【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物生物，具体涉及一种野生大豆组织培养的方法。
技术介绍
1、野生大豆(glycine soja)，起源于中国，为豆科大豆属的缠绕草本植物，主要生长在田边、河岸、沼泽、树林和芦苇丛等环境中。野生大豆的生物学特征是：茎杆细，一般攀援外物生长，没有外物时可相互缠绕匍匐地面生长；三片叶，叶子比栽培大豆的小，一般呈卵圆形，且叶子正反面都有绒毛；总状花序腋生，花比较小，一般为白色或者淡紫色，花萼呈钟形，花冠呈蝶形，旗瓣近圆形；荚果较小有绒毛，一般每荚中有2～4粒种子，成熟种子呈黑褐色。
2、野生大豆是栽培大豆的近缘野生种，在我国分布广泛，自然资源较为丰富，现有资源6000余份，占世界总数的90％以上，野生大豆被列为国家二级保护植物，其在大豆育种中具有重要的价值。野生大豆的丰产潜力较大、品质优异、抗逆性和适应能力较强、含有很多抗病虫基因等，是扩大品种遗传基础的最好物种。近年来，全国的大豆专家瞄准野生大豆开展研究，目的是要通过挖掘并发挥野生大豆的基因潜力，以创新选育出优良的大豆新品种，提高我国的大豆产出，从而减少对海外大豆的依赖，保障我国的粮食安全。
3、研究建立野生大豆的组织培养技术，可以技术支撑野生大豆的种苗快繁、种质资源保存、诱变育种、倍性育种、遗传转化等，具有重要意义。
4、目前有关大豆组织培养技术的报道主要集中于栽培大豆，而对野生大豆进行组织培养的研究报道较少，主要存在以下问题：1.由于野生大豆和栽培大豆是两个不同的物种，它们在形态、基因组和遗传多样性等方面存在显著的差异，栽培大豆的
5、因此，如何克服现有技术的不足是目前植物生物
亟需解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种野生大豆组织培养的方法，该方法可以高效、快速、大量地培养出优质野生大豆组培苗，可应用于野生大豆的种苗快繁、种质资源保存、诱变育种、倍性育种、遗传转化等方面，具有重要意义。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种野生大豆组织培养的方法，包括以下步骤：
4、a、种子的采收和处理：在野生大豆生长季，当野生大豆成熟后，采收饱满、无病虫害、完好且无开裂的野生大豆豆荚，然后自然阴干处理；
5、b、种子的清洗和灭菌：将经a步骤处理后的豆荚剥开，挑选出饱满、无病虫害的种子，然后进行种子的清洗和灭菌处理；
6、c、初代培养：将经b步骤处理后的种子接种到初代培养基中，于25±2℃下培养，当种子萌发生长成高5.0～7.0cm、生长健壮的植株时，完成初代培养；
7、所述的初代培养基为：基础培养基ms+6-苄氨基嘌呤0～0.8mg/l+萘乙酸0～0.01mg/l+白砂糖25～30g/l+琼脂粉5.5～5.8g/l，ph为5.8～6.0；
8、d、成苗培养：将c步骤得到的植株切成含腋芽的茎段；然后将含腋芽的茎段接种到成苗培养基中，于25±2℃下培养成苗；
9、所述的成苗培养基为：改良的基础培养基ms+6-苄氨基嘌呤0.5～1.0mg/l+萘乙酸0.01～0.05mg/l+白砂糖25～30g/l+琼脂粉5.5～5.8g/l，ph为5.8～6.0；所述的改良的基础培养基ms是n h4no3、kno3、kh2po4的含量为基础培养基ms中n h4no3、kno3、kh2po4相应各自含量的1.7倍、1.3倍、2.35倍，其余成分浓度保持与基础培养基ms一致。
10、进一步，优选的是，a步骤中，自然阴干处理的具体方法为：
11、将野生大豆豆荚装入40目的尼龙网袋，不碰撞、不挤压豆荚，并放置于清洁、通风、无鼠害、常温、阴凉的环境中，放置的时间长为1.0年～1.5年，以让其充分的自然阴干。
12、进一步，优选的是，b步骤中，种子清洗的具体方法为：
13、先用体积浓度为1％～2％的洗洁精水溶液浸泡15～20s，然后无菌水浸洗5～10s，最后用体积分数75％的酒精浸泡消毒10～15s。
14、进一步，优选的是，b步骤中，种子灭菌的具体方法为：
15、先用质量分数0.2％升汞溶液灭菌6～8min，再用无菌水浸泡清洗20～25min，最后用无菌滤纸吸干种子的表面水分。
16、进一步，优选的是，c步骤中，培养时，光照强度为2900～3400lx，光照时间为12～14h/d，培养时间为13～15d。
17、进一步，优选的是，d步骤中，所述的含腋芽的茎段长为0.8～1.5cm。
18、进一步，优选的是，d步骤中，培养时，光照强度为3500～4000lx，光照时间为15～17h/d，成苗培养的时间为18～20d。
19、进一步，优选的是，d步骤中，还包括增殖培养，具体为：将成苗切成含腋芽的茎段，所述的含腋芽的茎段长为0.8～1.5cm；然后将含腋芽的茎段接种到成苗培养基中，于25±2℃下培养成苗；依此反复循环。
20、进一步，优选的是，d步骤中，增殖培养的继代周期为18～20d。
21、本专利技术中，琼脂粉的强度为1200g/cm2。
22、本专利技术c步骤中，初代培养时的种子发芽率达96％以上。
23、本专利技术d步骤中，野生大豆成苗培养时的生长速度较快，成苗率为100％，生根率达100％，根系发达，根从基部发出，基部无愈伤组织，苗生长势较好、健壮，无玻璃化；增殖时的增殖系数可达3.00以上。
24、本专利技术将c步骤得到的植株切成含腋芽的茎段时，茎段包括顶端的茎尖在内；含有茎尖这部分的茎段长度优选为0.8～1.0cm，其余茎段长度优选为1.0～1.5cm。
25、本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：
26、(1)本专利技术通过野生大豆的种子培养形成植株，再经过植株的含腋芽的茎段成苗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种野生大豆组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，A步骤中，自然阴干处理的具体方法为：
3.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，B步骤中，种子清洗的具体方法为：
4.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，B步骤中，种子灭菌的具体方法为：
5.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，C步骤中，培养时，光照强度为2900～3400Lx，光照时间为12～14h/d，培养时间为13～15d。
6.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，D步骤中，所述的含腋芽的茎段长为0.8～1.5cm。
7.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，D步骤中，培养时，光照强度为3500～4000Lx，光照时间为15～17h/d，成苗培养的时间为18～20d。
8.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，D步骤中，还包括增殖培养，具体为：将成苗切成含腋芽的
9.根据权利要求8所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，D步骤中，增殖培养的继代周期为18～20d。
...【技术特征摘要】
1.一种野生大豆组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，a步骤中，自然阴干处理的具体方法为：
3.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，b步骤中，种子清洗的具体方法为：
4.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，b步骤中，种子灭菌的具体方法为：
5.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法，其特征在于，c步骤中，培养时，光照强度为2900～3400lx，光照时间为12～14h/d，培养时间为13～15d。
6.根据权利要求1所述的野生大豆组织培养的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓亮，杨进成，李艳兰，张玉荣，左丽娟，张钟，姚万福，胡新洲，段永华，邓成忠，方吉祥，陈佳清，周翠英，蔡述江，张莉，黄晓霞，李艳，
申请(专利权)人：玉溪市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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