一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法技术

本发明专利技术公开了一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法。以野山参为试材，在液氮中充分研磨后，转移到离心管中。加－２０℃预冷的丙酮溶液，洗涤样品粉末３次，离心收集沉淀，在室温干燥２０ｍｉｎ，得到野山参蛋白粗提物。再将野山参蛋白粗提物溶解于裂解缓冲液中，进行超声细胞破碎，离心取上清，即可获得高质量的野山参蛋白溶液。本发明专利技术提取的野山参蛋白用于双向电泳的方法简单、快速，可获得重复性好，分辨率高的电泳图谱，有利于后续的质谱分析鉴定蛋白，为野山参的蛋白质组学研究提供了技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于一种蛋白质的提取方法，具体涉及一种适合于双向电泳的野山参蛋白 提取方法。
技术介绍
野山参自然生长在原始森林中，隶属于五加科人参属的草本植物。早在2000年 前，《神农本草经》中对野山参的药用价值就有了详细的记载，李时珍在《本草纲目》中称野 山参为神草。随着医学的发展，野山参所具有的神奇疗效越来越被人们所认识，在中医治疗 高血压病、冠状动脉硬化、心绞痛、糖尿病、癌症等重大疾病的处方中都少不了这位珍贵人 参，然而其药用机制却尚不明确。双向电泳技术是在蛋白水平研究基因表达产物的最有效 方法之一，有利于在分子水平上探索野山参的作用机制。同时蛋白质样品的制备是双向电 泳的关键步骤，直接影响到分离结果的有效性、可靠性及可重复性。2002年John Hon-Kei Lum等人将同属植物高丽参、西洋参采用裂解液(6mol/L尿 素、2mol/L硫脲、0. 02g/ml CHAPS,20mmol DTT)溶解样品并用冻融裂解法对蛋白进行提取， 随后利用17cm，线性pH3-10胶条对所提蛋白进行双向电泳分离，经灵敏度较高的银染后得 到高丽参、西洋参2-DE图谱中分别有382、212个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适合双向电泳的野山参蛋白质提取方法，其特征是具体步骤如下：（１）取新鲜野山参，在液氮中充分研磨后，称取液氮研磨后粉末０．１５ｇ，转移到离心管中；（２）加入－２０℃预冷的含有０．０７％（ｖ／ｖ）β－巯基乙醇的丙酮溶液１ｍｌ，混匀后于－１５℃－－２５℃静置１－２ｈ，２℃－８℃、８０００ｒｐｍ离心１５ｍｉｎ，弃上清，取沉淀；（３）重复步骤（２）３次，直至上清无色，室温干燥沉淀２０－３０ｍｉｎ，得到蛋白粗提物；（４）将野山参蛋白粗提物溶解于含有７ｍｏｌ／Ｌ尿素、２ｍｏｌ／Ｌ硫脲、０．０２ｇ／ｍｌ－ＣＨＡＰＳ、２０ｍｍｏｌ－ＤＴＴ、１ｍｍｏｌ／Ｌ－ＰＭＳＦ、１％（ｖ／ｖ）蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液中，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙立伟，麻锐，姜锐，冯凯，
申请(专利权)人：北华大学，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]