【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制品，具体涉及一种基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗及其制备方法和应用。
技术介绍
1、以病原体抗原表位构建的肽疫苗可以诱导更为精准的针对病原微生物的免疫反应。此外，肽疫苗通过化学手段制备，生产成本低，可根据病原体突变信息快速调整疫苗组成，从而快速应对病原体突变带来的危害。由于b细胞受体的差异是在细胞水平，对于b细胞表位而言，一种病原体的b细胞表位有可能在不同的个体内引起b细胞活化。但是由于人类主要组织相容性复合物，负责呈递t细胞表位，存在个体差异，很难从病原体中筛选能够在大多数人体中都能有效诱导抗原特异性t淋巴细胞活化t细胞表位(包括cd4+和cd8+t细胞表位)。因此，目前肽疫苗主要利用b细胞表位构建。然而，仅靠b细胞表位难以诱导高效的体液免疫反应。这是因为b细胞活化成为抗体分泌细胞不仅需要多价抗原引发b细胞受体交联，还需要活化的th2型辅助性cd4阳性t细胞为b细胞提供cd40配体，而b细胞表位通常无法诱导t细胞活化。
2、目前，为了使b细胞表位具有免疫原性，一般将b细胞表位通过交联剂偶联在外源性的载体蛋白(例如ova，bsa，klh)上，利用载体蛋白中的t细胞表位活化cd4阳性t细胞，从而诱导有效的体液免疫。然而研究表明，b细胞受体接受抗原刺激后即可产生第一活化信号，而t细胞接受抗原刺激后增殖到一定数量需要若干天，如果抗原致敏的b细胞没有获得来自活化cd4阳性t细胞的第二刺激信号，就会发生凋亡，从而无法分化为产生igg抗体的浆细胞。因此，如果能够在b细胞表位致敏b细胞之前，以载体蛋白诱导大量cd4
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，使载体蛋白先快速释放，诱导cd4阳性t细胞活化，然后载体蛋白-b细胞表位偶联物缓慢释放，从而增强肽疫苗免疫效果。
2、本专利技术提供了一种基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，包括肽-载体蛋白、dna水凝胶和游离载体蛋白；
3、所述肽-载体蛋白通过杂交方式负载在dna水凝胶中或者包裹在dna水凝胶中；
4、所述dna水凝胶内部包裹游离载体蛋白；
5、所述dna水凝胶是由y型支架和linker dna自组装而成。
6、优选的，所述y型支架由核苷酸序列seq id no:1～seq id no:3所示的dna链组装得到；
7、所述linker dna由核苷酸序列seq id no:4～seq id no:5所示的dna链组装得到。
8、优选的，所述y型支架和linker dna的数量比为1:1；
9、所述dna水凝胶的浓度为200～300μm。
10、优选的，所述dna水凝胶的制备方法包括以下步骤：
11、将seq id no:1～seq id no:3所示的dna链或seq id no:4～seq id no:5所示的dna链在缓冲液中以等摩尔比混合，在95℃下处理15min，分别得到y型支架与linkerdna；
12、将所述y型支架与linker dna混合，得到dna水凝胶。
13、优选的，所述肽-载体蛋白中肽包括病原体蛋白抗原的b细胞表位多肽；
14、优选的，所述病原体蛋白抗原的b细胞表位多肽包括新型冠状病毒的s蛋白的rbd的s3和s4；
15、优选的，所述肽-载体蛋白中载体蛋白包括以下至少一种：bsa、ova和klh。
16、优选的，所述肽-载体蛋白的制备方法包括以下步骤：将载体蛋白与dbco-nhs震荡反应，除去未反应成分，向反应产物中加入肽进行冷冻反应；
17、所述bsa的浓度为100～102μm；
18、所述dbco-nhs的添加浓度为bsa摩尔浓度的28～32倍；
19、所述肽的添加浓度为bsa摩尔浓度的5～15倍。
20、优选的，所述肽-载体蛋白中通过god-linker-n3与dna水凝胶中的dna链杂交；
21、所述god-linker-n3的核苷酸序列如seq id no:6所示。
22、优选的，接有god-linker-n3的肽-载体蛋白的制备方法，在制备所述肽-载体蛋白时向反应产物中加入5～15倍摩尔浓度的肽的同时还加入god-linker-n3；
23、所述god-linker-n3的添加浓度为bsa摩尔浓度的1～3倍。
24、本专利技术提供了所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗的制备方法，包括以下步骤：包括包裹载体蛋白和肽-载体蛋白的dna佐剂水凝胶的肽疫苗的制备和包裹游离载体蛋白和杂交肽-载体蛋白的dna佐剂水凝胶的肽疫苗的制备；
25、所述包裹游离载体蛋白和肽-载体蛋白的dna佐剂水凝胶的肽疫苗的制备方法，将游离载体蛋白和肽-载体蛋白与linker dna混合，再与y型支架混合；
26、所述包裹游离载体蛋白和杂交肽-载体蛋白的dna佐剂水凝胶的肽疫苗的制备方法，将游离载体蛋白和接有god-linker-n3的肽-载体蛋白与linkerdna混合，再与y型支架混合。
27、本专利技术提供了所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗或所述制备方法得到的基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗在制备预防病原体感染的疫苗中的应用。
28、本专利技术提供了一种基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，包括肽-载体蛋白、dna水凝胶和游离载体蛋白；所述肽-载体蛋白通过杂交方式负载在dna水凝胶中或者包裹在dna水凝胶中；所述dna水凝胶内部包裹游离载体蛋白；所述dna水凝胶是由y型支架和linkerdna自组装而成。本专利技术提供的基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗利用dna水凝胶将游离载体蛋白和肽-载体蛋白进行包裹或将肽-载体蛋白通过杂交偶联，在免疫注射动物后，载体蛋白优先快速释放，诱导cd4阳性t细胞活化，然后肽-载体蛋白缓慢释放，从而达到b细胞致敏的同时，已有较多cd4+t细胞活化，进而有效活化b细胞，增强肽疫苗免疫效果。
29、进一步的，本专利技术提供的基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，具体限定dna水凝胶的浓度。本专利技术通过制备3种终浓度的dna水凝胶(250μm、500μm、1000μm)，分别包裹或杂交荧光蛋白进行小动物成像实验，证明250μm浓度下dna水凝胶动力学差异释放的优越性。
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1.一种基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，包括肽-载体蛋白、DNA水凝胶和游离载体蛋白；
2.根据权利要求1所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述Y型支架由核苷酸序列SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3所示的DNA链组装得到；
3.根据权利要求1所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述Y型支架和linker DNA的数量比为1:1；
4.根据权利要求1所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述DNA水凝胶的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述肽-载体蛋白中肽包括病原体蛋白抗原的B细胞表位多肽；
6.根据权利要求1所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述肽-载体蛋白的制备方法包括以下步骤：将载体蛋白与DBCO-NHS震荡反应，除去未反应成分，向反应产物中加入肽进行冷冻反应；
7.根据权利要求1或6所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述肽-载体蛋白中通过GOD-linker-N3与DNA水
8.根据权利要求7所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，接有GOD-linker-N3的肽-载体蛋白的制备方法，在制备所述肽-载体蛋白时向反应产物中加入5～15倍摩尔浓度的肽的同时还加入GOD-linker-N3；
9.权利要求1～8中任意一项所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括包裹载体蛋白和肽-载体蛋白的DNA佐剂水凝胶的肽疫苗的制备和包裹游离载体蛋白和杂交肽-载体蛋白的DNA佐剂水凝胶的肽疫苗的制备；
10.权利要求1～8中任意一项所述基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗或权利要求9所述制备方法得到的基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗在制备预防病原体感染的疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，包括肽-载体蛋白、dna水凝胶和游离载体蛋白；
2.根据权利要求1所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述y型支架由核苷酸序列seq id no:1～seq id no:3所示的dna链组装得到；
3.根据权利要求1所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述y型支架和linker dna的数量比为1:1；
4.根据权利要求1所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述dna水凝胶的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述肽-载体蛋白中肽包括病原体蛋白抗原的b细胞表位多肽；
6.根据权利要求1所述基于dna佐剂水凝胶的肽疫苗，其特征在于，所述肽-载体蛋白的制备方法包括以下步骤：将载体蛋白与dbco-nhs震荡反应，除去未反应成分，向反...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙乐乐，沈枫韵，王淇，张运龙，张亚玲，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：
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