构建人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型的方法及用途技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，涉及基于同源重组基因编辑技术构建人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型的方法及用途。本发明专利技术利用构建的人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型完成了F213I小鼠胚胎成纤维干细胞的体外同源重组基因编辑修复实验，本发明专利技术还构建了GBA基因野生型、部分人源化型以及部分人源化基础上引入F213I突变的过表达载体，并将其转入敲除GBA基因的人293A细胞中使其表达葡萄糖脑苷酶(GCase)，结果显示部分人源化对GCase酶活性影响有限，而引入F213I能够显著降低GCase酶活性。本发明专利技术为基因编辑治疗F213I突变戈谢氏病提供了体外实验数据。有助于为戈谢氏病提供一种治疗费用低、疗程短以及具有其他副作用少的新的基因治疗方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及基于同源重组基因编辑技术构建人源化gba基因f213i突变戈谢氏病小鼠模型的方法及用途。本专利技术利用构建的人源化gba基因f213i突变戈谢氏病小鼠模型完成了f213i小鼠胚胎成纤维干细胞的体外同源重组基因编辑修复实验，为同源重组基因编辑技术治疗戈谢氏病提供证据支持。

技术介绍

1、现有技术公开了戈谢氏病(gaucher's disease，gd)是一种常染色体隐性溶酶体贮积病，是由于β-葡萄糖脑苷脂酶(β-glucocerebrosidase，gba)基因突变导致所编码的gba酶活性降低所致。gba的代谢底物葡萄糖神经酰胺(glccer)在溶酶体中积累形成典型的戈谢氏细胞并代谢生成具有神经系统、造血系统和骨骼毒性的代谢产物。临床实践显示，患者表现出肝脾肿大，生长迟缓，骨骼畸形以及以神经炎症为特征的中枢神经系统损伤表达。根据中枢神经系统损伤情况，目前临床上将其分为3类，即1型外周型、2型急性中枢神经型和3型亚急性中枢神经型。

2、研究报道了gba基因位于人类染色体1q21-22上，长7.2kb，由11个外显子和10本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.构建人源化GBA基因F213I突变戈谢氏病小鼠模型的方法，其特征在于，其包括，将C57BL/6小鼠中Gba基因的5-7外显子替换成的人类GBA基因5-7外显子，随后进行拼接位点测序以确保小鼠GBA基因人源化片段拼接正确，并采用PCR技术建立稳定的小鼠基因鉴定体系，进行石蜡包埋切片HE染色和PAS染色，确认F213I纯合小鼠死亡原因。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所构建的小鼠模型GbaF213I/+没有表现出明显的异常表型，GbaF213I/F213I小鼠在出生后24小时内死亡，有表皮脱水、皱缩表现。

3.基因编辑技术体外修复F213I小鼠细胞的方法...

【技术特征摘要】

1.构建人源化gba基因f213i突变戈谢氏病小鼠模型的方法，其特征在于，其包括，将c57bl/6小鼠中gba基因的5-7外显子替换成的人类gba基因5-7外显子，随后进行拼接位点测序以确保小鼠gba基因人源化片段拼接正确，并采用pcr技术建立稳定的小鼠基因鉴定体系，进行石蜡包埋切片he染色和pas染色，确认f213i纯合小鼠死亡原因。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所构建的小鼠模型gbaf213i/+没有表现出明显的异常表型，gbaf213i/f213i小鼠在出生后24小时内死亡，有表皮脱水、皱缩表现。

3.基因编辑技术体外修复f213i小鼠细胞的方法，其特征在于，其包括，将敲除质粒lenti-crispr-grna和修复质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：马端，张进，姜楠，郭珈妮，李娜，李雅军，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：