【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种地龙细胞外基质支架及其制备方法和应用。
技术介绍
1、烧伤、创伤及糖尿病足溃疡等造成的皮肤缺损是临床常见病症。这类患者由于皮肤完整性的破坏，不但要遭受身体和心理的痛苦，还会面临体液丢失、细菌感染和内脏损伤等风险，严重者甚至可能危及生命。因此，研发快速有效地促进皮肤创面愈合的方法和药物具有重要意义。
2、地龙，俗称蚯蚓，是我国一种传统中药材。它富含氨基酸、有机酸、脂肪酸及其酯类等营养成分，具有通络，平喘，利尿等功效。更引人注目的是，地龙具备很强的组织再生能力。当它身体的一部分受到损害时，可以通过产生全新的组织细胞，完整修复受损的部位。已有大量研究证实，地龙提取物可以促进成纤维细胞、施万细胞、成骨细胞等的增殖和迁移，进而加速皮肤创面愈合、神经组织再生和骨组织再生。因此，地龙在创面修复领域具有重要应用价值。
3、细胞外基质（extracellular matrix, ecm）是指细胞周围由多种大分子组成的三维纤维网络。它的成分主要包括胶原蛋白、弹性蛋白、氨基聚糖等结构性和功能性分子。最新研究表明，ecm不仅起到物理支持的作用，还在细胞增殖、迁移、分化等生物学活动的调节中发挥了至关重要的作用。比如，组织受到损伤时，ecm可以通过信号分子转导和力学性能转变等，诱导其中的细胞向特定功能方向转化，从而促进组织再生和恢复机体完整性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种地龙细胞外基质支架及其制备方法和应用，以实现对地龙的细胞外基质支
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种地龙细胞外基质支架的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、将地龙饥饿处理后，采用液氮处理地龙；
5、s2、将地龙置于三羟甲基氨基甲烷（tris）、乙二胺四乙酸（edta）和曲拉通x-100（tritionx-100）的混合溶液中，摇床反应2h；
6、s3、更换新鲜的混合溶液，摇床反应12~16h，洗涤，获得地龙细胞外基质支架。
7、根据上述技术手段，通过采用tris、edta和tritionx-100的混合溶液处理地龙，有效实现了地龙细胞外基质支架的成功制备，且经过试验证明相比于传统敷料，制备的地龙细胞外基质支架可有效促进皮肤创面愈合，具有更佳的促组织再生功能，同时，地龙细胞外基质支架的天然三维网状结构可以有效负载活性细胞（如成纤维细胞等，参见图5及图6）或药物（如生长因子、抗菌剂等），发挥促进血管化、加速再上皮化、抗感染等特定功能作用。
8、其中，由于既往地龙的应用主要是其干燥后躯体、粉末或提取物，本专利技术创新地采用脱细胞方法制备了地龙细胞外基质支架，不但可以去除异种异体细胞的免疫原性，而且该支架可以在保护皮肤创面和提供物理支撑的同时，通过生物调控作用原位诱导细胞的粘附、增殖、分化等，促进组织的修复和再生，是一种地龙全新的应用，且试验证明了它能够负载活性细胞，以及促进创面愈合。
9、优选的，所述混合溶液中三羟甲基氨基甲烷（tris）的质量浓度为0.5~0.9%。
10、优选的，所述混合溶液中三羟甲基氨基甲烷（tris）的质量浓度为0.7%。
11、优选的，所述混合溶液中乙二胺四乙酸（edta）的质量浓度为0.1~0.5%。
12、优选的，所述混合溶液中乙二胺四乙酸（edta）的质量浓度为0.3%。
13、优选的，所述混合溶液中曲拉通x-100（tritionx-100）的质量浓度为0.5~1.5%。
14、优选的，所述混合溶液中曲拉通x-100（tritionx-100）的质量浓度为1%。
15、优选的，所述s1中，具体包括：将地龙饥饿处理12~36h后，用水清洗，然后采用液氮处理地龙，静置30min。
16、优选的，所述s1中，将地龙饥饿处理24h。
17、优选的，所述s2中，具体包括：将地龙置于三羟甲基氨基甲烷（tris）、乙二胺四乙酸（edta）和曲拉通x-100（tritionx-100）的混合溶液中，在常温、转速为250rpm的条件下摇床反应2h。
18、优选的，所述s3中，具体包括：更换新鲜的混合溶液，在常温、转速为250rpm的条件下摇床反应12~16h，取出反应后的地龙，置于摇床上，在常温、转速为100rpm的条件下用水清洗3~8次，每次3~10min，获得地龙细胞外基质支架。
19、优选的，所述s3中，在常温、转速为100rpm的条件下用水清洗5次，每次5min，获得地龙细胞外基质支架。
20、本专利技术还提供一种地龙细胞外基质支架，采用本专利技术所述的制备方法制备得到。
21、本专利技术还提供一种如本专利技术所述的制备方法制备得到的地龙细胞外基质支架的应用，所述地龙细胞外基质支架应用于创面愈合的药物中。
22、本专利技术的有益效果：
23、本专利技术的地龙细胞外基质支架制备方法，通过采用三羟甲基氨基甲烷（tris）、乙二胺四乙酸（edta）和曲拉通x-100（tritionx-100）的混合溶液处理地龙，有效实现了地龙细胞外基质支架的成功制备，且经过试验证明制备的地龙细胞外基质支架可有效促进皮肤创面愈合，且相比于其他来源获得的细胞外基质支架，地龙细胞外基质支架具有更佳的促组织再生性能，同时，地龙细胞外基质支架的天然三维网状结构可以有效负载活性细胞（如成纤维细胞等）或药物（如生长因子、抗菌剂等），发挥促进血管化、加速再上皮化、抗感染等特定功能作用，地龙细胞外基质支架生物相容性好、无免疫原性，具有制备工艺简单、可操作性强和适合规模化大批量生产的优点；本专利技术实现了对地龙的细胞外基质支架的成功制备，改变了既往仅针对地龙提取物进行应用开发的思路，创新地提出了地龙新的应用方法，填补了地龙细胞外基质支架在创面愈合中应用的空白，发掘和扩大了地龙的应用价值，在医药
，具有推广应用价值。
【技术保护点】
1.一种地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中三羟甲基氨基甲烷（Tris）的质量浓度为0.5~0.9%。
3.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中乙二胺四乙酸（EDTA）的质量浓度为0.1~0.5%。
4.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中曲拉通X-100（TritionX-100）的质量浓度为0.5~1.5%。
5.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述S1中，具体包括：将地龙饥饿处理12~36h后，用水清洗，然后采用液氮处理地龙，静置30min。
6.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述S2中，具体包括：将地龙置于三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）和曲拉通X-100（TritionX-100）的混合溶液中，在常温、转速为250rpm的条件下摇床反应2h。
...【技术特征摘要】
1.一种地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中三羟甲基氨基甲烷（tris）的质量浓度为0.5~0.9%。
3.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中乙二胺四乙酸（edta）的质量浓度为0.1~0.5%。
4.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中曲拉通x-100（tritionx-100）的质量浓度为0.5~1.5%。
5.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其特征在于，所述s1中，具体包括：将地龙饥饿处理12~36h后，用水清洗，然后采用液氮处理地龙，静置30min。
6.根据权利要求1所述的地龙细胞外基质支架的制备方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘梦龙，罗高兴，邢孟秋，邓君，贺伟峰，贺丹枫，王颖，张小容，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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