【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、肉毒杆菌神经毒素(bont)是由肉毒杆菌(clostridium botulinum)和相关菌种产生的神经毒性蛋白。a型bont(bonta)及其衍生物是一种广泛用于治疗神经肌肉疾病的美容剂和治疗剂。bonta由100kda的重链(hc)和50kda的轻链(lc)组成。bonta-hc与运动神经末梢上的sv2受体结合，从而介导细胞对bonta的吸收。bonta-lc特异性地切割25kd的突触体神经相关蛋白(snap-25)，该蛋白负责细胞囊泡对接和融合。
2、根据复合辅助蛋白和配制辅料的不同，市售bonta产品的肌内注射治疗指数在5至15之间，其定义为半数最大致死剂量(imld50)与半数最大有效剂量(imed50)之比。随着bonta的医疗适应症的不断扩大，出现严重和长期不良反应的情况也越来越多，这凸显了提高bonta的治疗指数的重要性。先前的研究表明，lc结构域的工程化可将bonta的治疗指数提高多达2倍。
技术实现思路
1、本公开提供了结合肉毒杆菌神经毒素(bont)和细胞穿透肽(cpp)的融合蛋白，其适用于肌内注射。与单独的bont蛋白或商业产品肉毒杆菌毒素a(onabotulinumtoxina)相比，这些cpp-bont融合蛋白具有卓越的细胞吸收能力、强大的治疗效果和显著提高的治疗指数。此外，还提供了可从昆虫细胞中制备的未被切割形成双链多肽但仍保留较强酶活性的bont融合蛋白。
2、在一个实施方案中，本公开提供了一种向哺乳动物递送
3、cpp的非限制性示例包括锌指肽(zfp，ekpykcpecgksfsasaalvahqrthtg，seq idno:1)、tat(grkkrrqrrrpq，seq id no:18)和pep-1(n-乙酰基-ketwwetwwtewsqpkkkrkv-oh，seq id no:19)，以及表3中提供的其他cpp。
4、cpp可与bont的轻链的n端、重链的c端或两者融合，但不限于此。
5、在某些实施方案中，组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％、或95％、或全部bont为单链，即轻链和重链位于同一条肽链上。
6、在某些实施方案中，组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％、或95％、或全部bont由昆虫细胞表达。昆虫细胞可为草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)细胞或粉纹夜蛾(trichoplusia ni)细胞，但不限于此。
7、肌内注射可注入哺乳动物体内的任何肌肉，例如皮肤下或眼睛粘膜下，或在耳、鼻、口、唇、尿道口、肛门或舌头处。
8、在某些实施方案中，哺乳动物需要治疗面部皱纹、肌张力障碍、痉挛、面肌痉挛、多汗症或唾液分泌过多症。在某些实施方案中，哺乳动物需要进行肌肉塑形。
9、还提供了一种药物制剂，其包含药学上可接受的赋形剂和多肽，该多肽包含与细胞穿透肽(cpp)融合的bont，其中bont包含轻链和重链。
10、在某些实施方案中，药物制剂为冻干制剂。在某些实施方案中，药物制剂为可注射溶液。在某些实施方案中，药物制剂被配制用于肌内注射。
11、cpp的非限制性示例包括锌指肽(zfp，ekpykcpecgksfsasaalvahqrthtg，seq idno:1)、tat(grkkrrqrrrpq，seq id no:18)和pep-1(n-乙酰基-ketwwetwwtewsqpkkkrkv-oh，seq id no:19)，以及表3中提供的其他cpp。
12、cpp可与bont的轻链的n端、重链的c端或两者融合，但不限于此。
13、在某些实施方案中，组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％、或95％、或全部bont为单链，即轻链和重链位于同一条肽链上。
14、在某些实施方案中，组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％、或95％、或全部bont由昆虫细胞表达。昆虫细胞可为草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)细胞或粉纹夜蛾(trichoplusia ni)细胞，但不限于此。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种向哺乳动物递送肉毒杆菌毒素(BoNT)的方法，其包括肌内注射一种包含多肽的药物组合物，所述多肽包含与细胞穿透肽(CPP)融合的BoNT，其中所述BoNT包含轻链和重链。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述CPP选自由锌指肽(ZFP，EKPYKCPECGKSFSASAALVAHQRTHTG，SEQ ID NO:1)、TAT(GRKKRRQRRRPQ，SEQ ID NO:18)、Pep-1(N-乙酰基-KETWWETWWTEWSQPKKKRKV-OH，SEQ ID NO:19)，以及表3中提供的其他CPP组成的组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述CPP与所述BoNT的所述轻链的N端融合。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述CPP与所述BoNT的所述重链的C端融合。
5.根据权利要求1所述的方法，其包含至少两个CPP，其中所述CPP中的至少一个与所述轻链的N端融合，所述CPP中的另一个与所述重链的C端融合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、8
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％或95％的所述BoNT由昆虫细胞表达。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述昆虫细胞为草地贪夜蛾细胞或粉纹夜蛾细胞。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述肌内注射是在皮肤下或眼睛粘膜下，或在耳、鼻、口、唇、尿道口、肛门或舌头处。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物需要治疗面部皱纹、肌张力障碍、痉挛、面肌痉挛、多汗症或唾液分泌过多症。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物需要进行肌肉塑形。
12.一种药物制剂，其包含药学上可接受的赋形剂和多肽，所述多肽包含与细胞穿透肽(CPP)融合的BoNT，其中所述BoNT包含轻链和重链。
13.根据权利要求12所述的药物制剂，其为冻干制剂。
14.根据权利要求12所述的药物制剂，其为可注射溶液。
15.根据权利要求14所述的药物制剂，其被配制用于肌内注射。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的药物制剂，其中所述CPP选自由锌指肽(ZFP，EKPYKCPECGKSFSASAALVAHQRTHTG，SEQ ID NO:1)、TAT(GRKKRRQRRRPQ，SEQ ID NO:18)、Pep-1(N-乙酰基-KETWWETWWTEWSQPKKKRKV-OH，SEQ ID NO:19)，以及表3中提供的其他CPP组成的组。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的药物制剂，其中所述CPP与所述BoNT的所述轻链的N端融合。
18.根据权利要求12至16中任一项所述的药物制剂，其中所述CPP与所述BoNT的所述重链的C端融合。
19.根据权利要求12至16中任一项所述的药物制剂，其包含至少两个CPP，其中所述CPP中的至少一个与所述轻链的N端融合，所述CPP中的另一个与所述重链的C端融合。
20.根据权利要求12至19中任一项所述的药物制剂，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％或95％的所述BoNT包含单个多肽链上的所述轻链和所述重链。
21.根据权利要求12至20中任一项所述的药物制剂，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％或95％的所述BoNT由昆虫细胞表达。
22.根据权利要求21所述的药物制剂，其中所述昆虫细胞为草地贪夜蛾细胞或粉纹夜蛾细胞。
23.根据权利要求1至11中任一项所述的方法或根据权利要求12至22中任一项所述的药物制剂，其中所述BoNT选自BoNT A、B、C、D、E、F或G或与其具有至少90％序列同一性的变体。
24.根据权利要求23所述的药物制剂，其中所述BoNT选自亚型BoNT A1至A10、B1至B8、E1至E9，以及F1至F7。
25.根据权利要求23所述的药物制剂，其中所述BoNT为BoNT A。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种向哺乳动物递送肉毒杆菌毒素(bont)的方法，其包括肌内注射一种包含多肽的药物组合物，所述多肽包含与细胞穿透肽(cpp)融合的bont，其中所述bont包含轻链和重链。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述cpp选自由锌指肽(zfp，ekpykcpecgksfsasaalvahqrthtg，seq id no:1)、tat(grkkrrqrrrpq，seq id no:18)、pep-1(n-乙酰基-ketwwetwwtewsqpkkkrkv-oh，seq id no:19)，以及表3中提供的其他cpp组成的组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述cpp与所述bont的所述轻链的n端融合。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述cpp与所述bont的所述重链的c端融合。
5.根据权利要求1所述的方法，其包含至少两个cpp，其中所述cpp中的至少一个与所述轻链的n端融合，所述cpp中的另一个与所述重链的c端融合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％或95％的所述bont包含单个多肽链上的所述轻链和所述重链。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述组合物中至少50％、优选至少75％、80％、85％、90％或95％的所述bont由昆虫细胞表达。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述昆虫细胞为草地贪夜蛾细胞或粉纹夜蛾细胞。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述肌内注射是在皮肤下或眼睛粘膜下，或在耳、鼻、口、唇、尿道口、肛门或舌头处。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物需要治疗面部皱纹、肌张力障碍、痉挛、面肌痉挛、多汗症或唾液分泌过多症。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物需要进行肌肉塑形。
12.一种药物制剂，其包含药学上可接受的赋形剂和多肽，所述多肽包含与细胞穿透肽(cpp)融合的bont，其中所述bont包含轻链和重链。
13.根据...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。