【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物胚胎学，更具体的说是涉及一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法。
技术介绍
1、石蜡切片法，用石蜡作为包埋剂，将植物组织包埋在石蜡中，用切片机切片，可以把材料切成均匀、极薄的蜡片，切片的厚度易控(8～15μm)，单个蜡片可以连续形成蜡带，制成连续切片，有较好清晰度，玻片标本可长期保存。迄今为止，石蜡切片法仍然是观察植物组织结构的重要且常用的一种方法。
2、石蜡切片制备方法，其基本步骤包括样品的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、脱蜡、染色和封片等一系列操作步骤，其中的每一个步骤对所制切片的质量均有十分重要的影响，需要针对不同植物植株组织结构及同一植物不同组织部位进行摸索。
3、大麦、小麦等谷物的花序为复穗状，其子房非常幼嫩、微小，若要对其开花期胚囊的形态结构进行观察，普通的切片方法并不能达到目的。
4、综上，提供一种适合谷类作物子房的石蜡切片制作方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法。谷物子房十分脆弱，难于对其进行组织固定、染色和组织包埋，且对于切片薄度也有要求，本专利技术经过不断摸索尝试，克服了上述技术难点。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，包括如下步骤：
4、(1)取样：获取子房样品；
5、(2)固定：将子房在faa固定液中固定24～
6、(3)染色：将固定后子房依次经酒精溶液和苏木素染液处理进行染色，之后置于自来水中进行返蓝处理，得到染色子房；
7、子房本身颜色区分不明显，在显微镜下其折光率无区别，限制观察。对其进行部分染色可以改变折光率，使被染色的部位更突出，便于观察。苏木素属于碱性天然染料，可使细胞核中的染色质以及细胞质中的核糖体染色。
8、(4)脱水：逐渐提高酒精溶液体积浓度对染色子房进行脱水处理，得脱水子房；
9、(5)透明：将脱水子房依次用氯仿/二甲苯、酒精溶液处理，得透明子房；
10、(6)浸蜡：逐渐增加石蜡体积浓度(这里指向透明处理后的子房溶液中逐渐增加石蜡碎屑，提高石蜡在溶液中的浓度)对透明子房进行浸蜡处理，得浸蜡材料；
11、(7)包埋：将浸蜡材料倒入包埋盒中冷却后4℃下保存，得包埋后子房；
12、(8)将包埋后子房依次进行切片、展片、烤片处理，得子房切片；
13、(9)脱蜡：使用二甲苯对子房切片进行脱蜡处理，处理时间30min，晾干后得脱蜡切片；
14、(10)封片：将脱蜡切片用中性树胶进行封片，制成永久切片。
15、优选的，所述faa固定液由乙酸、甲醛、体积浓度为50％的酒精溶液组成，且三者体积比例为1:1:18。
16、谷类作物子房十分幼嫩，且含水量较高，为了保持植物组织原本的状态，硬化组织，防止细胞的形状结构在死亡后发生变化，需要将植物组织材料放在固定液中，快速杀死组织细胞。固定液使组织适当变硬且不过于松脆，且使材料可以长期保存，保持原有的细微结构。为了防止高浓度的酒精使植物组织材料过硬而影响切片，faa固定液选择使用低浓度50％的酒精溶液与冰醋酸、甲醛配制。
17、优选的，所述子房与faa固定液的体积比为1:(20-50)。
18、优选的，所述步骤(3)的具体操作为：
19、(31)将固定后子房转入体积浓度为50％的酒精溶液中，处理3h，子房与酒精溶液的体积比为1:20～50；
20、(32)之后转入苏木素染液处理1.5d，取出后放入蒸馏水中浸洗，每10个子房使用2ml的苏木素染液；
21、(33)浸洗6小时后置于自来水中进行返蓝处理，处理时间大于3h。
22、优选的，所述步骤(4)的具体操作为：
23、将染色子房依次放入体积浓度为30％的酒精溶液过夜→体积浓度为50％的酒精溶液2.5h→体积浓度为70％的酒精溶液1.5h→体积浓度为85％的酒精溶液2h→体积浓度为90％的酒精溶液过夜→体积浓度为95％的酒精溶液1h→体积浓度为100％的酒精溶液1h→体积浓度为100％的酒精溶液1h，得脱水子房；
24、子房与酒精溶液的体积比为1:20～50。
25、优选的，所述步骤(5)的具体操作为：
26、(51)将盘尼西林瓶中的浓度100％的酒精溶液吸出溶液总量的1/5，再加入与吸出溶液相等体积的氯仿/二甲苯处理1.5h；
27、(52)吸出溶液总量的2/5溶液，再加入与吸出溶液相等体积的氯仿/二甲苯处理2h；
28、(53)吸出溶液总量的3/5溶液，再加入与吸出溶液相等体积的氯仿/二甲苯，过夜；
29、(54)隔天吸出溶液总量的4/5溶液，再加入与吸出溶液相等体积的氯仿/二甲苯处理2h；
30、(55)吸出全部溶液，再加入与吸出溶液相等体积的氯仿/二甲苯处理2h；
31、(56)将材料取出放入新盘尼西林瓶中加入与子房体积比为1：20～50的氯仿/二甲苯中处理1.5h，得透明子房。
32、优选的，所述步骤(6)的具体操作为：
33、(61)向装有氯仿/二甲苯浸泡的子房的盘尼西林瓶中加入少许碎蜡，不盖瓶盖置于36℃烘箱中1h；
34、(62)重复(61)所述步骤；
35、(63)将材料移入装有氯仿/二甲苯：石蜡体积比为1:1的玻璃瓶中，置于56℃烘箱中3h；
36、(64)将材料转入氯仿/二甲苯：石蜡体积比为3:7的溶液中，置于56℃烘箱中2h；
37、(65)将材料转入石蜡溶液中，置于56℃烘箱中每隔1h换一次纯石蜡，换两次后，再处理1h，得浸蜡材料。
38、优选的，所述步骤(8)的具体操作如下：将包埋后子房使用切片机制成8-10μm的切片，之后置于37℃的水中进行展片，然后在37℃下进行烤片。
39、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：
40、(1)使用苏木素染液进行染色，其上色时间短，且无需等待其成熟。
41、(2)脱水时依次增加酒精溶液浓度，不会使材料组织硬化。
42、(3)透明时逐渐增加氯仿/二甲苯的浓度，为了脱水彻底又可使材料减少收缩。
43、(4)浸蜡时逐渐增加石蜡的浓度，使石蜡慢慢渗入子房内，将透明剂替代出来。
44、(5)切片组织完整、各部位清晰显示，增强切片观察效果。
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1.一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述FAA固定液由乙酸、甲醛、体积浓度为50％的酒精溶液组成，且三者体积比例为1:1:18。
3.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述子房与FAA固定液的体积比为1:(20-50)。
4.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体操作为：
5.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(4)的具体操作为：
6.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(5)的具体操作为：
7.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(6)的具体操作为：
8.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(8)的具体操作如下：将包埋后子房使用切片机制成8-10μm的切片，之后置于
...【技术特征摘要】
1.一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述faa固定液由乙酸、甲醛、体积浓度为50％的酒精溶液组成，且三者体积比例为1:1:18。
3.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述子房与faa固定液的体积比为1:(20-50)。
4.如权利要求1所述的一种谷类作物子房石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体操作为：
5.如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁博，张丹，李滋阳，王欣慧，王建强，谢晓东，邱丽娜，曹高燚，李明，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：
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