、3% 纤维素酶 、0.8% 果胶酶和0.1% bsa（牛血清白蛋白），余量为水；所述w5溶液的组成为：154 mmol/l nacl 、125mmol/l cacl2、5 mmol/l kcl、2 mmol/l mes-koh。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述玫瑰原生质体重悬于mmg溶液，得到玫瑰原生质体悬浮液，所述mmg溶液的组成为：0.4 mmol/l mannitol，15 mmol/l mgcl2，4 mmol/l mes-koh。

4.玫瑰原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

5.（b2）培养：在所述混合液中加入w5溶液洗涤除去pe...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴国华，陈阳，白雨婧，王巧，陈艳，李峰，王珏，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：