【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体地涉及通过激活gata5和isl1在心肌梗死后心脏损伤修复中的应用。
技术介绍
1、心肌梗死(mi)指的是在冠状动脉病变的基础上，发生血供急剧减少或中断，引起相应心肌组织严重而持久地急性缺血性坏死。一直以来都是心肌梗死治疗的难题。
2、在心肌梗死过程中，会出现一系列因子的变化，包括多个基因或蛋白水平的变化，且已有很多报道。
3、但是，到目前为止，仍然没有开发出可以通过单独调控某些因子从而达到快速有效地改善心肌梗死的方法。
4、因此，发现通过单独调控某些因子从而达到快速、有效地改善心肌梗死后心脏损伤的方法具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种快速、有效地改善心肌梗死后心脏损伤的方法。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种共表达gata5和isl1蛋白的病毒载体，在制备治疗心肌梗死后心脏损伤的药物中的用途，所述病毒载体上带有表达gata5和isl1蛋白的基因表达盒；在所述表达盒中，编码gata5蛋白的第一编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第一启动子操作性连接，而编码isl1蛋白的第二编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第二启动子操作性连接。
3、在另一优选例中，所述的编码gata5蛋白的第一编码序列和所述编码isl1蛋白的第二编码序列是分别位于两个不同的表达盒；或位于同一表达盒。
4、在另一优选例中，所述的第一启动子和第二启动子是同一启动子(即编码gata5蛋白的第一编码
5、在另一优选例中，所述的第一编码序列和第二编码序列与一个心脏成纤维细胞特异性启动子操作性连接。
6、在另一优选例中，所述的第一编码序列和第二编码序列之间通过2a元件或ires元件连接。
7、在另一优选例中，所述的2a元件选自下组：p2a、t2a。
8、在另一优选例中，所述的病毒载体选自下组：腺病毒载体、aav载体、慢病毒载体、或其组合。
9、在另一优选例中，所述心脏成纤维细胞特异性的第一启动子和心脏成纤维细胞特异性的第二启动子是相同的或不同的心脏成纤维细胞特异性启动子。
10、在另一优选例中，所述心脏成纤维细胞特异性启动子为一型胶原蛋白(collageni)。
11、在另一优选例中，所述心脏成纤维细胞特异性启动子的序列如seq id no:1所示。
12、在本专利技术的第二方面，提供了一种表达盒，所述表达盒从5'-3'端具有式i结构：
13、z0-z1-z2-z3 (i)
14、式中，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；
15、z0为无或5'-utr元件；
16、z1为心脏成纤维细胞特异性启动子；
17、z2为编码gata5和isl1蛋白的核苷酸序列，其中编码gata5蛋白的核苷酸序列和编码isl1蛋白的核苷酸序列之间通过2a元件连接；和
18、z3为无或3'-utr元件。
19、在另一优选例中，所述的3'-utr元件包括polya元件。
20、在另一优选例中，所述心脏成纤维细胞特异性启动子为第一胶原蛋白启动子(collagen i)。
21、在另一优选例中，所述心脏成纤维细胞特异性启动子的序列如seq id no:1所示。
22、在另一优选例中，所述编码gata5和isl1蛋白的核苷酸序列如seq id no:2所示。
23、在另一优选例中，所述核苷酸序列包括dna序列、cdna序列、或mrna序列。
24、在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。
25、在本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有本专利技术第二方面所述的表达盒。
26、在另一优选例中，所述的载体包括：质粒、病毒载体。
27、在另一优选例中，所述的病毒载体选自下组：所述的病毒载体选自下组：腺病毒载体、aav载体、慢病毒载体、或其组合。
28、在另一优选例中，所述的病毒载体为腺病毒载体。
29、在本专利技术的第四方面，提供了一种如本专利技术第三方面所述的载体的用途，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于治疗心肌梗死后心脏损伤。
30、在本专利技术的第五方面，提供了一种药物制剂，所述的制剂含有(a)本专利技术第三方面所述的载体，以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
31、在另一优选例中，所述药物制剂用于治疗心肌梗死后心脏损伤。
32、在另一优选例中，所述药物制剂用于：
33、(a)增加左心室射血分数；
34、(b)增加短轴缩短率；
35、(c)减轻左心室舒张末期容积的增加；
36、(d)降低左心室收缩末期容积；
37、(e)降低左心室舒张末期内径；
38、(f)降低左心室收缩末期内径的增加；和
39、(g)抑制心肌梗死后纤维化的面积。
40、在另一优选例中，所述药物制剂的剂型为液体制剂。
41、在另一优选例中，所述制剂通过静脉注射。
42、在另一优选例中，所述载体为病毒载体。
43、在另一优选例中，所述药物制剂中病毒载体的含量为1×109-1×1016个病毒/毫升，较佳地为1×1012-1×1013个病毒/毫升。
44、在本专利技术的第六方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术第三方面所述的载体或其染色体中整合有外源的本专利技术第二方面所述的表达盒。
45、在另一优选例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物包括人和非人哺乳动物。
46、在另一优选例中，所述宿主细胞为心脏成纤维细胞。
47、在本专利技术的第七方面，提供了一种gata5和isl1蛋白的制备方法，包括步骤：
48、在适合表达的条件下，培养本专利技术第六方面所述的宿主细胞，从而表达gata5和isl1蛋白；和分离所述的gata5和isl1蛋白。
49、在本专利技术的第八方面，提供了一种治疗方法，将本专利技术第三方面所述的载体或本专利技术第五方面所述的药物制剂施用于需要的对象。
50、在另一优选例中，所述的腺病毒制剂通过静脉注射至需要的对象体内。
51、在另一优选例中，所述需要的对象包括人和非人哺乳动物。
52、在另一优选例中，所述治疗方法为治疗心肌梗死后心脏损伤的方法。
53、应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
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1.一种共表达GATA5和ISL1蛋白的病毒载体在制备治疗心肌梗死后心脏损伤的药物中的用途，其特征在于，所述病毒载体上带有表达GATA5和ISL1蛋白的基因表达盒；在所述表达盒中，编码GATA5蛋白的第一编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第一启动子操作性连接，而编码ISL1蛋白的第二编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第二启动子操作性连接。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述心脏成纤维细胞特异性的第一启动子和心脏成纤维细胞特异性的第二启动子是相同的或不同的心脏成纤维细胞特异性启动子。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的第一编码序列和第二编码序列与一个心脏成纤维细胞特异性启动子操作性连接。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述心脏成纤维细胞特异性启动子为第一型胶原蛋白启动子(Collagen I)。
5.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒从5'-3'端具有式I结构：
6.如权利要求5所述的表达盒，其特征在于，所述心脏成纤维细胞特异性启动子为第一型胶原蛋白启动子(Collagen I)，且其序列如SE
7.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求5所述的表达盒。
8.一种权利要求7所述的载体的用途，其特征在于，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于治疗心肌梗死后心脏损伤。
9.一种药物制剂，其特征在于，所述的制剂含有(a)权利要求7所述的载体，以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
10.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求7所述的载体或其染色体中整合有外源的权利要求5所述的表达盒。
...【技术特征摘要】
1.一种共表达gata5和isl1蛋白的病毒载体在制备治疗心肌梗死后心脏损伤的药物中的用途，其特征在于，所述病毒载体上带有表达gata5和isl1蛋白的基因表达盒；在所述表达盒中，编码gata5蛋白的第一编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第一启动子操作性连接，而编码isl1蛋白的第二编码序列与心脏成纤维细胞特异性的第二启动子操作性连接。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述心脏成纤维细胞特异性的第一启动子和心脏成纤维细胞特异性的第二启动子是相同的或不同的心脏成纤维细胞特异性启动子。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的第一编码序列和第二编码序列与一个心脏成纤维细胞特异性启动子操作性连接。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述心脏成纤维细胞特异性启动子为第一型胶原蛋白启动子...
【专利技术属性】
技术研发人员：周祥，张淑晨，徐建锋，肖思羽，
申请(专利权)人：苏州大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：
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