【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于诊断用抗体制备，包括一种抗小鼠死亡受体5胞外区的单克隆抗体，具体包括一种抗小鼠死亡受体5胞外区的单克隆抗体9d1、包含所述单克隆抗体9d1的衍生诊断产品及相关方法和应用。
技术介绍
1、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tnf-related apoptosis-inducing ligand，trail)是肿瘤坏死因子超家族中的一员，可通过与其受体死亡受体4(death receptor 4，dr4)/死亡受体5(death receptor 5，dr5)结合来诱导细胞凋亡，其可在对正常细胞相对安全的情况下选择性杀伤肿瘤细胞，以trail为靶点的肿瘤治疗受到了广泛关注。近年来，随着trail/trail-r的深入研究，该通路在除肿瘤之外的众多疾病的发生发展中也扮演着重要角色，例如：缺血缺氧性疾病、骨关节相关疾病、肝衰竭、炎症相关疾病等。因此，了解trail/trail-r在疾病中所发挥的作用对疾病的治疗及预后检测均具有重要的意义。
2、死亡受体5(dr5)由tnfrsf10b基因编码，在人、大鼠、小鼠中的序列非常保守。有趣的是，在小鼠中，仅存在一种携带功能性死亡结构域的trail受体，又被称为mk，mk富含半胱氨酸的胞外段、一个跨膜结构域和一个细胞质死亡结构域。mk与人dr4、dr5高度同源，并可与trail高亲和力结合。虽然dr4与dr5均可与trail结合诱导凋亡，但dr5与trail的亲和力最强，其被普遍认为是更有效的凋亡触发因子。因此，在trail相关疾病中，针对dr5的研究更加具有价值。现有的d
3、基于trail/dr5通路与肿瘤及缺血缺氧性疾病的关系、现有dr5单克隆抗体现状、不同种属之间dr5的同源性，本专利技术的专利技术人团队通过蛋白表达与纯化获得了纯度较高的小鼠dr5胞外段蛋白，以其作为免疫原免疫大鼠制备得到了特异性抗小鼠dr5单克隆抗体，并进一步通过验证实验证明所述单克隆抗体具有优异的特异性、灵敏度和亲和力，为trail/dr5相关疾病的前期实验研究和临床治疗提供了新的策略和思路。
技术实现思路
1、针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种抗小鼠死亡受体5胞外区的单克隆抗体9d1，经实验验证发现，所述单克隆抗体9d1对dr5蛋白具有较好的特异性、灵敏度和亲和力，为本领域开发dr5蛋白相关的检测和/或辅助检测产品奠定了基础，同时，本专利技术有望为trail/dr5相关疾病的免疫分析及其预后监测提供更多检测工具和策略。本专利技术采用了如下技术方案实现上述专利技术目的：
2、抗死亡受体5的单克隆抗体
3、在一方面，本专利技术提供了一种抗死亡受体5的单克隆抗体。
4、进一步，所述单克隆抗体的重链可变区中包含三个重链互补决定区hcdr1-3，所述单克隆抗体的轻链可变区中包含三个轻链互补决定区lcdr1-3；
5、所述hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seqid no:3所示或分别如seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6所示；
6、所述lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列分别如seq id no:9、seq id no:10、seqid no:11所示或分别如seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14所示。
7、进一步，所述单克隆抗体包含：
8、(i)如seq id no:7所示的重链可变区或与seq id no:7所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的重链可变区；
9、(ii)如seq id no:15所示的轻链可变区或与seq id no:15所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的轻链可变区。
10、在一些实施方案中，所述重链可变区还包括如seq id no:7所示的重链可变区的功能变体，所述轻链可变区还包括如seq id no:15所示的轻链可变区的功能变体，所述功能变体通过插入、缺失和/或取代其中的一个或多个氨基酸形成，前提是功能变体保留结合死亡受体5(dr5)的能力。
11、所述功能变体包含或组成为与亲本多肽的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、或至少99.9％的序列同源性的氨基酸序列。
12、在功能变体的内容中，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量优选不超过亲本氨基酸序列中氨基酸总数的40％，更优选不超过35％，更优选是1％至33％，并且更优选是5％至30％，更优选是10％至25％，更优选是15％至20％。例如，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量可以是1至20，优选是1至10，更优选是1至7，还更优选是1至5，最优选是1至2。在优选的实施方案中，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量是1、2、3、4、5、6或7。在一些实施方案中，所述插入、缺失和/或取代可以在框架(fr)区，例如在fr1、fr2、fr3和/或fr4进行。
13、在一些实施方案中，一个或多个氨基酸的取代可以是一个或多个氨基酸的保守取代。此类保守取代优选地是以下组(a)至(e)中的一个氨基酸被同组中的另一个氨基酸残基取代：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性残基：ala、ser、thr、pro和gly；(b)极性、带负电的残基及其(不带电的)酰胺：asp、asn、glu和gln；(c)极性、带正电的残基：his、arg和lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：met、leu、he、val和cys；(e)芳香族残基：phe、tyr和trp。
14、特别优选的保守取代如下：ala到gly或到ser；arg到lys；asn到gln或到his；asp到glu；cys到ser；gln到asn；glu到asp；gly到ala或到pro；his到asn或到gln；ile到leu或到val；leu到ile或到val；lys到arg、到gln或到glu；met到leu、到tyr或到ile；phe到met、到leu或到tyr；ser到thr；thr到ser；trp到tyr；tyr到trp；和/或phe到val、到ile或到leu。
15、在一些实施方案中，本专利技术所述hcdr1-3、lcdr1-3对应的氨基酸序列并不局限于本专利技术具体列举出的序列，采用任何cdr编号方案(现有的cdr编号方案或将来产生的新的cdr编号方案)分别对如seq id no:7所示的重链可变区中的hcdr1-3进行定义、对如seq idno:15所示的轻本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗死亡受体5的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区中包含三个重链互补决定区HCDR1-3，所述单克隆抗体的轻链可变区中包含三个轻链互补决定区LCDR1-3；
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含：
3.一种编码权利要求1或2所述单克隆抗体的多核苷酸分子；
4.一种包含权利要求3所述多核苷酸分子的表达载体；
5.一种包含权利要求4所述表达载体的重组宿主细胞。
6.一种制备权利要求1或2所述单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：
7.一种体外非诊断目的地检测死亡受体5蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：
8.一种免疫偶联物或检测试剂盒，其特征在于，所述免疫偶联物包含权利要求1或2所述的单克隆抗体和与所述单克隆抗体偶联的偶联物；
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1或2所述的单克隆抗体。
10.如下任一方面应用：
【技术特征摘要】
1.一种抗死亡受体5的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区中包含三个重链互补决定区hcdr1-3，所述单克隆抗体的轻链可变区中包含三个轻链互补决定区lcdr1-3；
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含：
3.一种编码权利要求1或2所述单克隆抗体的多核苷酸分子；
4.一种包含权利要求3所述多核苷酸分子的表达载体；
5.一种包含权利要求4所述表达载体的重组宿主细...
【专利技术属性】
技术研发人员：张利杰，王耀辉，万岱，王兰菊，赵丹，陈岩岩，王璇，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：
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