【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，具体而言，涉及一种半胱氨酸偶联的adc偶联位点分布及占有率的检测方法以及药物抗体比的计算方法。
技术介绍
1、抗体偶联药物(adc)是一种是将单克隆抗体的特异性识别和小分子细胞毒药物的杀伤活性相结合，提高肿瘤药物的靶向性、减少毒副作用。adc药物对靶点的准确识别性，极大地提高了药效并减少了毒副作用，备受医药研发领域人员的关注。adc药物的结构较为复杂，一般包括抗体，连接子和小分子药物，小分子药物的载量对于adc药物的活性和毒性都是至关重要的。
2、目前adc的偶联位点占有率的计算是抗体偶联药物分析的一大难点，传统的位点占有率计算基于偶联药物和没有偶联药物肽段的强度的百分比计算，其计算结果准确度差，很难准确进行定量。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供半胱氨酸偶联的adc偶联位点分布及占有率的检测方法以及药物抗体比的计算方法，以解决现有技术中adc偶联位点占有率检测准确性较低的问题。
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的第一个方面，提供了一种半胱氨酸偶联adc的偶联位点的占有率的检测方法，检测方法包括以下步骤：s1，将裸抗和adc分别处理成能够进行lc-ms分析的肽段混合物；s2，取等量的裸抗的肽段混合物和adc的肽段混合物分别进行lc-ms分析；s3，利用不含半胱氨酸的肽段的响应对lc-ms分析后的所有肽段的响应进行归一化处理，并获得归一化系数，基于归一化系数校正的含半胱氨酸的肽段的响应值，进而计算获得半胱氨酸偶联药物的
3、进一步地，s3包括：s31，利用不含半胱氨酸的肽段的响应计算lc-ms分析后的所有肽段的响应的归一化系数n；s32，以adc中同一含有半胱氨酸的肽段计，利用归一化系数n计算获得归一化处理后的裸抗和adc中含半胱氨酸的肽段的相对含量；s33，1.00减去adc中归一化处理后的含半胱氨酸的肽段的相对含量，从而获得半胱氨酸偶联药物的相应偶联位点的占有率。
4、进一步地，s31包括：将裸抗中不含半胱氨酸肽段的响应值记为x，将adc中相同序列不含半胱氨酸肽段的响应值记为y，利用x/y对同一不含半胱氨酸肽段的响应进行归一化处理；计算所有不含半胱氨酸肽段的响应的归一化处理的平均值，得到归一化系数n。
5、进一步地，裸抗中不含半胱氨酸肽段和adc中相同序列不含半胱氨酸肽段选自lc-ms分析后响应值最高的前n条序列的肽段，n为3-10之间的自然数。
6、进一步地，s32包括：将裸抗中含半胱氨酸肽段的响应值记为a，将adc中相同序列含半胱氨酸肽段的响应值记为b，利用(b/a)*n，得到归一化后的adc中含半胱氨酸肽段的含量。
7、进一步地，s1包括：对等量的裸抗和adc依次进行还原反应和烷基化反应，得到烷基化的裸抗和烷基化的adc；对烷基化的裸抗和烷基化的adc进行酶解，分别得到裸抗的肽段混合物和adc的肽段混合物。
8、进一步地，利用还原剂进行还原反应；还原剂包括三(2-羧乙基)膦、二硫苏糖醇及β-巯基乙醇中的任意一种或多种。
9、进一步地，采用烷基化试剂进行烷基化反应；烷基化试剂包括n-乙基马来酰亚胺、碘乙酰胺、甲基硫甲磺酸酯及碘乙酸中的任意一种或多种。
10、进一步地，利用蛋白酶进行酶解，蛋白酶包括内切蛋白酶arg-c、内切蛋白酶arg-n、内切蛋白酶lys-c、内切蛋白酶lys-n、内切蛋白酶asp-n、内切蛋白酶glu-c及胰蛋白酶中的任意一种或多种。
11、进一步地，在酶解前，对烷基化的裸抗和烷基化的adc进行过滤；过滤包括：利用超滤管离心过滤；超滤管的孔径大小为3-30kda。
12、为了实现上述目的，根据本专利技术的第二个方面，提供了一种半胱氨酸偶联adc的偶联位点分布的检测方法，检测方法包括：利用上述的半胱氨酸偶联adc的偶联位点的占有率的检测方法检测获得adc中所有偶联位点的占有率；具有各含半胱氨酸肽段的占有率即可知偶联位点在adc序列中所处的位置和比例，构成了adc偶联位点的分布。
13、为了实现上述目的，根据本专利技术的第三个方面，提供了一种半胱氨酸偶联adc的药物抗体比的计算方法，计算方法包括：利用上述的半胱氨酸偶联adc的偶联位点的占有率的检测方法检测获得adc中所有偶联位点的占有率；将adc中所有偶联位点的占有率进行加和计算，即得半胱氨酸偶联药物的药物抗体比。
14、应用本专利技术的技术方案，本申请通过平行处理裸抗与adc，并结合液相色谱-质谱联用(l c-ms)对酶切肽段进行鉴定，并利用不含有半胱氨酸肽段对lc-ms分析后的所有肽段进行归一化处理，以得到含有半胱氨酸肽段的准确的相对含量，进而计算得到半胱氨酸偶联adc的各偶联位点的占有率。该实验操作简单，占有率结果准确，避免了因药物修饰引起的肽段离子化效率差异变化导致的定量误差，很好的解决了目前adc分析位点占有率定量准确性低的问题。
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1.一种半胱氨酸偶联ADC的偶联位点的占有率的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S3包括：
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述S31包括：
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述裸抗中不含半胱氨酸肽段和所述ADC中相同序列不含半胱氨酸肽段选自所述LC-MS分析后响应值最高的前n条序列的肽段，n为3-10之间的自然数。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述S32包括：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述S1包括：
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，利用还原剂进行所述还原反应；
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，采用烷基化试剂进行所述烷基化反应；
9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，利用蛋白酶进行所述酶解，所述蛋白酶包括内切蛋白酶Arg-C、内切蛋白酶Arg-N、内切蛋白酶Lys-C、内切蛋白酶Lys-N、内切蛋白酶Asp
10.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在所述酶解前，对所述烷基化的裸抗所述烷基化的ADC进行过滤；
11.一种半胱氨酸偶联ADC的偶联位点分布的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
12.一种半胱氨酸偶联ADC的药物抗体比的计算方法，其特征在于，所述计算方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种半胱氨酸偶联adc的偶联位点的占有率的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述s3包括：
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述s31包括：
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述裸抗中不含半胱氨酸肽段和所述adc中相同序列不含半胱氨酸肽段选自所述lc-ms分析后响应值最高的前n条序列的肽段，n为3-10之间的自然数。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述s32包括：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述s1包括：
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，利用还原剂进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：殷薛飞，毕克楠，平双双，
申请(专利权)人：上海凯莱英生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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