【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，更具体的说是涉及一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法。
技术介绍
1、鸡球虫病(avian coccidiosis)是由艾美耳属球虫(eimeria)寄生在鸡肠道所引起的家禽传染性疾病，鸡球虫属于顶复门、孢子虫纲、真球虫目、艾美耳科、艾美耳属。引起鸡球虫病的艾美耳球虫有7种，以肠道损伤、下痢或血便为特征。鸡艾美耳球虫具有严格的宿主特异性，不同种的鸡球虫寄生部位和致病力存在较大差异，其中柔嫩艾美耳球虫(e.tenella)致病力强且分布广泛，对养禽业危害最严重。
2、基因编辑技术是解析鸡球虫抗球虫药物作用靶点和毒力基因之间关系，研究基因缺失疫苗的关键技术之一。在球虫基因编辑过程中，需要将外源基因经电转染转入球虫子孢子，但电转势必会对子孢子细胞膜造成损伤从而影响虫体正常入侵及发育。转染后的子孢子在体内发育至卵囊，进行高效扩繁是子孢子转染体系所需要解决的技术瓶颈。
3、扩繁子孢子常见的方式，一种是子孢子经口接种，但这种接种方式胃酸会对子孢子造成损伤，尽管可以使用nahco3改善胃部酸性环境，但最终仅产生少量卵囊；另一种方式经泄殖腔接种，但经泄殖腔接种由外排造成的损耗会直接影响接种效率。也有报道经十二指肠接种子孢子进行柔嫩艾美耳球虫扩繁，但其繁殖率和卵囊产量仍偏低。
4、因此，如何提高柔嫩艾美耳球虫子孢子的接种产量和接种效率是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种柔嫩艾美耳球虫子孢子
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，具体包括以下步骤：
4、(1)禁食
5、术前对鸡只进行禁食；
6、(2)麻醉、剃毛
7、先对鸡只进行第一次肌肉注射麻醉，待鸡只反应迟钝时进行第二次肌肉注射麻醉，并将鸡只右侧肋骨后下缘至耻骨处羽毛剃干净；
8、(3)保定、消毒
9、将鸡只仰卧保定，术部选择鸡只右侧肋骨后下缘至耻骨处，先使用医用酒精脱脂，再使用碘伏溶液消毒，最后使用医用酒精脱碘，均以手术切口为中心向四周涂擦；
10、(4)切开皮肤
11、使用无菌布覆盖鸡只，创巾钳固定，于鸡只右侧肋骨后下缘至耻骨处纵向切开腹部皮肤；
12、(5)挑取盲肠
13、暴露肌肉，钝性分离腹壁肌肉，提起腹膜，剪一小口，暴露腹腔，挑取盲肠；
14、(6)注射子孢子
15、将柔嫩艾美耳球虫子孢子悬液缓慢注入盲肠体；
16、(7)术部缝合
17、腹壁肌肉采用单纯连续缝合法进行缝合，腹部皮肤采用结节缝合法进行缝合，手术完成；
18、(8)术后护理
19、术后喂食喂水，查看鸡只状态，消毒术部。
20、进一步，上述步骤(1)中，术前12h对鸡只进行禁食。
21、进一步，上述步骤(2)中，第一次肌肉注射麻醉采用速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.25ml/kg；第二次肌肉注射麻醉采用速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.1ml/kg；速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂由速眠新ⅱ与氯胺酮以1:1的体积比混合制得。
22、进一步，上述步骤(3)中，将鸡只仰卧保定在手术床上；医用酒精的体积分数为75％。
23、进一步，上述步骤(4)中，执笔式持手术刀于鸡只右侧肋骨后下缘至耻骨处纵向切开腹部皮肤2-3cm。
24、进一步，上述步骤(5)中，使用止血钳或手术刀柄钝性分离腹壁肌肉；使用镊子提起腹膜；使用剪刀剪一小口；使用弯头止血钳挑取盲肠。
25、进一步，上述步骤(6)中，柔嫩艾美耳球虫子孢子的浓度为80000个/ml，注射剂量为0.5ml/鸡。
26、进一步，上述步骤(8)中，术后4h喂食喂水；每天查看鸡只状态至少一次；术后五天内每天用碘伏消毒术部两次。
27、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
28、1、本专利技术探索了一种新的柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，将柔嫩艾美耳球虫子孢子直接接种至其靶器官，避免经口接种胃酸和胰酶消化液对柔嫩艾美耳球虫子孢子活力的影响以及经泄殖腔接种产生的外排造成的损耗。本专利技术较泄殖腔接种柔嫩艾美耳球虫子孢子产量提升了2.16倍，较小肠中段注射柔嫩艾美耳球虫子孢子产量提升了4.8倍，且潜隐期和排卵高峰较十二指肠注射子孢子均提前了11h，应用本专利技术可最大限度提升柔嫩艾美耳球虫子孢子接种的卵囊产量并缩短卵囊繁殖时间，为获得基因编辑虫株提供了技术支持。
29、2、本专利技术将分离纯化后的柔嫩艾美耳球虫子孢子经开腹手术后精准注射于盲肠内，注射接种感染成功率达100％，球虫卵囊产量较传统泄殖腔和小肠注射接种产量大幅提升。
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1.一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(1)中，术前12h对鸡只进行禁食。
3.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第一次肌肉注射麻醉采用速眠新Ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.25mL/kg；所述第二次肌肉注射麻醉采用速眠新Ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.1mL/kg；所述速眠新Ⅱ复合氯胺酮麻醉剂由速眠新Ⅱ与氯胺酮以1:1的体积比混合制得。
4.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(3)中，将鸡只仰卧保定在手术床上；所述医用酒精的体积分数为75％。
5.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(4)中，执笔式持手术刀于鸡只右侧肋骨后下缘至耻骨处纵向切开腹部皮肤2-3cm。
6.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(5)中，使用止血钳或手术刀柄
7.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(6)中，所述柔嫩艾美耳球虫子孢子的浓度为80000个/mL，注射剂量为0.5mL/鸡。
8.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(8)中，术后4h喂食喂水；每天查看鸡只状态至少一次；术后五天内每天用碘伏消毒术部两次。
...【技术特征摘要】
1.一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(1)中，术前12h对鸡只进行禁食。
3.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第一次肌肉注射麻醉采用速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.25ml/kg；所述第二次肌肉注射麻醉采用速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂，用量为0.1ml/kg；所述速眠新ⅱ复合氯胺酮麻醉剂由速眠新ⅱ与氯胺酮以1:1的体积比混合制得。
4.根据权利要求1所述的一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的盲肠接种方法，其特征在于，步骤(3)中，将鸡只仰卧保定在手术床上；所述医用酒精的体积分数为75％。
5.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑明学，刘奎昊，王吉霞，韩小一，崔凯玲，董思辰，张学奇，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：
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