【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒。
技术介绍
1、新型冠状病毒(covid-19)有四种主要的结构蛋白：棘突蛋白(spike protein，s蛋白)，核衣壳蛋白(nucleocapsid，n蛋白)，膜蛋白(membrane protein，m蛋白)，包膜蛋白(envelope protein，e蛋白)。棘突蛋白s蛋白有两个亚基：s1和s2，其中受体结合结构域(rbd)位于s1亚基上。rbd是棘突蛋白抗原的独特区域，可与人类的ace2受体结合，covid-19通过rbd与ace-2受体的结合，介导病毒进入细胞内部繁殖，从而出现症状，导致发病。
2、新冠病毒中和抗体可以特异性识别并且结合新冠病毒的rbd位点，在血液中和病毒结合，抢先阻断病毒与人ace-2结合，从而防止病毒进入细胞繁殖产生症状。对新冠病毒中和抗体检测可以为疫苗研发和效果评价提供有力支撑，可以指导检测人群是否需要加强针、加强接种等。当然，新冠病毒中和抗体检测结果仅供临床参考，不能单独作为诊断或排除病例的依据。
3、目前，常规的抗体检测(igg、igm)方法不能用于新冠疫苗接种人群中和抗体的检测问题。对新冠中和抗体的检测的主要可分为胶体金、免疫荧光法(层析法，lfa)，酶联免疫吸附检测(elisa)和化学发光法。其中胶体金法和免疫荧光法的灵敏度和精密度较差，准确度低，容易受到其他杂光的干扰。elisa和化学发光法具有更高的检测灵敏性和特异性，但操作复杂、耗时长、需要大型设备和专业操作人员，在灵活
4、cn112051400a公开了一种poct检测中的胶体金技术，其试纸条上包被鼠抗人igg抗体的检测线和羊抗鼠igg抗体的控制线，结合垫上喷涂标记有鼠igg、新冠病毒rbd或ntd中和位点蛋白的胶体金，通过与胶体金免疫分析读数仪结合，进行待测物含量的检测。此测试方法准确性及灵敏度较差，精密度较难控制。
5、cn112485436a公开了一种poct检测中的胶体金技术，其试纸条上包被血管紧张素转化酶2(ace2)的检测线和鼠抗鸡igg抗体的控制线，胶体金垫上喷涂标记有胶体金标记的重组新型冠状病毒rbd蛋白，通过肉眼观察检测线显色情况判断是否含有待测物。此该方法只能进行定性检测，其只能得到阴、阳性的结果，最多只能根据显色线的强弱进一步判断强阳，中阳，弱阳，不能进行定量检测，准确区分中和抗体浓度高低，不能为临床提供较多的检测信息。
6、因此，在poct检测新型冠状病毒(covid-19)中和抗体领域，仍需开发一种检验灵敏度高、重现性好、稳定性强、操作便捷的新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种检验灵敏度高、重现性好、稳定性强、操作便捷的新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒。
2、为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
3、一种新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒，包括检测缓冲液、采样管及检测试剂条，所述检测试剂条包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述卡壳上设有加样孔和检测窗，加样孔显示为样品垫，检测窗显示为硝酸纤维素膜；所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及载膜底板，所述载膜底板为最底层，载膜底板上由依次粘接有吸水垫、硝酸纤维素膜、荧光结合垫、样品垫；其特征在于所述硝酸纤维素膜上分别包被有血管紧张素转化酶2(ace2)构成的检测线及dnp抗体或者dnp-bsa复合物构成的质控线，所述荧光结合垫上包含检测线荧光标记物和质控线荧光标记物，检测线荧光标记物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(rbd)，质控线荧光标记物为荧光微球标记的dnp-bsa复合物或者dnp抗体。
4、进一步的，所述试剂盒中检测缓冲液包括10mm-100mm的tris、硼酸盐或磷酸盐溶液，浓度为0.1％-1％的表面活性剂,100mm-200mm的盐化合物，浓度为1％-2％的酪蛋白，浓度为0.01％-0.05％的防腐剂，ph为7.5-8.5；所述表面活性剂为吐温20或曲拉通-100，所述防腐剂为proclin300。
5、进一步的，所述检测线上血管紧张素转化酶2(ace2)在包被液中浓度为0.5-1.5mg/ml，所述质控线为dnp-bsa复合物或dnp抗体，其在包被液中浓度为0.5-1mg/ml，包被液中除相关蛋白抗体外还包括50mm-100mm磷酸盐缓冲液，浓度为1％-2％的海藻糖，浓度为0.1％-1％的bsa；上述检测及质控蛋白皆以0.5-1.2μl/cm包被于硝酸纤维素膜上，于烘房45℃过夜烘干。
6、进一步的，所述荧光结合垫的材质为玻璃纤维，采用手工处理或者机器处理，每张玻璃纤维垫喷涂50ml结合垫处理液，处理后放置到网架上，放入37℃烘箱中，12～24h烘干；使用标记物稀释液将荧光微球标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(rbd)稀释100倍，荧光微球标记的dnp多克隆抗体稀释300倍，以喷量为2μl/cm，利用喷点仪器在荧光结合垫上喷涂，放置烘房，在37℃烘干18小时。
7、进一步的，所述荧光微球为羧基荧光微球。
8、进一步的，所述结合垫预处理液含有缓冲液、糖类、表面活性剂；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，浓度为10mm-50mm；所述糖类为海藻糖、蔗糖浓度为0.1％-10％；所述表面活性剂为吐温20，浓度为0.1％-1％。
9、进一步的，所述标记物稀释液含有缓冲液、保护蛋白、糖类、表面活性剂、防腐剂；所述缓冲液为tris缓冲液，浓度为10mm-50mm；所述保护蛋白为酪蛋白，浓度0.1％-3％；所述糖类为海藻糖、蔗糖，浓度为0.1％-10％；所述表面活性剂为s9，浓度为0.5％-1.5％；所述防腐剂为proclin300，浓度为0.01％-0.1％。
10、进一步的，所述新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒还包括二维码，所述二维码存储有产品的项目名称、批号信息。
11、本专利技术的新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒的检测原理如下：
12、采用竞争法原理，结合垫上分别有荧光标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(rbd)和荧光标记的dnp多克隆抗体作为显色标记物，在硝酸纤维素膜上的检测线(t)处包被有血管紧张素转化酶2(ace2)，质控线(c)处包被有dnp-bsa复合物。当样本中存在中和抗体将与荧光标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(rbd)结合，并阻止rbd与ace2之间的蛋白质相互作用，检测线(t)处不存在信号反应。当样本中不存在中和抗体，荧光标记的新型冠状病毒棘突蛋白(rbd)，被ace2捕获，检测线(t)处显色。荧光标记的dnp多克隆抗体扩散到质控线(c)区域被dnp-bsa复合物捕获形成质控区信号带。随着待检样本中和抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，包括检测缓冲液、采样管及检测试剂条，所述检测试剂条包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述卡壳上设有加样孔和检测窗，加样孔显示为样品垫，检测窗显示为硝酸纤维素膜；所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及载膜底板，所述载膜底板为最底层，载膜底板上由依次粘接有吸水垫、硝酸纤维素膜、荧光结合垫、样品垫；其特征在于所述硝酸纤维素膜上分别包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)构成的检测线及DNP抗体或者DNP-BSA复合物构成的质控线，所述荧光结合垫上包含检测线荧光标记物和质控线荧光标记物，检测线荧光标记物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)，质控线荧光标记物为荧光微球标记的DNP-BSA复合物或者DNP抗体。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中检测缓冲液包括10mM-100mM的Tris、硼酸盐或磷酸盐溶液，浓度为0.1％-1％的表面活性剂,100mM-200mM的盐化合物，浓度为1％-2％的酪蛋白，浓度为0.01％-0.
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上血管紧张素转化酶2(ACE2)在包被液中浓度为0.5-1.5mg/mL，所述质控线为DNP-BSA复合物或DNP抗体，其在包被液中浓度为0.5-1mg/mL，包被液中除相关蛋白抗体外还包括50mM-100mM磷酸盐缓冲液，浓度为1％-2％的海藻糖，浓度为0.1％-1％的BSA；上述检测及质控蛋白皆以0.5-1.2μL/cm包被于硝酸纤维素膜上，于烘房45℃过夜烘干。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述荧光结合垫的材质为玻璃纤维，采用手工处理或者机器处理，每张玻璃纤维垫喷涂50ml结合垫处理液，处理后放置到网架上，放入37℃烘箱中，12～24h烘干；使用标记物稀释液将荧光微球标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)稀释100倍，荧光微球标记的DNP多克隆抗体稀释300倍，以喷量为2μl/cm，利用喷点仪器在荧光结合垫上喷涂，放置烘房，在37℃烘干18小时。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为羧基荧光微球。
6.根据权利要求4所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒中荧光结合垫，其特征在于，所述结合垫预处理液含有缓冲液、糖类、表面活性剂；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，浓度为10mM-50mM；所述糖类为海藻糖、蔗糖浓度为0.1％-10％；所述表面活性剂为吐温20，浓度为0.1％-1％。
7.根据权利要求4所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述标记物稀释液含有缓冲液、保护蛋白、糖类、表面活性剂、防腐剂；所述缓冲液为Tris缓冲液，浓度为10mM-50mM；所述保护蛋白为酪蛋白，浓度0.1％-3％；所述糖类为海藻糖、蔗糖，浓度为0.1％-10％；所述表面活性剂为S9，浓度为0.5％-1.5％；所述防腐剂为proclin300，浓度为0.01％-0.1％。
8.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒还包括二维码，所述二维码存储有产品的项目名称、批号信息。
...【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒，包括检测缓冲液、采样管及检测试剂条，所述检测试剂条包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述卡壳上设有加样孔和检测窗，加样孔显示为样品垫，检测窗显示为硝酸纤维素膜；所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及载膜底板，所述载膜底板为最底层，载膜底板上由依次粘接有吸水垫、硝酸纤维素膜、荧光结合垫、样品垫；其特征在于所述硝酸纤维素膜上分别包被有血管紧张素转化酶2(ace2)构成的检测线及dnp抗体或者dnp-bsa复合物构成的质控线，所述荧光结合垫上包含检测线荧光标记物和质控线荧光标记物，检测线荧光标记物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(rbd)，质控线荧光标记物为荧光微球标记的dnp-bsa复合物或者dnp抗体。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中检测缓冲液包括10mm-100mm的tris、硼酸盐或磷酸盐溶液，浓度为0.1％-1％的表面活性剂,100mm-200mm的盐化合物，浓度为1％-2％的酪蛋白，浓度为0.01％-0.05％的防腐剂，ph为7.5-8.5；所述表面活性剂为吐温20或曲拉通-100，所述防腐剂为proclin300。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(covid-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上血管紧张素转化酶2(ace2)在包被液中浓度为0.5-1.5mg/ml，所述质控线为dnp-bsa复合物或dnp抗体，其在包被液中浓度为0.5-1mg/ml，包被液中除相关蛋白抗体外还包括50mm-100mm磷酸盐缓冲液，浓度为1％-2％的海藻糖，浓度为0.1％-1％的bsa；上述检测及质控蛋白皆以0.5-1.2μl/cm包被于硝酸纤维素...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐文涛，徐东鑫，何燕燕，龚庆，伍超萍，刘文春，
申请(专利权)人：中翰盛泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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