一种提高卵母细胞冷冻耐受性的方法技术

本发明专利技术涉及卵母细胞冷冻技术领域，具体公开了一种提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，包括：将待冷冻的卵母细胞置于平衡液中进行平衡处理，然后置于玻璃化冷冻液中进行冷冻，并投入液氮冷冻保存；解冻时，将卵母细胞从液氮中取出，转移至解冻溶液中；平衡液、玻璃化冷冻液以及解冻液中均添加以聚乳酸‑羟基乙酸共聚物纳米颗粒为载体并负载白藜芦醇的PLGA‑RES复合纳米颗粒，且平衡液、玻璃化冷冻液以及解冻液中RES的浓度均为0.5μM。本发明专利技术可显著降低卵母细胞活性氧，提高卵母细胞谷胱甘肽及线粒体膜电位水平，提高解冻后存活率，有效提高卵母细胞冷冻耐受性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及卵母细胞冷冻，尤其涉及一种提高卵母细胞冷冻耐受性的方法。

技术介绍

1、卵母细胞独特的物理特性（体积大、含水量高）易造成冷冻过程大量冰晶的形成，影响存活率。且卵母细胞冷冻过程中渗透损伤可破坏卵母细胞氧化还原稳态，引发ros累积、早期细胞凋亡等异常生理状态。目前，常规体外培养卵母细胞冷冻耐受性差，解冻后存活率不稳定，受精后胚胎发育能力下降，严重降低了该技术的应用效率，亟需提高卵母细胞冷冻耐受能力。

2、近年来纳米材料以其特有的理化特性备受关注。plga（聚乳酸-羟基乙酸共聚物）是一种可降解的脂肪族聚酯，具有良好的生物相容性、安全性和可控的体内生物降解速率，已被美国食品药品监督管理局批准为药物递送的有效载体和组织工程支架。plga以靶向方式和/或持续释放递送多种治疗剂的能力已得到广泛认可。研究发现plga纳米颗粒生物毒性小，不影响小鼠植入前胚胎的体外发育，提示其可作为负载载体应用在配子及胚胎发育体系中。

3、白藜芦醇（resveratrol，res）是一种天然多酚，具有抗氧化、心脏保护、免疫调节、抗癌、降压等多种有益特性，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，PLGA-RES复合纳米颗粒中RES的质量分数为8.4%，且PLGA-RES复合纳米颗粒在平衡液、玻璃化冷冻液以及解冻液中的添加量均为13.6μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，所述待冷冻的卵母细胞为GV期卵母细胞或者MII期卵母细胞。

4.根据权利要求3所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，所述待冷冻的卵母细胞为MII期卵母细胞，所述MII期卵母细胞通过将卵丘卵母...

【技术特征摘要】

1.一种提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，plga-res复合纳米颗粒中res的质量分数为8.4%，且plga-res复合纳米颗粒在平衡液、玻璃化冷冻液以及解冻液中的添加量均为13.6μg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，所述待冷冻的卵母细胞为gv期卵母细胞或者mii期卵母细胞。

4.根据权利要求3所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，所述待冷冻的卵母细胞为mii期卵母细胞，所述mii期卵母细胞通过将卵丘卵母细胞复合体转移到含plga-res复合纳米颗粒的体外成熟（ivm）培养基培养后获得。

5.根据权利要求3所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，所述待冷冻的卵母细胞为gv期卵母细胞，在所述gv期卵母细胞经冷冻和解冻后，还包括将gv期卵母细胞转移到含plga-res复合纳米颗粒的体外成熟（ivm）培养基培养。

6.根据权利要求1所述的提高卵母细胞冷冻耐受性的方法，其特征在于，以体积分数计，所述平衡液为含7.5%乙二醇、7.5%二甲基亚砜的基础液，其中，基础液为含有20%胎牛血清的杜氏磷酸缓冲盐溶液（dpbs），在所述平衡液中进行平衡...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅祥伟，李俊，海桂萍，万鹏程，侯云鹏，朱一笑，刘昱成，周桂珍，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：