【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测肿瘤标志物mirna155领域；尤其涉及一种金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的方法。
技术介绍
1、目前在肿瘤转移前开发精确诊断的新方法。血液中高度稳定的循环micrornas(mirnas)被认为是有前途的和微创的癌症生物标志物候选者，它是一种短的非编码rna分子(-22nt)，通过碱基对互补结合抑制或降解信使rna(mrnas)，对mrna转录后的水平起调节作用，它们的异常表达经常在各种癌症中观察到。大量研究结果表明mirna155的功能广泛，它参与机体造血细胞的发育分化、免疫细胞的发育分化、炎症反应、免疫应答、肌肉发育以及脂肪分化等许多生物过程，并在肝癌、淋巴癌、乳腺癌、胰腺癌和肺癌等多种癌组织或细胞株中呈现高表达，与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关，因此对其浓度的检测有必要性和重要意义。
2、目前，mirnas的定量多采用实时逆转录定量pcr(rt-qpcr)16和northernblotting、微阵列杂交等技术。然而，这些方法存在许多局限性，如交叉杂交和污染导致的特异性和灵敏度不足，操作过程复杂和耗时。相比之下，光电化学生物传感器在体温下反应，不需要复杂的热循环来介导变性、退火和随后的延伸；其次它利用光作为激发信号，收集换能器产生的电信号，可以避免激发信号引起的噪音。近年来已经发展成为研究热点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供了一种金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术涉及一种金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的方法，包括以下步骤：
4、步骤1，钒酸铋/金光阳极的制备，将多聚核苷酸修饰的ssdna吸附在钒酸铋/金光阳极上；
5、步骤2，将不同浓度的mirna155滴涂在光阳极上进行孵化碱基互补配对，冲洗掉多余的待测物，备用；
6、步骤3，进行光电化学检测。
7、优选地，步骤1中，具体步骤如下：
8、采用典型的电沉积碘氧铋法制备了均匀稳定的钒酸铋(bvo)薄膜，并将其转化为钒酸铋，将3mmol五水硝酸铋和40mmol碘化钠溶于100ml超纯水中，用硝酸调节溶液的ph值为1.2，得到溶液a；0.0135mmol对苯醌加入45ml乙醇中，超声分散，搅拌得到溶液b；将溶液a与溶液b混合得到电沉积溶液，得到了橙黄色碘氧铋薄膜；在沉积的碘氧铋薄膜上常温磁控溅射2s，7s和15s的金，接着滴涂40μl乙酰丙酮钒溶液0.2m，干燥，退火，冷却后在1m氢氧化钠溶液中去除多余的五氧化二钒，得到bvo/au光阳极薄膜。
9、优选地，所述电沉积溶液在沉积电位为-0.3v vs.ag/agcl的条件下进行了40s的三电极体系，工作电极、对电极和参比电极分别为fto、pt片和ag/agcl参比电极。
10、优选地，所述干燥的温度为60℃；所述退火的温度为450℃，时间为60min。
11、优选地，步骤2中，所述孵化碱基互补配对的条件是：在37℃条件下进行1个小时。
12、优选地，步骤2中，具体步骤如下：
13、将ssdna用ph＝7.4的tris 1m稀释成1um的浓度，采用10ul/cm2的滴涂在上述光阳极上，在37℃下孵育12h，保证多聚腺嘌呤与金纳米颗粒可以充分吸附，用超纯水将多余的ssdna冲洗干净，晾干备用。
14、优选地，步骤3中，检测的条件如下：
15、在电解液为0.1m的磷酸缓冲溶液ph＝7，采用am 1.5g 100mw/cm2太阳模拟光源(xe光)进行线性扫描伏安法(lsv)、计时安培法(i-t)和光电电化学阻抗谱(peis)测试；其中，光电电化学阻抗谱测试的频率范围为100khz-100mhz，幅值为10mv；
16、在360nm光源(ls360,zhner，德国)下测试了控制器强度调制光谱(cimps/cimvs)，频率范围为100khz-100mhz。
17、本专利技术具有以下优点：
18、(1)本专利技术基于钒酸铋光阳极的光电电化学(pec)性能和多聚腺苷酸进行早期血液检测mirna155；本专利技术采用一步检测法，不仅大大减少了操作步骤，而且减少了提取和扩增所需要的时间和操作，在复杂的基体中实现灵敏的检测。
19、(2)本专利技术方法将多聚核苷酸修饰的ssdna吸附在钒酸铋/金光阳极上；其次将不同浓度的mirna155滴涂在固定好互补链的光阳极上体温下孵化，进行碱基互补配对；最后将多余的待测物淌洗干净后进行光电化学检测；由于互补序列的结合引起光阳极光电流的变化，从而实现对样本中循环mirna155的超灵敏检测。
20、(3)本专利技术方法提出了一种新的无细胞mirna提取、扩增的定量检测方案，为癌症的早期诊断开辟了一条省时、操作简单、超灵敏的新途径。
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1.一种金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，步骤1中，具体步骤如下：
3.如权利要求2所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，所述电沉积溶液在沉积电位为-0.3V vs.Ag/AgCl的条件下进行了40s的三电极体系，工作电极、对电极和参比电极分别为FTO、Pt片和Ag/AgCl参比电极。
4.如权利要求2所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，所述干燥的温度为60℃；所述退火的温度为450℃，时间为60min。
5.如权利要求1所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，步骤2中，所述孵化碱基互补配对的条件是：在37℃条件下进行1个小时。
6.如权利要求1所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检
7.如权利要求1所述的金纳米颗粒吸附polyA-ssDNA检测肿瘤标志物miRNA155的方法，其特征在于，步骤3中，检测的条件如下：
...【技术特征摘要】
1.一种金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的方法，其特征在于，步骤1中，具体步骤如下：
3.如权利要求2所述的金纳米颗粒吸附polya-ssdna检测肿瘤标志物mirna155的方法，其特征在于，所述电沉积溶液在沉积电位为-0.3v vs.ag/agcl的条件下进行了40s的三电极体系，工作电极、对电极和参比电极分别为fto、pt片和ag/agcl参比电极。
4.如权利要求2所述的金纳米颗粒吸附polya-ssd...
【专利技术属性】
技术研发人员：王琳，王瑞玲，
申请(专利权)人：睿电广东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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