【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及epha抑制剂在诱导减数分裂中的应用。
技术介绍
1、儿童肿瘤发病率为1.0‰～1.5‰，大约30％的患者由于肿瘤放疗或化疗会导致永久不育。对于儿童期放/化疗之前的生育力保存，由于保留的睾丸组织中生精细胞尚未进入减数分裂，没有形成成熟精子，利用体外精子发生技术完成体外精子发生以及睾丸组织重建精子发生，有着非常重要的意义。然而，由于目前体外精子发生技术尚未成熟，精子发生常阻滞在精原或分化为精母细胞的比例低，导致体外精子发生失败或效率低下，因此如何让精原细胞进入减数分裂的比例提高非常重要。
2、精原干细胞(spermatogonial stem cells，sscs)是能自我更新维持自身适量恒定，又能定向分化产生精母细胞的一类未分化精原细胞。epha是酪氨酸蛋白激酶受体家族成员，参与肿瘤发生和精子发生。相关文献报道，epha激活精原细胞的自我更新，抑制epha可能会对于精原细胞进入减数分裂有正向作用。
3、因此，开发一种能在不改变细胞凋亡水平的前提下，高效诱导未分化的精原细胞分化为精母细胞的药物以及诱导方法对于体外诱导减数分裂发生模型的建立有极高的意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提出一种epha抑制剂在诱导减数分裂，制备诱导未分化的精原细胞分化为精母细胞的试剂或药物，以及制备治疗减数分裂阻滞的试剂或药物中的应用，专利技术人发现，epha抑制剂能够在不影响细胞凋亡情况下诱导未分化的精原细胞进入减数分裂，提高精母细胞
2、本专利技术技术方案如下：
3、本专利技术的第一个目的是提供epha抑制剂在制备治疗减数分裂阻滞的试剂或药物中的应用。
4、本专利技术的第二个目的是提供epha抑制剂在制备诱导减数分裂的试剂或药物中的应用。
5、本专利技术的第三个目的是提供epha抑制剂在制备诱导体外精子发生的试剂或药物中的应用。
6、基于上述的第一个和第二个目的，本专利技术所述减数分裂为未分化的精原细胞分化为精母细胞。
7、基于上述的三个目的，在某个特殊的实施例中，所述epha抑制剂为nvp-bhg712isomer。
8、nvp-bhg712 isomer是nvp-bhg712的位置异构体，分子式为c26h20f3n7o，化学名为4-甲基-3-(2-甲基-6-吡啶-3-基)-2h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-氨基)-n-(3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺，cas号为2245892-85-5，结构式如式ⅰ所示。nvp-bhg712 isomer与epha2和ephb4显示保守非键结合，作为epha的抑制剂在实验中应用。
9、
10、进一步的，所述epha抑制剂的使用剂量为2μm-200μm。
11、进一步的，所述epha抑制剂的使用剂量为2μm、20μm、50μm、100μm、200μm；
12、进一步优选的，所述epha抑制剂的使用剂量为100μm。
13、进一步的，所述epha抑制剂抑制未分化的精原细胞特异蛋白表达，促进精母细胞特异性蛋白的表达，保证减数分裂的发生，所述未分化的精原细胞特异蛋白为cdh1、plzf；所述精母细胞特异性蛋白为ly6k、sycp3。
14、cdh1是经典的未分化的精原细胞特异膜蛋白，其表达将抑制精原细胞进入减数分裂。本专利技术中，专利技术人发现epha抑制剂能够有效抑制cdh1的表达，说明epha抑制剂能够有效促进未分化的精原细胞分化为精母细胞。
15、plzf是经典的未分化的精原细胞特异标记蛋白，其表达将抑制未分化的精原细胞进入减数分裂。本专利技术中，专利技术人发现epha抑制剂能够有效抑制plzf的表达，说明epha抑制剂能够有效促进未分化的精原细胞分化为精母细胞。
16、ly6k是精母细胞的特异膜蛋白。在本专利技术中，专利技术人发现，epha抑制剂能够有效促进ly6k的表达，说明epha抑制剂能够有效提高精原细胞分化为精母细胞的比例。
17、sycp3是经典的精母细胞特异标记蛋白，参与减数分裂染色体的联会、重组和分离。在本专利技术中，专利技术人发现，epha抑制剂能够有效促进sycp3的表达，说明epha抑制剂能够有效提高精原细胞分化为精母细胞的比例。
18、本专利技术的有益效果是：
19、1.本专利技术中的epha抑制剂能够有效促进精母细胞相关基因表达，提高诱导未分化的精原细胞分化为精母细胞的效率。
20、2.本专利技术中的epha抑制剂在2μm-200μm使用剂量内无明显毒副作用，能够在不改变细胞凋亡水平的前提下高效诱导未分化的精原细胞分化为精母细胞，对于体外诱导减数分裂发生模型的建立有极高的意义。
21、3.临床应用：本专利技术中的epha抑制剂能够修复减数分裂阻滞生精功能，高效促进精原阻滞病人精原细胞向精母细胞分化，有极高的应用价值和临床意义。
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1.EPHA抑制剂在制备治疗减数分裂阻滞的试剂或药物中的应用。
2.EPHA抑制剂在制备诱导减数分裂的试剂或药物中的应用。
3.EPHA抑制剂在制备诱导体外精子发生的试剂或药物中的应用。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述减数分裂为未分化的精原细胞分化为精母细胞。
5.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂为NVP-BHG712 isomer。
6.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂的使用剂量为2μM-200μM。
7.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂的使用剂量为2μM、20μM、50μM、100μM、200μM。
8.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂的使用剂量为100μM。
9.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂抑制未分化的精原细胞特异蛋白表达，所述未分化的精原细胞特异蛋白为CDH1、PLZF。>
10.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述EPHA抑制剂促进精母细胞特异性蛋白的表达，所述精母细胞特异性蛋白为LY6K、SYCP3。
...【技术特征摘要】
1.epha抑制剂在制备治疗减数分裂阻滞的试剂或药物中的应用。
2.epha抑制剂在制备诱导减数分裂的试剂或药物中的应用。
3.epha抑制剂在制备诱导体外精子发生的试剂或药物中的应用。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述减数分裂为未分化的精原细胞分化为精母细胞。
5.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述epha抑制剂为nvp-bhg712 isomer。
6.根据权利要求1至3任意一项所述的应用，其特征在于，所述epha抑制剂的使用剂量为2μm-200μm。
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【专利技术属性】
技术研发人员：沙家豪，袁艳，夏宇，赵远锦，郭雪江，崔益强，石丽芳，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：
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